一种改进的顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药物中三甲胺的技术

摘要

本文描述了一种适用于测定动物源性药物中三甲胺（TMA）的顶空气相色谱-串联四极杆质谱（HS-GC-MS/MS）方法。该方案包括样品预处理、顶空处理、分析条件、方法验证以及动物源性药物中TMA的测定。

摘要

动物源性药物具有鲜明的特点和显著的疗效，但大多有明显的鱼腥味，导致临床患者的依从性较差。三甲胺（TMA）是动物源性药物中关键的鱼腥味成分之一。由于加入碱液后快速的酸碱反应导致顶空小瓶压力增加，导致TMA从顶空小瓶中逸出，阻碍了动物源性药物鱼腥味的研究进展，因此使用现有的检测方法很难准确识别TMA。在这项研究中，我们提出了一种受控检测方法，该方法引入了石蜡层作为酸和碱液之间的隔离层。通过恒温炉加热使石蜡层缓慢液化，可以有效控制TMA的产量。该方法表现出令人满意的线性、精密的实验和回收率，重现性好，灵敏度高。为动物源性药物除臭提供技术支持。

引言

利用动物器官和/或其副产品衍生的产品（此处称为动物源性药物）来治疗人类疾病正受到越来越多的关注。在治疗癌症、心血管疾病、肝硬化、乳腺炎等疾病中发挥重要作用，具有疗效强、用量小、临床疗效显著、特异性强等优点。但动物源性药物一般有明显的鱼腥味，影响患者依从性很大，^{对儿童尤其}不利^1,2。腥味主要来源于药物中所含的蛋白质、氨基酸、脂肪等物质，经脂肪酸氧化、氨基酸降解等方式分解，产生多种具有鱼腥味的物质²、^3、4。其中，三甲胺（TMA）是一种具有鱼腥味的挥发性气体，广泛存在于腐烂或腐烂的动物源性食品中⁵。

到目前为止，气相色谱（GC）、液相色谱（LC）、离子色谱、分光光度法、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）和传感器法已被普遍用于检测环境、食物和尿液中的TMA6,7,8,9。鉴于气相色....

研究方案

有关Pheretima，Periplaneta americana和Hirudo的药材的信息，请参见表1。成都中医药大学徐润春教授将他们鉴定为Pheretima aspergillum（E.Perrier），Periplaneta americana L.和Whitmania pigra Whitman的干燥尸体。

1. 标本提取

1. 用草药研磨机（见材料表）粉碎Pheretima，Periplaneta americana和Hirudo，通过2号（筛孔径：0.8毫米）和4号（筛孔径：0.25毫米）标准药物筛筛选药粉，并在两个筛子之间收集粉末以获得所需的样品粉末。
   注意： Pheretima 在粉碎后蓬松，因此其粉末不需要过筛。
2. 在50 mL塑料离心管中取1 g粉末（精确到0.001 g），加入20 mL 5%三氯乙酸（TCA）溶液（见 材料表），并用高速分散均质器在1,000 ^rmin-1 下匀浆1分钟。
3. 匀浆后，在室温下以1,717× g 离心5分钟，在玻璃漏斗....

讨论

动物源性药物来自动物的全身、器官或组织、生理或病理产物、排泄物或分泌物以及加工产品。TMA是动物源性药物中鱼腥味的重要来源;它是一种典型的恶臭物质，嗅觉阈值非常低（0.000032 × ^10-6 V/V）和强烈的鱼腥味¹³。目前，常用的HS-GC-MS方法无法稳定、准确地检测动物源性药物中的TMA。

该方案在几个方面进行了改进：（1）TMA更具极性和碱性。该方?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Centrifuge	Beckman Coulter Trading (China) Co.	SSC-2-0213
Chinese herbal medicine grinder	Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory	HX-200K
Convection oven	Sanyo Electric Co., Ltd	MOV-112F
Decapper for 20 mm Aluminum caps	ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc	V1750004
Electronic balance	Shimadzu Corporation Japan	AUW220D
Gas chromatography mass spectrometry	Shimadzu Corporation Japan	TQ-8050 NX
Headspace Vial	ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc	25760200
Homogenizer	Shanghai biaomo Factory	FJ200-SH
Preassembled Cap	ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc	L4150050
Sample sieve	Zhenxing Sieve Factory	/
SH-Volatile Amine	Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd	227-3626-01
Sodium hydroxide	Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd	2022101401
Solid paraffin wax	Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory	20221112
Trichloroacetic acid	Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd	2022102001
Trimethylamine hydrochloride	Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd	AF22022108
Ultra-pure water system	Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd	UPR-11-5T