Un modello murino di aneurisma dell'aorta addominale mediante cloruro di calcio periavventiziale e infiltrazione di elastasi

Riepilogo

Questo manoscritto presenta un protocollo per stabilire un modello murino di aneurisma dell'aorta addominale utilizzando cloruro di calcio ed elastasi, combinando i vantaggi dei precedenti metodi di modellazione. Questo modello può essere utilizzato per studiare i meccanismi fisiopatologici alla base degli aneurismi dell'aorta addominale.

Abstract

L'aneurisma dell'aorta addominale (AAA) è una malattia pericolosa per la vita associata ad alti tassi di mortalità. È caratterizzata dalla dilatazione permanente dell'aorta addominale con un aumento di almeno il 50% del diametro arterioso. Vari modelli animali di AAA sono stati introdotti per imitare i cambiamenti fisiopatologici e studiare i meccanismi sottostanti dell'AAA. Tra questi modelli, i modelli AAA indotti da cloruro di calcio (CaCl₂) ed elastasi sono comunemente usati nei topi. Tuttavia, questi metodi presentano alcune limitazioni. La tradizionale perfusione intraluminale di elastasi pancreatica suina (PPE) è associata a un'elevata difficoltà tecnica e a un alto tasso di rottura, mentre la somministrazione periavventiziale di DPI produce risultati incoerenti. Inoltre, il modello AAA indotto da CaCl₂ manca di caratteristiche AAA umane, come l'aterotrombosi e la rottura dell'aneurisma. Pertanto, l'applicazione combinata di CaCl₂ e PPE è stata proposta come approccio per aumentare le percentuali di successo e indurre maggiori aumenti di diametro nei modelli animali AAA. Questo manoscritto presenta un protocollo completo per stabilire un modello murino di AAA attraverso l'infiltrazione periaortica di PPE e CaCl₂ nel segmento infrarenale dell'aorta addominale. Seguendo questo protocollo, possiamo raggiungere un tasso di formazione di AAA di circa il 90% con semplicità tecnica e riproducibilità. Ulteriori esperimenti ecografici e istologici confermano che questo modello replica efficacemente i cambiamenti morfologici e patologici osservati nell'AAA umana.

Introduzione

L'aneurisma dell'aorta addominale (AAA) è definito come un aumento del diametro superiore al 50% o un diametro aortico massimo superiore a 3 cm nell'aorta addominale. Questa condizione rappresenta una minaccia significativa per la vita, con un tasso di mortalità di circa il 90% in caso di rottura dell'aneurisma ^1,2,3. Attualmente, la riparazione chirurgica a cielo aperto e la riparazione endovascolare dell'aorta (EVAR) sono gli unici interventi disponibili per i pazienti con AAA ^4,5,6....

Protocollo

Il protocollo dell'esperimento sugli animali era conforme alla Guida dell'Istituto Nazionale di Salute per la Cura e l'Uso degli Animali da Laboratorio (NIH Pub n. 86/23, 1985) ed è stato approvato dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali del West China Hospital, Università del Sichuan (Numero di approvazione 202311300012). Per questo studio sono stati utilizzati topi maschi C57/B6J di età compresa tra otto e dieci settimane. I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Materiali.

1. Preparazione preoperatoria

....

Discussione

La ricerca sui meccanismi molecolari dell'AAA richiede un modello animale stabile. Di conseguenza, numerosi modelli animali AAA sono stati stabiliti sin dal suo sviluppo iniziale da Economou et al. negli anni '60²⁹. Tra questi modelli, CaCl₂ è spesso impiegato nei roditori grazie alla sua economicità, semplicità tecnica e riproducibilità affidabile. Tuttavia, è stato dimostrato che l'infiltrazione perivascolare di CaCl₂ è instabile nell.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	RWD	R550
Butorphanol	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	220608BP	1ml: 1mg
C57BL/6JGpt Male Mice	GemPharmatech	N000013
Calcium Chloride	Sigma Aldrich	C4901	100 g
Carprofen	MCE	HY-B1227	100 mg
Chow Diet	Dossy Experimental Animals Co.Ltd
Digital Caliper	Greener	IP54
Ethanol	Jinhe Pharmaceutical Co.Ltd	539682	75%/500 mL
EVG Staining Kit	Solarbio	G1597
GraphPad Prism	Graphpad		Ver 9.0.0
H&E Staining Kit	Servicebio	G1076
Insulin Syringe	BD	2143420
Isoflurane	RWD	R510-22-4	100 mL
Masson Staining Kit	Servicebio	G1006
Normal Saline	Servicebio	G4702	500 mL
Paraformaldehyde	Biosharp	BL539A	4%/500 mL
PBS, 1x	Servicebio	G4202	500 mL
Porcine Pancreatic Elastase	Sigma Aldrich	E1250	100 mg
Povidine Iodine	Yongan Pharmaceutical Co.Ltd		5%/100 mg
Prolene Polypropylene Suture	Ethicon LLC	8709H
Rodent Ultrasound System	Fujifilm	Vevo 3100LT
Stereo Microscope	Olympus	SZ61
Ultrasonic Couplant	Keppler	KL-250	250 g