이 방법은 작물 수축을 계산하고 단지 소화에서 음식 분포를 검출하여 작물 운동성을 평가하는 데 사용됩니다. 이 기술의 장점은 작물 운동성을 지속적으로 평가한다는 것입니다. 그것은 낮은 비용과 수행하기 쉽습니다.
이 방법을 사용하면 위장의 음식 통로에서 소화 기능을 연구하는 모델로 필러만 사용할 수 있습니다. 그 과정을 입증하는 데 도움이 되는 것은 제 실험실대학원생인 준멩 시(Junmeng Xi)가 될 것입니다. 60%의 습도와 12시간 암울한 주기로 25도 의 섭씨 25도 의 갓 만든 음식 10 밀리리터가 들어있는 바이알에서 파리를 유지하십시오.
많은 수의 욕망 표현형이 건조한 효모로 표준 음식으로 어린 파리를 배양하여 동시에 닫히는지 확인하고 성인파리를 젖은 효모로 유리병으로 옮기고 달걀 누워를 위해 이틀간 기다립니다. 인큐베이터에 계란을 두고 성인 파리를 새로운 유리병으로 옮겨 더 많은 계란을 수집합니다. 매일 밀폐된 남성 또는 암컷 파리를 수집하고 원하는 나이에 표준 음식과 함께 새로운 바이알로 배양하십시오.
이산화탄소로 파리를 마취하고 PBS 200 마이크로리터를 잘 해부하는 접시에 날아갑니다. 두꺼비에 핀셋을 넣고 흉부에서 비행을 잡은 다음 다른 핀셋으로 흉부를 열고 복부를 열기 위해 반대 방향으로 끝을 당깁니다. 조심스럽게 몸에서 작물과 용기를 가지고 비행이 깨어 날 때까지 기다립니다.
비행이 깨어있을 때, 1 분에 작물 계약의 횟수를 계산합니다. 각 카운트 사이에 30초를 기다리며 다섯 번 카운트하는 수축을 반복합니다. 파란색 염료의 무게를 측정하고 20 %의 농도로 PBS에 용해하십시오.
그런 다음 식품 냉각 과정에서 삶은 액체 유지 보수 식품에 넣고 5 %의 최종 농도로 저어줍니다. 4 시간 동안 굶주린 음식과 유리병에 파리를 유지 한 후, 염색 된 음식과 함께 새로운 유리로 전송하고 원하는 시간 동안 그들을 문화, 유지 보수 조건에서 식품은 약 2 시간 만에 비행을 통과 한다는 것을 명심하십시오. 200 마이크로리터를 포함하는 해부 판으로 마취 된 비행을 전송합니다.
핀셋을 사용하여 흉부에서 비행을 파악하고 다른 핀셋으로 머리를 제거한 다음, 몸을 PBS로 새로운 우물로 옮기고 몸에 부착 된 염료를 제거하기 위해 부드러운 흔들림으로 씻어 내세요. 두 쌍의 핀셋으로 복부를 열고 몸에서 전체 용기를 조심스럽게 분리하십시오. 전체 창자의 작물을 벗고 PBS의 100 마이크로 리터와 튜브에 넣어.
PBS의 100 마이크로 리터와 다른 튜브에 창자의 나머지부분을 넣어 다음 파이펫 팁을 사용 하 여 작물과 창 자를 갈기 하 고 PBS에서 염료를 용해. 충분한 작물과 내장이 수집 될 때까지 해부를 반복합니다. 샘플을 수집한 후 1분 동안 가장 빠른 속도로 튜브를 원심분리하고 96개의 웰 플레이트로 90마이크로리터의 상퍼리터를 전달합니다.
1회 10~7일 에서 10까지 농도에서 밀리리터당 4그램까지 다양한 표준 블루 염료 희석제시리즈를 만들고 우물에 추가합니다. 우물의 630 나노미터에서 흡광도를 측정하고 표준 측정을 사용하여 흡광도 대 염료 농도의 라인 그래프를 플롯합니다. 그런 다음 곡선을 사용하여 샘플의 염료 농도를 계산합니다.
작물 운동성 분석3 일 된 NPRL 돌연변이 파리및 유전 배경 제어에 작물 수축을 계산 하는 데 사용 되었다. 돌연변이는 작물 수축의 비율을 현저하게 감소시키기 위하여 찾아냈습니다. 작물에 NPRL2의 기능을 더 확인하기 위해, 음식 운동은 파리에 염색 된 음식을 공급하여 검출되었다.
모든 파리는 작물에 비슷한 양의 염료를 가지고 있었지만 NPRL2 파리는 작물 수축률 감소와 관련될 수 있는 용기에 염료가 적어졌다. 이 프로토콜을 입력할 때 작물이 신체에 계속 접촉하고 비행이 살아 있고 깨어 있는지 확인하십시오. 그렇지 않으면 작물은 계약 할 수있는 능력을 잃게됩니다.
해부 과정에서 작물과 용기에 접촉해야합니다. 염료가 해부 매체로 누출되면 더 이상 샘플을 사용할 수 없습니다. 식욕을 채우고 짧은 시간 내에 음식 배출을 채우자 전체 장에서 염료 양을 감지하여 평가할 수도 있습니다.
