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Method Article
* 这些作者具有相同的贡献
采用小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 模型,从激活期和免疫效应功能的角度研究 CD4 T 细胞在 EAE 初始和复发中的作用。
多发性硬化症 (MS) 是一种自身免疫性疾病,其特征是免疫细胞浸润和中枢神经系统 (CNS) 脱髓鞘。实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 是研究 MS 的原型动物模型。在这项研究中,我们旨在研究 CD4 T 细胞在 EAE 启动和复发中的作用,重点关注激活期和免疫反应。为了创建 EAE 小鼠模型,用完全弗氏佐剂 (CFA) 乳化的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MOG)35-55 对雌性小鼠进行免疫。每天评估临床评分,结果表明 EAE 组小鼠表现出经典的复发缓解模式。苏木精-伊红 (H&E) 和 luxol 固蓝 (LFB) 染色分析显示 EAE 小鼠中 CNS 中炎细胞显着浸润和脱髓鞘。关于激活期,CD4+CD69+效应T(Teff)细胞和CD4+CD44+CD62L-效应记忆T(Tem)细胞都可能有助于EAE的启动,然而,复发阶段可能以CD4+CD44+CD62L-Tem细胞为主。此外,在免疫功能方面,辅助性 T (Th)1 细胞主要参与启动 EAE。然而,Th1 和 Th17 细胞都有助于复发阶段,并且在 EAE 病理过程中调节性 T (Treg) 细胞的免疫抑制功能受到抑制。
多发性硬化症 (MS) 是一种自身免疫性疾病,其特征是免疫细胞浸润中枢神经系统 (CNS) 并脱髓鞘 1,2。最近的一项研究表明,它是影响年轻人的最常见致残性疾病,其发病率在全球范围内持续增加3。实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 是一种 MS 原型动物模型,可模拟人类 MS4 炎症期的许多方面。从免疫功能的角度来看,初始尚未遇到抗原的 CD4 T 细胞称为辅助性 T(Th) 0 细胞。这些细胞经历成熟和激活过程以表现出各种功能。CD4 T 细胞根据其特定功能可分为几个亚群,包括 Th1、Th2、调节性 T (Treg)、滤泡辅助性 T (Tfh)、Th17、Th9 和 Th22 细胞5。Th1 和 Th17 细胞亚型是 EAE6 的关键发病机制因素,这是一个普遍的共识。Th1 细胞可以分泌干扰素γ (IFN-γ),Th17 细胞分泌白细胞介素 (IL)-17 和其他炎症因子,这些因子可以激活其他免疫细胞,如小胶质细胞和星形胶质细胞。这些细胞产生炎性细胞因子7,如 IL-18、IL-12、IL-23 和 IL-1β,可进一步诱导 Th1/Th17 细胞的免疫反应,导致进行性脱髓鞘和轴突损伤。从激活期的角度来看,CD4 T 细胞具有发育成不同细胞亚群和分化状态的预定命运,包括幼稚 T 细胞、效应 T 细胞和记忆 T 细胞8。初始 CD4 T 细胞在不同环境中增殖并分化为具有不同功能的各种效应子亚群9。大多数效应细胞是短暂的,少量 T 细胞发育成记忆 T 细胞,当再次遇到相同的抗原时,这些细胞表现出快速的效应功能,并为宿主提供高效和长期的保护10,11。
尽管目前的研究表明 CD4 T 细胞在 EAE 的发展中起着重要作用,但目前尚不清楚根据其激活期和免疫效应功能分类的不同 CD4 T 细胞亚群如何促进 EAE 的发生和复发。在本研究中,我们通过免疫髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MOG)35-55 肽在 C57BL6/J 小鼠中建立了 EAE 模型,并研究了 EAE 的发生和复发,重点关注 CD4 T 细胞的活化期和免疫功能。
在本研究中,共有 18 只 6 至 8 周龄的雌性 C57BL/6J 小鼠被随机分为对照组 (n = 6) 和 EAE 组 (n = 12)。小鼠购自宁夏医科大学实验动物中心。将小鼠饲养在温度和湿度受控的房间中,光照/黑暗循环 12 小时,可自由获得淡水和食物。在研究开始前已获得宁夏医科大学实验动物伦理委员会的伦理批准。
1. C57BL/6 小鼠复发缓解型 EAE 的开发
2. 组织学染色分析
3. LFB 染色分析
4. 流式细胞术分析
5. 通过流式微球阵列分析细胞因子
临床评分评估
如图 1 所示,对照组的小鼠没有表现出任何临床症状。用 MOG35-55 免疫的 EAE 组小鼠在免疫后约 12 天表现出尾部麻痹。到第 16 天,症状达到完全性后肢麻痹 (定义为高峰期,Peak)。之后,症状逐渐缓解。小鼠的临床症状在 25 天左右加重,并在大约 30 天达到完全后肢麻痹 (定义为复发期,RR)。值得注意的是,症状持续...
MS 是 CNS 最普遍的自身免疫性脱髓鞘疾病,影响着全球数百万人17。EAE 是模拟 MS18 临床病理特征的典型动物模型。研究表明,由于 CNS 轴突和神经元的退化,MS 患者会出现认知障碍和其他残疾 19,20,21。在 EAE 模型的高峰期和 RR 期,小鼠的尾巴和后肢表现出麻痹。此外?...
作者没有什么可披露的。
这项工作得到了宁夏自然科学基金 (2022AAC03601 和 2023AAC02087) 和宁夏医科大学研究基金 (XM2019052) 的支持。感谢宁夏医科大学医学科技研究中心的支持。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anesthesia machine evaporator | Norvap | 20-17368 | |
Isoflurane | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | 792632 | |
70 μm cell strainer | XIYAN Co.,Ltd. | 15-1070 | |
Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45 Antibody | Biolegend | 103128 | |
APC anti-mouse CD4 Antibody | Biolegend | 100616 | |
Automatic cell counter | Jiangsu JIMBIO technology Co., LTD | JIMBIO iCyta S2 | |
BD* Cytometric Bead Array (CBA) Mouse Th1/Th2/Th17 CBA Kit | BD Biosciences | 560485 | |
Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody | Biolegend | 101303 | |
Brilliant Violet 510 anti-mouse CD69 Antibody | Biolegend | 104532 | |
BV786 Rat Anti-Mouse CD62L(MEL-14) | BD Pharmingen | 563109 | |
Column Tissue&Cell Protein Extraction Kit | Shanghai Epizyme Biomedical Technology Co., Ltd | PC201Plus | |
Complete Freund's Adjuvant | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | SLCH4887 | |
Dehydrator | DIAPATH | Donatello | |
Disposable sterilized syringe (1 mL) | Yikang Group | 210820 | |
Disposable sterilized syringe (2.5 mL) | Yikang Group | 210820 | |
Disposable sterilized syringe (5 mL) | Yikang Group | 210820 | |
Dyeing machine | DIAPATH | Giotto | |
Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
Ethanol | SCRC | 100092683 | |
Fetal Bovine Serum | Procell Life Science&Technology Co.,Ltd. | FSP500 | |
FITC Hamster Anti-Mouse CD3e(145-2C11) | BD Pharmingen | 553062 | |
Flow cytometer | Becton,Dickinson and Company | FACSCelesta | |
Flow cytometer | Becton,Dickinson and Company | Accuri C6 | |
Flow Jo software | BD Biosciences | 10.8.1 | |
Frozen platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
Glass slide | Servicebio | G6004 | |
HE dye solution set | Servicebio | G1003 | |
Hematoxylin-Eosin solution | Servicebio | G1002 | |
High speed refrigerated centrifuge | Thermo Fisher Scientific | Mogafugo8R | |
Imaging system | Nikon | NIKON DS-U3 | |
Luxol fast blue staining kit | Servicebio | G1030 | |
Ms CD44 BV421 IM7 | BD Pharmingen | 564970 | |
Mycobacterium tuberculosis H37RA | BD Pharmingen | 231141 | |
Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) | AnaSpec | AS-60130-1 | |
Neutral gum | SCRC | 10004160 | |
Organizer | KEDEE | KD-P | |
Oven | Labotery | GFL-230 | |
Pathology slicer | Leica | RM2016 | |
Pertussis Toxin from Bordetella pertussis | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | P7208 | |
Phosphate buffered saline | Servicebio | G4202 | |
Pipette 0.5-10 μL | DLAB Scientific | 7010101004 | |
Pipette 100-1000 μL | DLAB Scientific | 7010101014 | |
Pipette 20-200 μL | DLAB Scientific | 7010101009 | |
RPMI-1640 | Procell Life Science&Technology Co.,Ltd. | PM150110 | |
Tee valve | Guangdong Kanghua Medical Co., LTD | A06 | |
Tissue spreader | Zhejiang Kehua Instrument Co.,Ltd | KD-P | |
Upright optical microscope | Nikon | NIKON ECLIPSE E100 | |
Xylene | SCRC | 10023418 |
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