Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
* Эти авторы внесли равный вклад
Экспериментальная модель аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ) у мышей была использована для изучения роли CD4 Т-клеток в начале и рецидиве ЭАЭ с точки зрения фазы активации и функции иммунного эффекта.
Рассеянный склероз (РС) – аутоиммунное заболевание, характеризующееся инфильтрацией иммунных клеток и демиелинизацией в центральной нервной системе (ЦНС). Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) служит прототипной моделью животных для изучения РС. В этом исследовании мы стремились изучить роль CD4 Т-клеток в инициации и рецидиве EAE, уделяя особое внимание фазе активации и иммунному ответу. Для создания модели мышей EAE самок мышей иммунизировали гликопротеином миелина олигодендроцитов (MOG)35-55, эмульгированным полным адъювантом Фрейнда (CFA). Клинические баллы оценивались ежедневно, и результаты показали, что у мышей в группе EAE наблюдался классический рецидивирующе-ремиттирующий паттерн. Анализ окрашивания гематоксилин-эозином (H&E) и luxol fast blue (LFB) выявил значительную инфильтрацию воспалительных клеток в ЦНС и демиелинизацию у мышей EAE. Что касается фазы активации, то как CD4+CD69+ эффекторные Т-клетки (Teff), так и CD4+CD44+CD62L-эффекторные Т-клетки памяти (Tem) могут вносить свой вклад в инициацию EAE, однако на стадии рецидива, вероятно, преобладали CD4+CD44+CD62L-Tem-клетки. Кроме того, с точки зрения иммунной функции, клетки-хелперы T (Th)1 в первую очередь участвуют в инициировании EAE. Тем не менее, как Th1, так и Th17 клетки вносят свой вклад в стадию рецидива, а иммуносупрессивная функция регуляторных T(Treg) клеток была подавлена в ходе патологического процесса EAE.
Рассеянный склероз (РС) – аутоиммунное заболевание, характеризующееся инфильтрацией центральной нервной системы (ЦНС) иммунными клетками и демиелинизацией 1,2. Недавнее исследование показало, что это наиболее распространенное инвалидизирующее заболевание, поражающее молодых людей, и его заболеваемость постояннорастет во всем мире. Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) является прототипной моделью РС на животных, которая моделирует многие аспекты воспалительной фазы РС4 человека. С точки зрения иммунных функций, исходные CD4 Т-клетки, которые еще не столкнулись с антигенами, называются хелперными T(Th)0-клетками. Эти клетки подвергаются процессам созревания и активации для выполнения различных функций. CD4 Т-клетки можно разделить на несколько подгрупп в соответствии с их специфическими функциями, которые включают Th1, Th2, регуляторный T (Treg), фолликулярный хелпер T (Tfh), клетки Th17, Th9 и Th225. Существует общее мнение, что подтипы клеток Th1 и Th17 являются ключевыми факторами патогенеза EAE6. Клетки Th1 могут секретировать интерферон γ (ИФН-γ), а клетки Th17 секретируют интерлейкин (IL)-17 и другие воспалительные факторы, которые могут активировать другие иммунные клетки, такие как клетки микроглии и астроциты. Эти клетки продуцируют воспалительные цитокины7, такие как IL-18, IL-12, IL-23 и IL-1β, которые могут дополнительно индуцировать иммунный ответ клеток Th1/Th17, что приводит к прогрессирующей демиелинизации и повреждению аксонов. С точки зрения фазы активации, CD4 Т-клетки обладают предопределенной судьбой развиваться в различные подмножества клеток и дифференцированные состояния, включая наивные, эффекторныеТ-клетки и Т-клетки памяти. Исходные CD4 Т-клетки пролиферируют и дифференцируются в различные субпопуляции эффекторов с различными функциями в различных условиях9. Большинство эффекторных клеток являются короткоживущими, при этом небольшая популяция Т-клеток развивается в Т-клетки памяти, которые проявляют быстрые эффекторные функции при повторном столкновении с теми же антигенами и обеспечивают хозяину высокоэффективную и долгосрочную защиту10,11.
Хотя современные исследования показывают, что CD4 Т-клетки играют значительную роль в развитии EAE, до сих пор неясно, как различные субпопуляции CD4 T-клеток, классифицируемые на основе их фазы активации и функции иммунного эффекта, способствуют инициации и рецидиву EAE. В настоящем исследовании мы создали модель EAE у мышей C57BL6/J путем иммунизации пептида гликопротеина миелина олигодендроцитов (MOG)35-55 и исследовали инициацию и рецидив EAE, уделяя особое внимание фазе активации и иммунной функции CD4 Т-клеток.
В общей сложности 18 самок мышей C57BL/6J в возрасте от шести до восьми недель были случайным образом разделены на контрольную группу (n = 6) и группу EAE (n = 12) для этого исследования. Мыши были приобретены в центре экспериментальных животных Медицинского университета Нинся. Мыши содержались в помещении с контролируемой температурой и влажностью воздуха с 12-часовым циклом света/темноты и свободным доступом к пресной воде и пище. Этическое одобрение было получено от Комитета по этике экспериментальных животных Медицинского университета Нинся до начала исследования.
1. Разработка рецидивирующей ремиттирующей ЭАЭ у мышей C57BL/6
2. Анализ гистологического окрашивания
3. Анализ окрашивания LFB
4. Анализ проточной цитометрии
5. Анализ цитокинов с помощью цитометрической матрицы шариков
Оценка клинических баллов
Как показано на рисунке 1, у мышей контрольной группы не проявлялось никаких клинических симптомов. У мышей в группе EAE, которые были иммунизированы MOG35-55, паралич хвоста наблюдался примерно через 12 дней после иммуни...
РС является наиболее распространенным аутоиммунным демиелинизирующим заболеванием ЦНС, которым страдают миллионы людей во всем мире17. EAE является типичной животной моделью для моделирования клинических патологических особенностей MS18. Исс...
Авторам нечего раскрывать.
Эта работа была поддержана Фондом естественных наук Нинся (2022AAC03601 и 2023AAC02087) и Исследовательским фондом Медицинского университета Нинся (XM2019052). Спасибо за поддержку Исследовательского центра медицинской науки и технологий Медицинского университета Нинся.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anesthesia machine evaporator | Norvap | 20-17368 | |
Isoflurane | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | 792632 | |
70 μm cell strainer | XIYAN Co.,Ltd. | 15-1070 | |
Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45 Antibody | Biolegend | 103128 | |
APC anti-mouse CD4 Antibody | Biolegend | 100616 | |
Automatic cell counter | Jiangsu JIMBIO technology Co., LTD | JIMBIO iCyta S2 | |
BD* Cytometric Bead Array (CBA) Mouse Th1/Th2/Th17 CBA Kit | BD Biosciences | 560485 | |
Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody | Biolegend | 101303 | |
Brilliant Violet 510 anti-mouse CD69 Antibody | Biolegend | 104532 | |
BV786 Rat Anti-Mouse CD62L(MEL-14) | BD Pharmingen | 563109 | |
Column Tissue&Cell Protein Extraction Kit | Shanghai Epizyme Biomedical Technology Co., Ltd | PC201Plus | |
Complete Freund's Adjuvant | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | SLCH4887 | |
Dehydrator | DIAPATH | Donatello | |
Disposable sterilized syringe (1 mL) | Yikang Group | 210820 | |
Disposable sterilized syringe (2.5 mL) | Yikang Group | 210820 | |
Disposable sterilized syringe (5 mL) | Yikang Group | 210820 | |
Dyeing machine | DIAPATH | Giotto | |
Embedding machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
Ethanol | SCRC | 100092683 | |
Fetal Bovine Serum | Procell Life Science&Technology Co.,Ltd. | FSP500 | |
FITC Hamster Anti-Mouse CD3e(145-2C11) | BD Pharmingen | 553062 | |
Flow cytometer | Becton,Dickinson and Company | FACSCelesta | |
Flow cytometer | Becton,Dickinson and Company | Accuri C6 | |
Flow Jo software | BD Biosciences | 10.8.1 | |
Frozen platform | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
Glass slide | Servicebio | G6004 | |
HE dye solution set | Servicebio | G1003 | |
Hematoxylin-Eosin solution | Servicebio | G1002 | |
High speed refrigerated centrifuge | Thermo Fisher Scientific | Mogafugo8R | |
Imaging system | Nikon | NIKON DS-U3 | |
Luxol fast blue staining kit | Servicebio | G1030 | |
Ms CD44 BV421 IM7 | BD Pharmingen | 564970 | |
Mycobacterium tuberculosis H37RA | BD Pharmingen | 231141 | |
Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) | AnaSpec | AS-60130-1 | |
Neutral gum | SCRC | 10004160 | |
Organizer | KEDEE | KD-P | |
Oven | Labotery | GFL-230 | |
Pathology slicer | Leica | RM2016 | |
Pertussis Toxin from Bordetella pertussis | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | P7208 | |
Phosphate buffered saline | Servicebio | G4202 | |
Pipette 0.5-10 μL | DLAB Scientific | 7010101004 | |
Pipette 100-1000 μL | DLAB Scientific | 7010101014 | |
Pipette 20-200 μL | DLAB Scientific | 7010101009 | |
RPMI-1640 | Procell Life Science&Technology Co.,Ltd. | PM150110 | |
Tee valve | Guangdong Kanghua Medical Co., LTD | A06 | |
Tissue spreader | Zhejiang Kehua Instrument Co.,Ltd | KD-P | |
Upright optical microscope | Nikon | NIKON ECLIPSE E100 | |
Xylene | SCRC | 10023418 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены