通过小鼠亚克拉维安静脉穿刺采集血液。在大多数研究实验室中,从小鼠身上采集血液样本至关重要。老鼠的血液采集的传统方法是尾部切割,需要微升样本少于100微升。
但是,如果在非终端时间点需要超过 100 微升的血液,则最常见的技术是复古轨道、亚曼多出血或亚门脑血采集。在一些地方,血管切口或导管被采用作为替代方法。然而,上述方法对小鼠造成伤害。
在正式研究的基础上,我们介绍了一种新的经济、温和的策略,从小鼠亚克拉维文静脉采集血液。提出了该技术的安全性和可行性,并介绍了获得血量。全身麻醉后,将鼠标放在苏平位置。
用75%乙醇清洁隔空。在穿刺前确认锁骨和超骨假体。确定锁骨中间的穿刺点。
将针头向上移动,向上向超前的 fossae 移动,只是后背的锁骨。向前移动三到四毫米后,在注射器中保持负压,然后慢慢拉回针头。在提取过程中,血液会排入注射器。
采集血液后,轻按穿刺点一到两分钟以止血。准备所需的材料,包括 75% 乙醇、胶带、脱毛剂、管、1.0 毫升注射器、针头、电子秤、肝素和盐水。经过满意的全身麻醉后,将鼠标放在手术台上,在手术台上放置两到四厘米远,以方便静脉穿刺。
将四肢固定在舒适的位置,如图 2 所示。整个程序不需要插管或机械通风。用棉签在隔膜空间周围涂抹脱毛剂。
三分钟后,用湿棉签清洗脱毛剂,去除毛皮和任何可见的污垢。用75%乙醇对隔热空间进行消毒,然后用干净的纱布干燥。用一根手指确定锁骨和超骨的位置。
找到穿刺点,靠近锁骨中间,并抓住它。将左食指横向到穿刺位点,以修复皮肤和皮下组织。将针头向上移动,在颅面朝上。
一旦针头进入皮下组织,右手无名指必须向后移动,形成负压。向前移动注射器三到四毫米,但如果没有血液排入注射器,则停止。然后慢慢拉回注射器,并保持负压。
在大多数情况下,血液会进入注射器在回拉过程中。一旦血液进入注射器,固定注射器,并保持负压,直到在注射器中收集所需的血液量。采集血液后,提取穿刺针,用棉签稍微按穿刺场一至两分钟停止出血,然后将老鼠送回笼子。
将血液样本转移到我们的肝素管中。我们在10只奎米小鼠中重复了这个程序。右侧成功执行九项程序。
在右侧的三次尝试中,有一例失败,左侧的血液采集成功。时间范围为 35 到 126 秒。血液采集量设置为约200微升。
一到四次尝试成功采集血液。血液采样在第一次尝试中成功,在两只小鼠中,在一只小鼠中进行了四次尝试,在其他小鼠中进行了两到三次尝试。所有数据都见表1。
所有动物都存活下来,在血液取样后30分钟内康复。所有观测参数的性别之间没有显著差异。总之,亚克拉维安静脉穿刺是小鼠血液采集的一种安全有效的方法。
除了尾静脉切割和复古轨道复用血收集外,该方法是可行的,适合小鼠在多个时间点的观测研究。