用噻唑橙代替溴代或替代染料进行 DNA 电泳

该协议是使用溴化乙基在电泳期间进行DNA检测的一种简单而廉价的替代方案。通过去除溴化乙基，可以使用紫外线或蓝光进行检测。蓝光不会损害DNA，这提高了下游实验成功的机会。

尝试这个真的很容易。你只需要用硫酮橙代替凝胶中的溴化乙酰胺。首先，在70毫升三醋酸-EDTA或三盐-玻酸缓冲液中混合约0.7克阿加罗斯，准备1%的迷你凝胶。

接下来，在 DMSO 中溶解硫酮橙，使 10，000X 库存溶液。虽然不是特别对光敏感，但不使用时，在黑暗中将硫酮橙色储存。对于长期储存，制作硫松橙-DMSO混合物的等分，并冷冻。

然后，将硫酮橙加入每毫升1.3微克的最终浓度，微波将阿加罗斯缓冲液和硫酮橙的混合物溶解约60秒。将阿加罗斯混合物倒入含有适当梳子的凝胶铸造装置中，使加糖溶液凝固成凝胶。要加载凝胶，请先将凝胶放在电泳装置中（如果不存在）。

然后添加 TAE 或 TBE 运行缓冲液以覆盖凝胶表面。接下来，使用加载染料，加载10微升的DNA样本。包括DNA尺寸梯供参考。

连接盖和电极，以 100 伏特运行迷你凝胶，直到加载染料在迷你凝胶中移动约 4 到 7 厘米。如果在凝胶铸造之前未应用硫佐尔橙，则将凝胶浸入含有硫酮橙的缓冲液中，轻轻搅拌约 20 分钟，或直到完全检测到带子。要使用紫外线透光器对凝胶进行可视化，请从电泳设备中去除凝胶，并将其放在紫外线透光器上。

要使用蓝光透光器或手电筒对凝胶进行可视化，请将凝胶放在蓝光转光器上，或从上方或下方将蓝色 LED 手电筒直接放在凝胶上。使用琥珀色发射过滤器过滤出蓝光，实现脱氧核糖核酸橙色复合物的荧光可视化，并保护染料。为了进一步消化或结扎，从凝胶中切出所需的DNA带，然后使用现成的试剂盒或协议提取DNA。

在凝胶成像设备中选择适当的激发和发射设置。在没有带适当滤光片的成像系统的情况下，在摄像机和凝胶蓝光激发源之间放置琥珀色滤光片。溴化乙基、硫酮橙和常见的蓝光可检测商业DNA染料之间的检测限值相似，所有三种染料的检测限值在迷你凝胶中每通道一至两个纳米。

当使用紫外线或蓝光透光器或蓝光手电筒进行兴奋时，可检测到限制消化的硫橙染色的阿加罗斯凝胶。虽然橙色硫化物似乎比溴化乙基危险性小，但仍应佩戴标准的个人防护设备，如手套和护目镜。