Istituzione di un modello di esposizione alla polpa murina con un nuovo bavaglio orale per la ricerca sulla pulpite

Riepilogo

Questo articolo presenta un protocollo semplificato per stabilire un modello di pulpite nei topi utilizzando un innovativo bavaglio orale, seguito da una successiva analisi istologica.

Abstract

La pulpite, una causa comune di perdita naturale dei denti, porta alla necrosi e alla perdita di bioattività nella polpa dentale infiammata. Svelare i meccanismi alla base della pulpite e il suo trattamento efficace è un obiettivo costante della ricerca endodontica. Pertanto, comprendere il processo infiammatorio all'interno della polpa dentale è fondamentale per migliorare la conservazione della polpa. Rispetto ad altri esperimenti in vitro , un modello di pulpite murina offre un contesto più autentico e geneticamente diversificato per osservare la progressione patologica della pulpite. Tuttavia, l'uso dei topi, nonostante la loro economicità e accessibilità, pone difficoltà a causa delle loro piccole dimensioni, scarsa coordinazione e bassa tolleranza, complicando le procedure intraorali e dentistiche. Questo protocollo introduce un nuovo design e l'applicazione di un bavaglio per esporre la polpa di topo, facilitando procedure intraorali più efficienti. Il bavaglio, composto da un'arcata dentale prontamente disponibile per la maggior parte dei dentisti, può accelerare notevolmente la preparazione chirurgica, anche per le prime procedure. La micro-CT, la colorazione con ematossilina-eosina (HE) e la colorazione in immunofluorescenza sono state utilizzate per identificare i cambiamenti nella morfologia e nell'espressione cellulare. Lo scopo di questo articolo è quello di aiutare i ricercatori a stabilire una procedura più riproducibile e meno impegnativa per la creazione di un modello di infiammazione della polpa utilizzando questo nuovo bavaglio.

Introduzione

La polpa dentale, parte integrante del dente, è responsabile di molteplici funzioni essenziali come l'apporto di nutrienti, la formazione della dentina, la funzione sensoriale e le reazioni di difesa¹. Tuttavia, la polpa dentale, circondata da tessuto duro, è suscettibile di lesioni e danni da carie profonde, pulpiti, traumi o terapie successive ^2,3. L'assenza di polpa dentale funzionale aumenta il rischio di fragilità dei denti⁴. Inoltre, la perdita di vitalità della polpa nei denti permanenti giovani può influire negativamente sulla maturazione dei denti e le a....

Protocollo

Le procedure sperimentali in questo studio sono state approvate dal comitato etico della West China School of Stomatology, Sichuan University (WCHSIRB-D-2021-125). I topi adulti C57BL/6 sono stati ottenuti dalla Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, Cina. L'intera corona del primo molare mascellare erutta 21 giorni dopo la nascita. I topi per l'intervento chirurgico dovrebbero avere più di 21 giorni con una vitalità normale¹¹. Qui, per la modellazione venivano utilizzati topi di età compresa tra 6 e 8 settimane. La Figura 1 è un diagramma di flusso che mostra il protocollo utilizzato.

Discussione

Essendo il tessuto molle solitario all'interno dei denti, la polpa dentale svolge un ruolo cruciale nel mantenimento della bioattività del dente, ma rimane altamente sensibile. La conservazione di questa polpa vitale è diventata l'approccio iniziale preferito nei recenti trattamenti endodontici, richiedendo una comprensione completa dei meccanismi infiammatori della polpa dentale¹⁶. La fluttuazione spazio-temporale del microambiente infiammatorio e le interazioni tra i tipi di cellule residenti .......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal
C57/B6J mice	Gempharmatech Experimental Animals Company	C57/B6J	For the establishment of pulp exposure
Equipment
1 mL syringe	Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD.	SB1-074(IV)	Apply in drug injection.
8# C+ file	Readysteel	0010047	Apply in exposing the roof of pulp chamber.
Anesthesia Mix solution			10% ketamine hydrochloride+ 5% xylazine + 85% sterile isotonic saline.
DAPI Staining Solution	Beyotime	C1005	Apply in immunofluorescence staining for counter-staining of nucleus.
Dental high-speed dental handpiece	Jing yuan electronic commerce technology	WJ-422	Apply in pulp exposure.
Heavy wire cutter	Jirui Medical Instrument Co., Ltd.	none	Apply inarc cutting.
Hematoxylin and Eosin Stain kit	Biosharp	BL700B	For the histological analysis of the slides.
IL-6 antibody	Novus	NBP2-89149	Apply in immunofluorescence staining to detect the inflammation of the dental pulp.
Ketamine(Ketamine hydrochloride)	Vet One, Boise, Idaho, USA	C3N VT1	100mg/kg, IP. Apply in nesthetization.
Medical tap	3M	1530	Apply in mice immobilization.
Orthodontic arch wire	Shanghai Wei Rong Medical Apparatus Co. LTD.	K417	Diameter of 8µm
Round dental burr (0.6 mm)	Shofu global	072208	Apply in removing enamel and shallow layer of dentin.
Young loop bending plier	Jirui Medical Instrument Co., Ltd.	none	Apply in arc bending.