Bu yöntem, mahsul daralması sayma ve sadece sindirim gıda dağılımı tespit yoluyla ürün hareketliliğini değerlendirmek için kullanılır. Bu tekniğin avantajı sürekli ürün hareketliliğini değerlendirir olmasıdır. Düşük maliyetli ve gerçekleştirmesi kolay.
Bu yöntem gastrointestinal sistemde gıda pasajları sindirim fonksiyonu çalışma için bir model olarak sadece dolgu kullanmak mümkün kılar. Süreci niçin göstermek için yardımcı Junmeng Xi, benim laboratuvar bir yüksek lisans öğrencisi olacaktır. %60 nem ve 12 saat ışık, 12 saat karanlık döngüsü ile 25 derece santigrat santigrat kuvözde 10 mililitre taze yapılmış gıda içeren şişelerde sinekler korumak.
Arzu fenotip çok sayıda kuru maya ile standart gıda ile genç sinekler kültüre tarafından aynı anda eclose sinekler emin olun sonra ıslak maya ile bir şişe yetişkin sinekler aktarmak ve yumurta yumurtlamak için iki gün izin. Geliştirmek ve daha fazla yumurta toplamak için yeni bir şişe yetişkin sinekler aktarmak için kuvözde yumurta bırakın. Eclosed erkek veya kadın sinekler her gün toplamak ve istenilen yaşa standart gıda ile yeni şişeler onları kültür.
Sinekleri karbondioksitle anesthetize edin ve bir sineği 200 mikrolitre PBS ile bir kesme plakasına aktarın. Cımbız bir çift ile toraks kavramak ve cımbız başka bir çift ile toraks açın sonra karın açmak için ters yönde uçları çekin. Dikkatle vücuttan ekin ve bağırsak almak ve sinek uyanmak için bekleyin.
Sinek uyanık olduğunda, bir dakika içinde mahsulün kaç kez büzüldin sayısını sayın. Her sayım arasında 30 saniye bekleyerek beş kez kontraksiyon u sayıyorum. Mavi boyayı tartın ve %20 konsantrasyonda PBS'de eritin.
Daha sonra gıda soğutma işlemi sırasında% 5 son konsantrasyona haşlanmış sıvı bakım gıda içine karıştırın. Dört saat boyunca açlık gıda ile şişelerde sinek tuttuktan sonra, bakım koşullarında gıda yaklaşık iki saat içinde sinek geçer akılda tutarak, istenilen süre için boyalı gıda ve kültür ile yeni şişeler içine aktarın. 200 mikrolitre PBS içeren bir diseksiyon plakasına anestezili bir sineği aktarın.
Toraks da sinek kavramak ve cımbız başka bir çift ile baş kaldırmak için cımbız kullanın, sonra PBS ile yeni bir kuyuya vücut transferi ve vücuda bağlı boya kaldırmak için nazik sallayarak yıkayın. Cımbız iki çift ile karın açın ve dikkatle vücuttan tüm bağırsak ayırın. Tüm bağırsak mahsulünü alın ve 100 mikrolitre PBS içeren bir tüpe koyun.
PBS 100 mikrolitre ile başka bir tüp bağırsak geri kalanı koyun sonra kırpma ve bağırsak öğütmek ve PBS boya çözmek için pipet ipuçları kullanın. Yeterli ekin ve bağırsak lar toplanana kadar diseksiyonu tekrarlayın. Örnekleri topladıktan sonra tüpleri bir dakika boyunca en yüksek hızda santrifüj edin ve 90 mikrolitre süpernatant ile 96 kuyu plakasına aktarın.
Bir kere10'dan 7-10'a mililitre başına 4 grama kadar konsantrasyonlarda bir dizi standart mavi boya seyreltme yapın ve bunları kuyulara ekleyin. Kuyuların 630 nanometrede emiciliği ölçün ve emicilik vs boya konsantrasyonunun bir çizgi grafiği çizmek için standart ölçümleri kullanın. Daha sonra örneklerin boya konsantrasyonu hesaplamak için eğriyi kullanın.
Kırpma hareketliliği tsurük üç günlük NPRL mutant sinekler ve genetik arka plan kontrolleri üzerinde kırpma kasılmaları saymak için kullanılmıştır. Mutasyonun mahsul daralma oranını önemli ölçüde azalttığı bulunmuştur. NPRL2'nin mahsul üzerindeki işlevini doğrulamak için, sineklere boyalı gıda ların beslenmesi ile gıda hareketi tespit edildi.
Tüm sinekler mahsul de boya benzer miktarlarda vardı ama NPRL2 sinekler azalmış ürün daralma oranı ile ilişkili olabilir bağırsak daha az boya vardı. Bu protokolü yazarken, mahsulün vücuda temas ettiğinden ve sinek hayatta ve uyanık olduğundan emin olun. Aksi takdirde, ürün sözleşme yeteneğini kaybedersiniz.
Diseksiyon işlemi sırasında, ürün ve bağırsak temas olmalıdır. Boya diseksiyon ortamına sızarsa, numune artık kullanılamaz. İştahımızı dolduralım ve kısa sürede gıda nın dışarı atılması da tüm bağırsaktaki boya miktarı tespit edilerek değerlendirilebilir.
