通过外膜周围氯化钙和弹性蛋白酶浸润的小鼠腹主动脉瘤模型

摘要

本手稿提出了一种使用氯化钙和弹性蛋白酶建立小鼠腹主动脉瘤模型的方案，结合了以前建模方法的优点。该模型可用于研究腹主动脉瘤的病理生理机制。

摘要

腹主动脉瘤 （AAA） 是一种危及生命的疾病，死亡率高。其特征是腹主动脉永久扩张，动脉直径至少增加 50%。已经引入了各种 AAA 动物模型来模拟病理生理变化并研究 AAA 的潜在机制。在这些模型中，氯化钙 （CaCl₂） 和弹性蛋白酶诱导的 AAA 模型常用于小鼠。但是，这些方法具有一定的局限性。传统的肠腔内猪胰弹性蛋白酶 （PPE） 灌注与高技术难度和高破裂率相关，而 PPE 的外膜周围给药产生不一致的结果。此外，CaCl₂ 诱导的 AAA 模型缺乏人类 AAA 特征，例如动脉粥样硬化血栓形成和动脉瘤破裂。因此，已提出将 CaCl₂ 和 PPE 的联合应用作为提高 AAA 动物模型成功率和诱导更大直径增加的一种方法。本手稿提出了一种全面的方案，用于通过在腹主动脉肾下段进行 PPE 和 CaCl₂ 的主动脉周围浸润来建立小鼠 AAA 模型。通过遵循此协议，我们可以实现大约 90% 的 AAA 形成率，同时具有技术简单性和可重复性。进一步的超声和组织学实验证实，该模型有效地复制了在人类 AAA 中观察到的形态学和病理变化。

引言

腹主动脉瘤 （AAA） 定义为腹主动脉直径增加超过 50% 或最大主动脉直径超过 3 cm。这种情况对生命构成重大威胁，动脉瘤破裂时的死亡率约为 90% ^1,2,3。目前，开放手术修复和血管内主动脉修复 （EVAR） 是 AAA 患者唯一可用的干预措施 ^4,5,6。然而，没有足够的证据支持药物治疗在抑制无手术指征的患者动脉瘤形成或减缓腹主动脉生长速度方面的有效性⁷。然而，非特异性治疗，包括持续监测最大动脉瘤直径、控制血压、抗血小板治疗和他汀类药物，以尽可能降低动脉瘤突然破裂和潜在心血管和神经系统事件的风险。尽管如此，抗血小板药物和他汀类药物在预防动脉瘤破裂中的作用仍然存在争议，需要进一步研究 ^5,7,8,9,10

研究方案

动物实验方案符合美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南（NIH Pub No. 86/23,1985），并得到四川大学华西医院机构动物护理和使用委员会的批准（批准号 202311300012）。本研究使用 8 至 10 周龄的 C57/B6J 雄性小鼠。所用试剂和设备的详细信息列在 材料表中。

1. 术前准备

1. 获得动物并在标准条件下（温度 24 °C，湿度 40%-50%，12 小时光暗循环）用干净的水喂养它们正常的食物。
2. 将化妆棉剪成 40 毫米 x 4 毫米的条状，并与剪刀、镊子和其他手术设备一起消毒。
3. 将动物放入麻醉机的诱导室中，使用 3%-3.5% 异氟醚快速诱导麻醉（遵循机构批准的方案）。此外，开具布托啡诺（1 mg/kg，肌内注射）作为抢先镇痛药物。
   1. 当鼠标不再对疼痛刺激有反应时，将鼠标从腔室中取出，然后在小鼠身上戴上面罩，用 1%-1.5% 异氟醚保持麻醉深度。每 5-10 分钟监测一次呼吸频率和深度。
4. 将鼠标仰卧在加热垫上，用胶带固定四肢，并涂上眼膏以防止干燥。
5. 使用电动剃须刀或脱毛化妆水完全去除腹部的毛发，然后用聚维酮碘和浸有乙醇的棉签以圆周运动对该区域进行至少三次消毒。<....

讨论

对 AAA 分子机制的研究需要一个稳定的动物模型。因此，自 Economou 等人在 1960 年代首次开发以来，已经建立了许多 AAA 动物模型²⁹。在这些模型中，CaCl₂ 由于其成本效益、技术简单性和可靠的可重复性而经常用于啮齿动物。然而，血管周围 CaCl₂ 浸润已被证明在建立 AAA 时不稳定。Bi 等人和 Freestone 等人报告说，即使 AAA 形成的标准定义为与.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	RWD	R550
Butorphanol	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	220608BP	1ml: 1mg
C57BL/6JGpt Male Mice	GemPharmatech	N000013
Calcium Chloride	Sigma Aldrich	C4901	100 g
Carprofen	MCE	HY-B1227	100 mg
Chow Diet	Dossy Experimental Animals Co.Ltd
Digital Caliper	Greener	IP54
Ethanol	Jinhe Pharmaceutical Co.Ltd	539682	75%/500 mL
EVG Staining Kit	Solarbio	G1597
GraphPad Prism	Graphpad		Ver 9.0.0
H&E Staining Kit	Servicebio	G1076
Insulin Syringe	BD	2143420
Isoflurane	RWD	R510-22-4	100 mL
Masson Staining Kit	Servicebio	G1006
Normal Saline	Servicebio	G4702	500 mL
Paraformaldehyde	Biosharp	BL539A	4%/500 mL
PBS, 1x	Servicebio	G4202	500 mL
Porcine Pancreatic Elastase	Sigma Aldrich	E1250	100 mg
Povidine Iodine	Yongan Pharmaceutical Co.Ltd		5%/100 mg
Prolene Polypropylene Suture	Ethicon LLC	8709H
Rodent Ultrasound System	Fujifilm	Vevo 3100LT
Stereo Microscope	Olympus	SZ61
Ultrasonic Couplant	Keppler	KL-250	250 g