测量果蝇的作物运动性和食物通度

此方法用于通过计算作物收缩和检测消化中的食物分布来评估作物的动能。这种技术的优点是它不断评估作物的动性。成本低，易于执行。

这种方法使得使用只是填充物作为模型来研究胃肠道食物通道的消化功能。帮助演示这个过程的将是我实验室的研究生习近平。在 25 摄氏度的培养箱中，保持含有 10 毫升新鲜食物的小瓶中的苍蝇，湿度为 60%，光线为 12 小时，暗周期为 12 小时。

确保大量欲望表型同时通过用标准食物培养带干酵母的年轻苍蝇，然后用湿酵母将成年苍蝇转移到小瓶中，并允许两天产卵。将卵子留在孵化器中，以发育和转移成年苍蝇到新瓶收集更多的卵子。每天收集被围住的雄蝇或雌蝇，用标准食物培养它们，达到所需的年龄。

用二氧化碳麻醉苍蝇，用200微升PBS将一只苍蝇转移到解剖板井中。用一对钳子抓住苍蝇的胸，用另一对钳子打开胸部，然后向相反的方向拉两端以打开腹部。小心地把庄稼和肠道从身体里拿出来，等待苍蝇醒来。

当苍蝇清醒时，在一分钟内计算作物收缩次数。重复收缩计数五次，在每个计数之间等待 30 秒。称重蓝色染料，以20%的浓度溶解在PBS中。

然后在食品冷却过程中搅拌至煮沸的液体维护食品，最终浓度为5%。将苍蝇与饥饿的食物一起放在小瓶中四个小时后，用染色的食物将它们转移到新的小瓶中，并培养它们，以度过所需的时间，请记住，在维护条件下，食物在两个小时内通过苍蝇。将麻醉苍蝇转移到含有200微升PBS的解剖板井中。

使用钳子抓住胸部的苍蝇，用另一对钳子取出头部，然后用PBS将身体转移到新井中，然后用轻轻的摇动清洗，以去除附着在身上的染料。用两对钳子打开腹部，小心地将整个肠道与身体分开。将作物从整个肠道中切开，放入100微升PBS的管子中。

将其余的肠道放在另一个管与100微升PBS，然后使用移液器提示研磨作物和肠道，并溶解在PBS染料。重复解剖，直到收集到足够的作物和内脏。采集样品后，以最高速度离心管一分钟，将90微升上流液转移到96井板的井中。

以每毫升1倍到7至10至4克的浓度进行一系列标准蓝色染料稀释，并将其添加到井中。测量井 630 纳米的吸光度，并使用标准测量来绘制吸光度与染料浓度的线图。然后使用曲线计算样品的染料浓度。

作物运动性测定用于计算三天老NPRL突变苍蝇的作物收缩和遗传背景控制。发现这种突变可显著降低作物收缩率。为了进一步确认NPRL2对作物的功能，通过给苍蝇喂食染色食物来检测食物运动。

所有苍蝇的作物中都有类似的染料量，但NPRL2苍蝇的肠道染料较少，这可能与作物收缩率降低有关。键入此协议时，请确保作物与身体保持接触，并且苍蝇是活的和清醒的。否则，作物将失去收缩能力。

在解剖过程中，作物和肠道应接触。如果染料泄漏到解剖介质中，则不能再使用样品。让我们只是填补我们的胃口和食物弹出在短时间内也可以通过检测整个肠道的染料量进行评估。