补充蛋白C1q和透明质酸在促进细胞粘附中的相互作用评价

评价补充蛋白C1q和透明质酸在促进细胞粘附方面相互作用的综合程序。我们最近定义，补充成分C1q的先天免疫系统分子在肿瘤和胎盘微环境中表达强烈，能够与细胞外基质的成分相互作用。在这种情况下，透明质酸。

提出了一种研究蛋白质在整个基因组环境中的生物功能的方法。为了研究这些分子形成细胞外基质因子细胞分裂特性的能力。为了研究这种相互作用如何能被环境中的细胞感知，我们建立了这种简单的方法，从人体组织中提取的二元细胞可以粘附在与细胞外基质（本例中为透明质酸）绑定的C1q中。

对于涂装工艺，第一步是将高分子量透明质酸与96井组织涂层微孔板结合。对于涂层，透明质酸以每毫升15微克的浓度在0.1摩尔碳缓冲液PH 9.6中稀释。轻轻的管道得到回报，以实现均匀的解决方案。

溶液的100微升用于涂覆油井。然后，板在四摄氏度下一夜之间被转移。第二天真空吸气处理井。

用 dPBS 洗一次。在相应的油井中添加 C1q 或 BSA。C1q现在以每毫升1毫克的浓度市售，每毫升25微克的浓度被稀释。

和dPBS含有0.5%BSA和0.7毫摩尔钙和镁和二分质。BSA LPS 无浓度为 0.5%和日期 PBF。然后一夜之间在四摄氏度下转移板。

C1q剂量依赖性相互作用与固定透明质酸是由酶链接免疫SA决定的。使用快速 DII 标记的单元格。亲脂追踪器快速DiI用于标记感兴趣的细胞。在 dPBS 中重新使用的细胞以每毫升一百万个细胞的浓度使用。

Fast DiI 被稀释一到 100 直接到细胞悬浮液中。细胞悬浮液手动混合，在37摄氏度下传输15分钟。孵育五分钟后，混合细胞悬浮液，再重复两次。

要去除快速 DiI 的过量，请添加 10 毫升 dPBS。轻轻上下旋转，在250克下离心7分钟。在0.1%BSA存在的情况下，将细胞颗粒重新在一毫升的人类嗜血血清自由培养基中。

透明质酸C1q基质上的细胞粘附。真空从涂层井中吸入 dPBS。将 100 微升标记的电池悬浮液分发到涂层孔中。

200微升标记的电池被拆开，用在一个带状管中，用于标准曲线生成。在37摄氏度下孵育板35分钟。从培养箱中取出盘子。

轻轻吸气不平衡的细胞。用含有0.5%BSA和0.7毫摩尔钙和镁的dPBS洗一次。通过添加200微升的解解缓冲液来加入粘附细胞。

同时在一到两次连续稀释解液缓冲液中标记的细胞后准备标准曲线。使用 544 纳米作为激发波长，使用 590 纳米作为发射波长，在无限 F 200 T-can 仪器上读取荧光信号。代表性结果。

如代表性结果所示，透明质酸上的细胞粘附力明显，与HA单独或HA绑定BSA相比，C1q具有强。每个矩阵上粘附单元格的百分比根据标准曲线计算。结论。在我们的实验中，首先我们评估了补量成分C12使用虹膜金属结合细胞外基质的能力。

其次，分析了沾染荧光染料的人类原细胞追求绑定透明质酸的能力。本研究中提出的模型是一种更简单、更便宜的方法，替代的是细胞外基质支架的 3D 模型，用于评估这种细胞对刺激组合的反应。