该程序描述了三种用于研究HIV感染动态的人类免疫缺陷小鼠模型。NSG人性化小鼠综述了人类免疫力的特征。在这种情况下，允许在临床前环境中研究慢性、急性和重新激活的艾滋病毒感染。
展示细胞制备程序的将是桑德拉·梅迪纳-莫雷诺，我们集团的实验室研究主管。执行此程序时，请始终使用一次性个人防护设备，包括无菌磨砂、手套、专用鞋、鞋套、面罩、护目镜、头发和胡须盖以及无菌实验室外套。对于慢性模型，在经过认证的生物安全柜下，在 10 毫升 RPMI 1640 介质中重新发送 100 万个冷冻 CD34® 人类干细胞，并保留无菌条件。
使用悬浮液的10微升来计数和检查细胞的生存能力，通过 Trypan Blue 排除染色在血细胞计。然后在室温下以400倍g离心细胞悬浮液15分钟。丢弃上清液，在所需的浓度下在冷1X PBS中重新暂停细胞。
将细胞放在冰上直到注射。双手之间擦干净的床上用品，以掩盖接受者幼崽身上任何其他异味。然后将幼崽放入无菌的 100 平方毫米培养皿中，以及来自饲养员笼中的少量床上用品。
将 Petri 盘放入干净的运输笼中，然后将笼子放入 Carboy 运输笼中，以保护幼崽免受直接光线和噪音的干扰。在运输到辐照室时，用盖垫盖住运输笼，避免动物暴露在环境中。按照文本协议中描述的麻醉后，准备通过肝注射进行包。
为了尽量减少鼠标约束的时间，让一名调查员用干细胞悬浮液加载注射器，让另一名调查员抱住幼崽并进行注射。将 CD34® 人体干细胞悬浮液的 50 微升装入注射器，在经过认证的生物安全柜下用连接针插入注射器。用拇指和食指约束幼崽，用70%的酒精清洁注射部位。
使用浅针角将50微升的细胞直接送入肝脏，这样才能完全刺穿肝脏。在20摄氏度下为啮齿动物使用红外加热垫预热，以确保幼崽不会过度加热。将幼崽放在用无菌纱布覆盖的培养皿上一至五分钟，以便恢复。
在将幼崽归还给父母之前，请立即使用拇指和食指涂抹少量薄荷醇和桉树软膏，以避免吃人或排斥幼崽。每天检查笼子，寻找任何移植与宿主疾病的迹象，在幼崽，如干燥的皮肤，没有喂养，皮疹，或脱发。在三周大时把幼崽打奶，把它们关在不同的笼子里。
通过14周大的流动细胞切除术验证周围血液的内皮。显示了一种代表性的浇注策略，用于评估人类CD45+细胞重建和CD4+和CD8+T细胞的百分比。移植的成功率在80%至100%之间，使用来自急性模型的健康供体或接受抗逆转录病毒治疗的HIV感染患者为再活化模型产生的人类外周血单核细胞。
将全血第15毫升，以5毫升的无菌密度梯度介质放入50毫升锥形管中。在室温下以 400 倍 g 离心 30 分钟，不休息，避免布衣与密度梯度介质混合。仔细收集密度梯度介质和上细之间单核细胞的分数。
将布衣转移到含有 10 毫升 1X PBS 的 15 毫升离心管中。在室温下以300倍g离心10分钟。丢弃上流剂，通过与添加到颗粒细胞中的五毫升CK解菌缓冲液进行解化，去除剩余的红血球。
在室温下孵育四分钟。再次离心后，丢弃上经剂，再用 10 毫升 1X PBS 或 RPMI 1640 介质重新暂停。使用细胞悬浮液的10微升来计算细胞，并检查通过血细胞计中的 Trypan Blue 排除染色的可行性。
通常，每毫升血液获得100万到200万个细胞，其生存能力超过95%。离心后，像以前一样，丢弃上一提液，并调整细胞数到所需的浓度。将 200 个 1X PBS 微升中的 350 万个外周血单核细胞装入经认证的生物安全柜下带连接针的注射器中。
将鼠标从笼子上取下，然后用尾巴握住它，这样它就可以抓住网眼，向后轻轻牵引。然后将食指和拇指放在动物的肩膀上，抓住颈部松动的皮肤，用中指稳定背部。向后滑动鼠标头，使鼠标背面位于其头部上方。
这使得腹腔中的内脏向后置换，并降低注射期间刺穿内脏器官的风险。用 70% 酒精清洁注射部位。通过腹壁穿透准备好的注射器，在注射细胞前吸气。
如果任何材料被吸入，请取出注射器并丢弃。否则，在取出注射器并丢弃注射器之前，将细胞缓慢注射到内腔中。将动物返回到其笼子，并在注射后三周内通过流动细胞测量验证周围血液的含量。
通过耳朵标记识别小鼠。仔细观察这些实验中使用的小鼠，每次手术后每天两次出现危难症状。然后按照文本协议中所述进行艾滋病毒注射。
在艾滋病毒注射之后，在重新激活模型中具有类似动力学的慢性和急性模型中，在感染后两到三周通常可检测到血浆病毒载量迅速增加。病毒载量的增加与CD4：CD8比率的下降相吻合。这些变化在对照小鼠中未观察到。
值得注意的是，在人性化PBMC NSG成人小鼠模型中，观察到CD4：CD8比率的初始反转，并沿监测时间进行重组。当对艾滋病毒感染小鼠进行抗逆转录病毒治疗时，CD4：CD8比率抑制病毒载量和恢复情况如预期的那样达到与未受感染对科小鼠类似的水平。通常，经过两到三周的治疗后，在慢性、急性和重新激活模型中观察到病毒载量减少和CD4：CD8比率增加。
使用推荐的辐照剂量，避免致命过量或排斥移植细胞。在注射过程中不要完全刺穿肝脏，并使用床上用品来掩盖大坝会认为异味的气味。这三种模型允许测试抗病毒化合物、抗HIV抗体或其他影响病毒复制的生物物质。
此外，它们还允许艾滋病毒免疫治疗的适应性转移实验。NSG人性化小鼠可以部分或全部与人体细胞重组，以对病原体或药物作出反应，模仿人类免疫系统的复杂性。所有基本的生物措施都需要严格遵守，因为NSG人性化小鼠可能同时感染穆林和人类病原体，特别是在使用HIV病毒操纵的情况下。
