基于新型口堵的鼠牙髓暴露模型的建立及其在牙髓炎研究中的应用

摘要

本文提出了一种简化的方案，用于使用创新的口堵在小鼠中建立牙髓炎模型，然后进行随后的组织学分析。

摘要

牙髓炎是自然牙齿脱落的常见原因，会导致发炎牙髓中的坏死和生物活性丧失。揭示牙髓炎的机制及其有效治疗是牙髓病学研究的持续重点。因此，了解牙髓内的炎症过程对于改善牙髓保存至关重要。与其他体 外 实验相比，鼠牙髓炎模型为观察牙髓炎的病理进展提供了更真实和遗传多样化的背景。然而，尽管小鼠具有成本效益和可及性，但由于它们的体积小、协调性差和耐受性低，使用小鼠会带来困难，使口腔内和牙科手术复杂化。该协议引入了一种新颖的设计和应用，即口腔堵嘴以暴露小鼠牙髓，从而促进更有效的口内手术。口腔堵嘴由大多数牙医都可以轻松使用的牙弓组成，可以显着加快手术准备，即使是第一次手术也是如此。Micro-CT、苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色和免疫荧光染色（immunofluescing sing）检测形态和细胞表达的变化。本文的目的是帮助研究人员建立一种更具可重复性且要求更低的程序，以使用这种新型的口腔堵嘴创建牙髓炎症模型。

引言

牙髓是牙齿的一个组成部分，负责多种基本功能，如营养供应、牙本质形成、感觉功能和防御反应¹。然而，被硬组织包围的牙髓容易受到深龋、牙髓炎、创伤或后续治疗的伤害和损伤 ^2,3。功能性牙髓的缺失会增加牙齿脆弱的风险⁴.此外，年轻恒牙牙髓活力的丧失会对牙齿成熟产生不利影响，而目前的假牙技术无法恢复健康牙髓提供的神经反馈⁴.这种情况促使研究人员探索管理发炎牙髓的替代解决方案，而不仅仅是去除。

2007 年，Murray 等人开始将组织工程应用于再生牙髓学，从而引发了人们对牙髓保存和再生的兴趣⁵。然而，发炎的牙髓组织带来了挑战，因为细胞会释放 IL-6 等炎症因子，IL-6 会招募炎症细胞并导致细胞坏死、牙髓活力丧失和功能恢复并发症 ^6,7。因此，了解炎症和相关的细胞死亡对于保护重要牙髓的进展至关重要。已经进行了许多实验来探索炎症牙髓在体内或体外的分子生物学 ^8,9

研究方案

本研究的实验程序经四川大学华西口腔医学院伦理委员会（WCHSIRB-D-2021-125）批准。成年C57BL / 6小鼠购自中国成都的Gempharmatech实验动物公司。上颌第一磨牙的整个牙冠在出生后 21 天萌出。手术小鼠的年龄应大于21天，具有正常活力¹¹。在这里，使用 6 至 8 周龄的小鼠进行建模。 图 1 是一个流程图，显示了所使用的协议。

1.术前准备（图2）

1. 获取以下仪器：立体显微镜、固定板、医用胶带、口腔堵嘴、直径0.6mm的微创牙科毛刺、牙科高速牙科手机、8# C+锉、加热垫、1 mL注射器、无菌棉球、眼钳。
2. 获得以下药物：麻醉混合物，兽药膏。

2.口塞的准备

1. 通过腹膜内注射麻醉混合溶液（10%盐酸氯胺酮+ 5%甲苯噻嗪+ 85%无菌等渗盐水）以0.007mL / g体重称重并麻醉小鼠，并通过脚趾捏法确认适当的麻醉。将眼科润滑膏涂抹在眼睛上，以防止手术时因干燥而造成眼睛受伤。
   注意：医用帽子、口罩、手套和工作服以及其他基本....

讨论

作为牙齿内孤立的软组织，牙髓在维持牙齿的生物活性方面发挥着至关重要的作用，但仍然高度敏感。保留这种重要的牙髓已成为最近牙髓治疗中首选的初始方法，因此需要全面了解牙髓的炎症机制¹⁶。炎症微环境的时空波动和牙髓炎中驻留细胞类型之间的相互作用使其通过 体外 研究的研究变得复杂¹¹.相反， 体内 研究通过复制在人类中发现的生?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal
C57/B6J mice	Gempharmatech Experimental Animals Company	C57/B6J	For the establishment of pulp exposure
Equipment
1 mL syringe	Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD.	SB1-074(IV)	Apply in drug injection.
8# C+ file	Readysteel	0010047	Apply in exposing the roof of pulp chamber.
Anesthesia Mix solution			10% ketamine hydrochloride+ 5% xylazine + 85% sterile isotonic saline.
DAPI Staining Solution	Beyotime	C1005	Apply in immunofluorescence staining for counter-staining of nucleus.
Dental high-speed dental handpiece	Jing yuan electronic commerce technology	WJ-422	Apply in pulp exposure.
Heavy wire cutter	Jirui Medical Instrument Co., Ltd.	none	Apply inarc cutting.
Hematoxylin and Eosin Stain kit	Biosharp	BL700B	For the histological analysis of the slides.
IL-6 antibody	Novus	NBP2-89149	Apply in immunofluorescence staining to detect the inflammation of the dental pulp.
Ketamine(Ketamine hydrochloride)	Vet One, Boise, Idaho, USA	C3N VT1	100mg/kg, IP. Apply in nesthetization.
Medical tap	3M	1530	Apply in mice immobilization.
Orthodontic arch wire	Shanghai Wei Rong Medical Apparatus Co. LTD.	K417	Diameter of 8µm
Round dental burr (0.6 mm)	Shofu global	072208	Apply in removing enamel and shallow layer of dentin.
Young loop bending plier	Jirui Medical Instrument Co., Ltd.	none	Apply in arc bending.