טכניקה משופרת לזיהוי טרימתילאמין ברפואה מן החי על ידי Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Summary

כאן מתוארת שיטת ספקטרומטריית מסה מרובעת של גז ראש (HS-GC-MS/MS) המתאימה לקביעת טרימתילאמין (TMA) בתרופות שמקורן מן החי. הפרוטוקול כולל טיפול מקדים לדגימה, טיפול במרחב הראש, תנאי ניתוח, תיקוף מתודולוגי וקביעת TMA בתרופות שמקורן בבעלי חיים.

Abstract

לתרופות מן החי יש מאפיינים ייחודיים והשפעות מרפא משמעותיות, אך לרובן יש ריח דגים ברור, וכתוצאה מכך היענות לקויה של חולים קליניים. טרימתילאמין (TMA) הוא אחד ממרכיבי ריח הדג העיקריים ברפואה מן החי. קשה לזהות TMA במדויק באמצעות שיטת הזיהוי הקיימת בשל הלחץ המוגבר בבקבוקון הראש הנגרם על ידי התגובה החומצית-בסיסית המהירה לאחר הוספת lye, הגורמת ל-TMA לברוח מבקבוקון headspace, מה שמעכב את התקדמות המחקר של ריח הדג של תרופות שמקורן בבעלי חיים. במחקר זה הצענו שיטת זיהוי מבוקרת שהציגה שכבת פרפין כשכבת בידוד בין חומצה לליי. קצב ייצור TMA יכול להיות נשלט ביעילות על ידי הנזלה איטית של שכבת הפרפין באמצעות חימום תנור תרמוסטטי. שיטה זו הראתה ליניאריות משביעת רצון, ניסויים מדויקים והתאוששויות עם יכולת שחזור טובה ורגישות גבוהה. היא סיפקה תמיכה טכנית לנטרול ריחות של תרופות שמקורן בבעלי חיים.

Introduction

טיפול במחלות אנושיות על ידי שימוש במוצרים שמקורם בחלקי בעלי חיים ו / או תוצרי הלוואי שלהם (המכונים כאן תרופות מן החי) זוכה לתשומת לב מוגברת. הם ממלאים תפקיד חשוב בטיפול בסרטן, מחלות לב וכלי דם, שחמת הכבד, דלקת השדים ומחלות אחרות, עם יתרונות של השפעה חזקה, מינון קטן, ויעילות קלינית משמעותית וספציפית. עם זאת, תרופות שמקורן מן החי בדרך כלל יש ריח דגים בולט, אשר משפיע מאוד על ההיענות של החולים, והם שליליים במיוחד עבור ילדים ^1,2. ריח הדג מגיע בעיקר מהחלבונים, חומצות האמינו, השומנים וחומרים אחרים הכלולים בתרופה, אשר מפורקים באמצעות חמצון חומצות שומן, פירוק חומצות אמינו ודרכים אחרות לייצר מגוון חומרים בעלי ריח דגים <....

Protocol

ראו טבלה 1 למידע על החומרים הרפואיים של Pheretima, Periplaneta americana ו-Hirudo. הם זוהו על ידי פרופ' שו רונצ'ון, מאוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית, כגופותיהם המיובשות של Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. ו-Whitmania pigra Whitman.

1. מיצוי דגימות

1. מרסקים את Pheretima, Periplaneta americana ו-Hirudo בעזרת מטחנת צמחים (ראו טבלת חומרים), מנפים את האבקה הרפואית דרך מס' 2 (צמצם מסננת: 0.8 מ"מ) ומס' 4 (צמצם מסננת: 0.25 מ"מ) מסננות תרופות סטנדרטיות, ואוספים את האבקה בין שתי ....

תוצאות

דיאגרמות סכמטיות של עקרון העיבוד מראש והפעולה של פרוטוקול זה מוצגות באיור 1 ובאיור 2, בהתאמה. זמן השיא של TMA היה 2.3 דקות, עם צורת שיא חדה וללא הפרעות מזיהומים אחרים (איור 3). מדידת הטווח הליניארי של 0.1-10 מיקרוגרם/מ"ל תמיסה סטנדרטית TMA, עם ריכוז TMA כ?.......

Discussion

תרופות מן החי מגיעות מכל הגוף, איברים או רקמות, מוצרים פיזיולוגיים או פתולוגיים, הפרשות או הפרשות, ומוצרים מעובדים של בעלי חיים. TMA הוא מקור חשוב לריח דגים בתרופות מן החי; זהו חומר בעל ריח רע טיפוסי עם סף ריח נמוך מאוד (0.000032 × ^10-6 V/V) וריח דגים חזק¹³. כיום, שיטת HS-GC-MS הנפוצה אינה .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Centrifuge	Beckman Coulter Trading (China) Co.	SSC-2-0213
Chinese herbal medicine grinder	Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory	HX-200K
Convection oven	Sanyo Electric Co., Ltd	MOV-112F
Decapper for 20 mm Aluminum caps	ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc	V1750004
Electronic balance	Shimadzu Corporation Japan	AUW220D
Gas chromatography mass spectrometry	Shimadzu Corporation Japan	TQ-8050 NX
Headspace Vial	ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc	25760200
Homogenizer	Shanghai biaomo Factory	FJ200-SH
Preassembled Cap	ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc	L4150050
Sample sieve	Zhenxing Sieve Factory	/
SH-Volatile Amine	Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd	227-3626-01
Sodium hydroxide	Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd	2022101401
Solid paraffin wax	Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory	20221112
Trichloroacetic acid	Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd	2022102001
Trimethylamine hydrochloride	Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd	AF22022108
Ultra-pure water system	Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd	UPR-11-5T