神经损伤大鼠1次推拿干预后24 h内疼痛变化特征

摘要

我们提出了一种使用推拿操作模拟器对轻微慢性缩窄损伤大鼠进行“三手三穴”推拿治疗的方案，并通过行为分析测试疼痛变化和使用酶联免疫吸附测定法测试炎症因子表达的变化来评估 24 小时内推拿的有效镇痛时间点。

摘要

推拿作为中医的外治方法，在临床和基础研究中已被证明对周围神经性疼痛 （pNP） 具有镇痛作用。但推拿镇痛效果的最佳时间点可能因损伤感觉不同而不同，影响推拿镇痛启动机制的探索。

本研究以轻微慢性缩窄损伤 （minor CCI） 模型大鼠模拟 pNP，并使用智能推拿操作模拟器模拟三种方法（按压、拔毛、揉捏）和三种穴位（银门 BL37、成山 BL57 和杨灵泉 GB34）进行推拿治疗。本研究通过检测冷敏阈值 （CST） 、机械撤退阈值 （MWT） 和热撤退潜伏期 （TWL） 评估了轻度 CCI 模型大鼠 24 h 内疼痛的变化和推拿镇痛疗效的最佳时间点。此外，该研究通过 Elisa 检测评估了 IL-10 和 TNF-α 表达变化。结果表明，推拿具有即时和持续的镇痛作用。对于 CST、MWT、TWL 3 个不同的损伤敏感性阈值以及 IL-10 和 TNF-α 2 个细胞因子，干预后 24 h 内推拿的镇痛效果在不同时间点差异显著。

引言

周围神经性疼痛 （pNP） 是指由周围躯体感觉神经系统的病变或疾病引起的疼痛，表现为一系列症状和体征，痛觉过敏是主要症状之一 ^1,2。痛觉过敏是由有害刺激（包括针刺、寒冷和热）引起的疼痛加剧³。已经进行了大型流行病学研究，结果表明 pNP 是最常见的，神经性疼痛的患病率为 6.9%-10%⁴。pNP 可由多种疾病引起，包括神经损伤、带状疱疹后神经痛、痛苦的糖尿病多发性神经病、多发性硬化症、中风、癌症^等5。如今，治疗 pNP 的主要方法是药物治疗，但效果并不理想;而且副作用很大，这是个人和社会经济负担沉重的主要原因⁶。

推拿是一种绿色、经济、安全、有效的中医外治方法⁷.许多临床研究已经证明了推拿对 pNP 的镇痛作用，基础研究已经验证了推拿的即时和累积镇痛作用 ^8,9。推拿的主要累积镇痛机制是降低炎症因子的水平并抑制神经胶质细胞的活化

研究方案

北京中医药大学动物保护与使用委员会 （BUCM-4-2022082605-3043） 批准了本研究中使用的所有程序。

1. 动物和研究设计

1. 获得 49 只 8 周龄的雄性 Sprague-Dawley （SD） 大鼠，体重 200 ± 10 克。
2. 采用随机数字表法，将大鼠分为假手术组（n = 7）、模型组（n = 7）、推拿组后立即（n = 7）、推拿组后6 h（n = 7）、推拿组后12 h（n = 7）、推拿组后18 h（n = 7）和推拿组后24 h（n = 7）。

2. 建立次要 CCI 大鼠模型（图 1）

注意：对次要 CCI 进行建模的方法如之前的研究 22,23,24 中所述。

1. 允许 SD 大鼠适应性喂养 7 天。建模前让大鼠禁食 2-3 小时。
2. 将大鼠放入装满 3-5% 异氟醚的盒子....

讨论

该研究使用次要 CCI 模型模拟临床坐骨神经损伤引起的 pNP。次要 CCI 模型涉及通过结扎对神经干进行持续、慢性的压迫和约束，伴有结扎线逐渐肿胀，导致坐骨神经内水肿，并在 3-5 天内形成稳定的慢性疼痛^27,28。在初步研究中，研究组发现，次要 CCI 模型组在建模后的^第 7 天比经典模型组更稳定，使其更适合短期实验设.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia machine	Ruiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, China	R500	Animal respiratory anesthesia related equipment
Chromic intestinal suture	Shandong Boda Medical Products Co., Ltd., China	BD210903	An absorbable surgical suture mainly made from collagen protein processed from the intestines of healthy young goats
Electronic Von Frey instrument	Bioseb, USA	BIO-EVF5	An instrument for detecting mechanical withdrawal threshold
Intelligent cold and hot plate pain detector	Anhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd,China.	ZH-6C	An instrument for detecting cold sensitivity threshold
Isoflurane	Ruiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, China	R510-22-10	An anesthetic
Multi-function full-wavelength microplate reader	Molecular Devices (Shanghai) Co., Ltd.	SpectraMax M2	An instrument for detecting optical density (OD)
Thermal analgesia device	Chengdu Techman Software Co., Ltd., China	PL-200	An instrument for detecting thermal withdrawal latency