幽门螺杆菌感染与胃病理的小鼠模型

这种方法可以帮助回答胃肠病学领域关于微生物群成员，特别是血小球菌属对炎症和癌症的影响的关键问题。该技术的主要优点是，它允许研究螺旋杆菌感染及其对胃在生理条件下的影响。该技术的影响延伸到开发用于预防或消除螺旋杆菌感染及其后果的疗法，包括抗生素、药物或疫苗。

这些方法提供对螺旋杆菌感染的发病机制的见解。然而，一些技术可能适应其他胃肠道病原体的研究。一般来说，新方法的个体将难以制备能够建立小鼠感染的细菌注射剂。

Helicoli 细菌分离物是已知的小鼠殖民菌株，这些菌株在体外没有经过广泛的亚培养。此外，应记录这些菌株的体外亚栽培数量。将细菌悬浮液加入 15 毫升聚苯乙烯管中，并使用塑料环将每个培养的 10 到 20 微升液滴转移到单独的玻璃显微镜幻灯片上。

然后，以100倍的放大率评估相对比显微镜下细菌的生存能力和活力。只有当大多数细菌具有杆状时，才使用 H.pylori 接种。H.felis接种应主要含有利形细菌。

将接种器装入单独的一次性单毫升注射器中。为每个注射器配备一个 23 量针，并使用塑料石蜡膜将一次性聚乙烯导管连接到每根针上。接下来，通过颈部和尾部的擦伤，手动约束一只六到八周大的特异性无病原体和无螺旋杆菌的小鼠，并将一个导管插入打开的下颚中心。

引导导管在导管向食道，延长小鼠的脖子，让轻松通过食道进入胃和远离气管，直到大多数或所有的导管不再可见，并感觉到阻力。然后，将至少10倍的细菌送到第五细菌，以确保最佳的殖民化和疾病病理学。实验结束时，用细的弯曲剪刀打开腹腔切除胃部。

沿着更大的曲率切开胃，轻轻洗两次器官，每次洗涤一个50毫升的新鲜PBS管，以去除任何残留的食物。第二次洗涤后，将组织放入焦油、六厘米的塑料培养皿中，以记录湿重。平整胃部后，将样品分分两部分，分成两个相等的组织片段，包括蚂蚁、身体和非腺膜区域。

取出非腺体区域，称重每个胃的一半，然后再将一块组织储存在适当的溶液中，用于计划的下游分析。将胃组织的另一半加入含有10%甲醛的15毫升圆锥管中，10秒后将组织压扁在管顶面。当组织被贴在管壁上时，将样品重新浸入甲醛中至少24小时。

计算感染后胃中可行的H.pylori的数量，使储存在BHI中的胃样本均质化，并在新鲜、无菌的汤中对产生的胃同质质进行重复的连续稀释。将预干马血加量（HBA）的盘子，加上额外的抗生素，分成三或四个部分，并使用 Miles 和 Misra 技术的适应，在每个胃的一段上添加 10 到 100 微升均质稀释剂。用无菌的塑料环铺开同质物，让板干燥。

然后，将盘子倒置在含有培养皿水和气体包装的气罐中。然后，在37摄氏度下孵化罐子4至7天。当可以观察到菌落时，枚举包含 10 到 100 个孤立菌落的段。

安乐死后，胃从动物身上收获并称重。非腺区被移除，胃被分成两个相等的一半，包括蚂蚁和身体。成功的殖民化通常通过执行可行的计数和随后从条纹到HBA板的胃同质物中对单个菌落进行计数来确认。

请注意，从小鼠胃微生物群或大量H.pylori菌落中感染细菌的存在可能会使H.pyloriCFO的枚举复杂化。或者，PCR 可用于使用针对 H.felis 和 H.pylori ureB 基因的 325 基对区域的特定验证底向器来验证感染。在这个具有代表性的实验中，野生型C57 Black-6小鼠表现出中度炎症迹象，包括感染H.felis后六个月的增生和腺体萎缩，以及亚木科萨的细胞渗透。

在同一时间点，在敲除小鼠中观察到更严重的炎症，在靠近细胞渗透的地方观察到淋巴卵泡的附加存在。H.felis 细菌也可以在受感染的小鼠胃组织的吉姆萨染色部分可视化。按照这个程序，可以执行其他方法，如定量PCR，免疫组织化学，或免疫荧光，以回答有关在螺旋杆菌感染期间诱导的宿主反应类型的其他问题。

该技术开发后，为微生物学和胃肠病学领域的研究人员探索幽门螺杆菌在人类胃病中的因果关系铺平了道路。看完这段视频后，你应该对如何复制感染与螺旋杆菌物种的小鼠有一个良好的理解，并研究与感染相关的病理学。不要忘记，本协议中使用的 Helico 细菌菌株具有传染性，因此在使用这些细菌时应始终遵循标准的生物安全程序。