Raccolta del sangue attraverso puntura di vena succlavia nei topi. La raccolta di campioni di sangue dai topi è essenziale nella maggior parte dei laboratori di ricerca. Gli approcci convenzionali per la raccolta del sangue nei topi sono il taglio della coda, quando è necessario meno di 100 campioni di microliter.
Tuttavia, se sono necessari più di 100 microliter di sangue in un momento non terminale, il sanguinamento retro-orbitale, submandibolare o la raccolta del sangue submentale sono le tecniche più comunemente considerate. In alcune località l'incisione o cateterizzazione delle vene giugulare sono state adottate come metodi alternativi. Tuttavia, i metodi di cui sopra sono dolorosi per i topi.
Sulla base delle nostre ricerche formali, qui introduciamo una nuova strategia economica e delicata per la raccolta del sangue dalla vena succlavia nei topi. La sicurezza e la fattibilità, e ottenuto il volume del sangue con questa tecnica, sono presentati e discussi. Dopo l'anestesia generale, giace il topo in posizione supina.
Pulire lo spazio infraclavicolare con il 75% di etanolo. Confermare la clavicola e la fossa soprasternale prima della puntura. Identificare il sito di puntura nel mezzo della clavicola.
Spostare gli aghi superiori e verso l'alto verso la fossa soprasternale, appena posteriore alla clavicola. Dopo essersi trasferito da tre a quattro millimetri in avanti, mantenere la pressione negativa nella siringa e tirare lentamente indietro l'ago. Il sangue si drenerà nella siringa durante il ritiro.
Dopo la raccolta del sangue, premere dolcemente il sito di puntura per uno o due minuti per interrompere il sanguinamento. Preparare i materiali richiesti, tra cui 75%etanolo, nastro adesivo, agente epilante, tubi, siringa da 1,0 millilitro collegata con ago, bilancia elettronica, eparina e soluzione salina. Dopo un'anestesia generale soddisfacente, posizionare il mouse sul tavolo operatorio in posizione supina e da due a quattro centimetri di distanza dal bordo del tavolo per facilitare la puntura delle vene.
Fissare gli arti in una posizione comoda, come illustrato nella figura 2. Non era necessaria alcuna intubazione o ventilazione meccanica nell'intera procedura. Applicare l'agente epilatore intorno allo spazio infraclavicolare con tampone di cotone.
Tre minuti dopo, lavare l'agente epilante con tampone di cotone bagnato, per rimuovere la pelliccia e qualsiasi sporco visibile. Sterilizzare lo spazio infraclavicolare con il 75% di etanolo, quindi asciugare con garza pulita. Identificare la posizione dell'osso clavicolare e delle fossae soprasternali con un dito.
Individuare il sito di puntura, vicino al centro dell'osso della clavicola, e catturato su di esso. Mettere l'indice sinistro laterale sul sito di puntura per fissare la pelle e il tessuto sottocutaneo. Spostare l'ago verso l'alto in una posa cranica verso la fossa soprasternale.
Una volta che l'ago entra nel tessuto sottocutaneo, l'anulare della mano destra deve spostarsi all'indietro per formare una pressione negativa. Spostare in avanti la siringa per tre o quattro millimetri, ma fermarsi se non c'è scarico di sangue nella siringa. Quindi tirare lentamente indietro la siringa e mantenere la pressione negativa in esso.
Nella maggior parte delle occasioni il sangue entrerà nella siringa nel corso del prelievo. Una volta che il sangue entra nella siringa, fissare la siringa e mantenere la pressione negativa, fino al volume richiesto di sangue raccolto nella siringa. Dopo la raccolta del sangue, ritirare l'ago della puntura e premere leggermente il sito di puntura con tampone di cotone per uno o due minuti per smettere di sanguinare, quindi rimandare i topi in gabbia.
Trasferire il campione di sangue nel nostro tubo dell'eparina. Abbiamo ripetuto questa procedura in 10 topi Quimi. Nove procedure sono riuscite nella parte destra.
Un caso fallì all'interno di tre tentativi sul lato destro, e la raccolta del sangue riuscì sul lato sinistro. Il percorso del tempo variava da 35 a 126 secondi. Il volume della raccolta del sangue è stato impostato su circa 200 microlitri.
Alla raccolta del sangue successero da uno a quattro tentativi. Il prelievo di sangue è riuscito al primo tentativo in due topi, e a quattro tentativi in un topo, a due o tre tentativi in altri topi. Tutti i dati sono stati illustrati nella tabella 1.
Tutti gli animali sopravvissero e si ripresero entro 30 minuti dal prelievo del sangue. Non c'era alcuna differenza significativa tra il sesso per tutti i parametri osservati. In conclusione, la puntura della vena succlavia è un metodo sicuro ed efficace per la raccolta del sangue nei topi.
Oltre al taglio delle vene della coda e alla raccolta retro-orbitale del sangue in plesso, questo metodo è fattibile e adatto per ricerche osservazionali in diversi punti di tempo nei topi.
