小鼠的转宫胎儿气管闭塞模型

这项技术最重要的优点是可逆性、降低动物成本和维护费用以及缩短怀孕期。此外，动物死亡率降低，因为不需要子宫切除术。基因研究的机会也更大。

该技术可用于研究先天性隔膜气喘的病理生理学。它也可以应用于了解肺部的其他疾病，如奶牛和肺发育不良。首先允许老鼠在下午6点到次日上午9点在同一个笼子里交配。

要确定E0，观察阴道塞，它有一个同质的，外带连接到阴道壁和内区是纤维，包括一些精子，形成纠缠质量与插头材料的纤维混合。记录小鼠在交配时和E10上的重量，以确保持续怀孕，并在E16.5进行手术。对手术过程中使用的仪器进行消毒。

将手术平台预热至24摄氏度，并在手术前准备热盐水。为恢复创造温暖的环境，并将湿食物留在笼子里供早期喂养。用酒精和碘来清洁腹部表面，并在整个手术过程中保持无菌状态。

对怀孕大坝的腹腔切除术进行垂直切口，并分别切割所有层。识别每一侧的子宫角，并确定手术的候选胎儿。如果每侧胎儿数量均匀，则每个子宫角中两个胎儿进行手术。

如果有一个奇怪的数字，每个子宫角的一个胎儿。使用 2 倍放大镜进行可视化，以横向方式定位子宫角。使用眼睛和尾巴作为向导，将幼崽朝上放置在两根手指之间。

对小狗的头部施加柔和的压力，使头部得以伸展和颈部的可视化。使用气管针头和 6 乘 0 聚丙烯缝合线执行气管闭塞或 TO。将胎盘放在一边，远离针头的出入口。

将针头横向插入子宫侧面，从胎盘穿过颈部前部的三分之一。然后将针头轻轻地移到颈部的中线。将其直接指向前部。

然后退出气管之间的颈部和对面的胡萝卜护套和子宫。打结缝合线，注意保持膜和子宫壁的完整性。更换腹部的子宫角，在关闭前将两毫升热无菌盐水注射到腹腔中。

放置一个运行5乘0多胰蛋白缝合关闭腹部壁。用不运行的丝绸缝合线关闭皮肤。每公斤丁丙诺啡每公斤在尿道内用于镇痛0.1微克，使大坝在温暖的孵化器中恢复。

观察，操作的动物可以养活自己，并保持它独自在单独的笼子里。通过粪便部分通过E18.5收获所有胎儿，并通过观察胎儿的运动来检查其生存能力。称体重所有的胎儿。

在胸腔上进行垂直切口切除术，解剖肺部。并称它们来计算肺与体重的总比。将组织冷冻在液氮、最佳切割温度化合物和干冰中。

使用冷冻统计器将样品切成10微米的部分，并将其安装在多晶硅涂层滑梯上。在 60 摄氏度下在夜间烘烤滑梯，用血氧林和 eosin 染色烤滑梯。使用宽场显微镜，以 10 到 20 倍的放大倍数拍摄的幻灯片图像。

对于蛋白质和DNA分析，捕捉冻结组织，并在300微升的放射性免疫沉淀检测缓冲器中同质化。离心机在18，000 x g和4摄氏度5分钟。然后提取和量化蛋白质、DNA和RNA。

TO组的平均体重、肺部重量和LBWR高于对照组。在托组中，肺DNA量和DNA与蛋白质的比例较高。在肺RNA中观察到没有差异，TO组的蛋白质含量低于对照组。

对E18.5控制肺的组织学分析表明，随着空域的发展和上皮表面之间间层的增厚，肺发育的晚期或早期囊性阶段。TO组的肺部扩张了中央和空域，主观上核数量较高。在尝试此协议时，我们修复缝合线的方式，胎儿的眼睛是可见的，颈部被延长，使针头不会破坏调整后的结构。

将结构移除到氮化物风扇中的胎儿重生和 CDH 的淘汰模型将是该技术的未来应用。