היתרונות החשובים ביותר של טכניקה זו הם היפוך, הפחתת עלות בעלי החיים ותחזוקה, ותקופת הריון קצרה יותר. יתר על כן, תמותת בעלי חיים מופחתת כי אין צורך כריתת רחם. ויש הזדמנויות רחבות יותר לבדיקה גנטית.
טכניקה זו יכולה לשמש לחקירת הפתופיזיולוגיה של הבקע הסרעפתי מולד. זה יכול להיות מיושם גם להבנת מחלות אחרות בריאה, כגון פרות והיפופלזיה ריאתי. התחילו בכך שתאפשרו לעכברים להזדווג באותו כלוב בין השעות 18:00 עד 9:00 למחרת.
כדי לקבוע E0, להתבונן תקע הנרתיק אשר יש הומוגנית, האזור החיצוני מחובר לקיר הנרתיק ואזור פנימי כי הוא סיבי וכוללים כמה זרעונים היוצרים גושים סבוכים מעורבב עם הסיבים של חומר התקע. רשום את משקל העכברים בזמן ההזדווגות וב- E10 כדי להבטיח הריון מתמשך ולבצע את הניתוח ב- E16.5. לעקר את המכשירים כי הם הולכים לשמש במהלך הניתוח.
מחממים את פלטפורמת הניתוח ל-24 מעלות ומכינים מלוחים חמים לפני הניתוח. ליצור סביבה חמה להתאוששות ולהשאיר מזון רטוב בתוך הכלוב להאכלה מוקדמת. לנקות את משטח הבטן עם אלכוהול ויוד povidone ולשמור על תנאים סטריליים לאורך כל הניתוח.
בצע חתך אנכי לפרוטומיה של סכרים בהריון לחתוך את כל השכבות בנפרד. זהה את קרני הרחם מכל צד וקבע את העוברים המועמדים לניתוח. לנתח על שני עוברים בכל קרן הרחם אם יש מספר זוגי של עוברים בכל צד.
ועל עובר אחד בכל קרן רחם אם יש מספר אי זוגי. באמצעות משקפי הגדלה פי 2 להדמיה, מקמו את קרן הרחם בצורה רוחבית. מקם את הגורים הפונים כלפי מעלה בין שתי אצבעות באמצעות העיניים והזנב כמדריך.
יש להפעיל לחץ עדין על ראשו של הגור כדי לאפשר הארכה של הראש והדמיה של הצוואר. בצע חסימת קנה הנשימה או TO באמצעות מחט טראומטית ותפר פוליפרופילן 6 על 0. שמור את השליה בצד ורחוק מנקודות הכניסה והיציאה של המחט.
הכנס את המחט רוחבית דרך צד הרחם, הרחק מהשליה דרך החלק השני של הצוואר. ואז להזיז את המחט בעדינות לקו האמצע של הצוואר. כוון אותו לחלק השני.
ואז לצאת את הצוואר בין קנה הנשימה ומול נדן הראש והרחם. קשר את התפר, דואג לשמור על שלמות הממברנות וקיר הרחם. החלף את קרן הרחם בבטן והזרק שני מיליליטר של מלוחים סטריליים חמים לתוך חלל הצפק לפני הסגירה.
מניחים תפר פוליגלקטין 5 על 0 כדי לסגור את דופן הבטן. ולסגור את העור עם תפר משי שאינו פועל. יש למרוח 0.1 מיקרוגרם לקילוגרם של בופרנורפין תוך-פיוריטון על משככי כאבים ולאפשר לסכר להתאושש באינקובטור חם.
שימו לב שהחיה המופעלת יכולה להאכיל את עצמה ולשמור אותה לבד בכלוב הבודד שלה. לקצור את כל העוברים על ידי E18.5 על ידי קטע ceasarean ולבדוק את הכדאיות שלהם על ידי צפייה בתנועות שלהם. שקל את כל העוברים.
בצע חתך אנכי על בית החזה עבור כריתת חזה כדי לנתח את הריאות. ולשקול אותם כדי לחשב את יחס הריאה הכולל למשקל הגוף. הצמד להקפיא את הרקמה חנקן נוזלי, תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית, וקרח יבש.
חותכים את הדגימות בחלקים של 10 מיקרומטר באמצעות cryostat, ולהרכיב אותם על שקופיות מצופה פוליצין. אופים את השקופיות למשך הלילה ב-60 מעלות צלזיוס ומכתימים את המגלשות האפויות בהמטוקסילין ובאאוסין. תמונה של השקופיות בהגדלה של פי 10 עד פי 20, באמצעות מיקרוסקופ שדה רחב.
לניתוחי חלבונים ודנ"א, הצמד להקפיא את הרקמה הומוגנית אותו 300 microliters של חיץ בדיקת radioimmunoprecipitation. צנטריפוגה ב 18, 000 x g ו 4 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. לאחר מכן לחלץ ולכמת חלבון, DNA, ו- RNA.
משקל הגוף הממוצע, משקל הריאות ו- LBWR היו גבוהים יותר בקבוצת TO מאשר בקבוצת הביקורת. כמויות הדנ"א של הריאה ויחס הדנ"א לחלבון היו גבוהות יותר בקבוצת TO. לא נצפה הבדל ב-RNA של הריאות, וכמויות החלבון היו נמוכות יותר בקבוצת TO מאשר בקבוצת הביקורת.
ניתוחים היסטולוגיים של ריאות הבקרה E18.5 הראו את השלב הסקולרי המאוחר או המוקדם של התפתחות הריאות עם פיתוח מרחב אווירי ואינטרסטיטיום מעובה בין משטחי אפיתל. הריאות בקבוצת TO התרחבו למרחבים אוויריים מרכזיים ודיסטליים עם מספרים גבוהים יותר באופן סובייקטיבי של גרעינים. כאשר מנסים פרוטוקול זה, אנו מתקנים את התפרים באופן שעיני העובר גלויות והצוואר מורחב כך שהמחט אינה משבשת את המבנים המותאמים.
הסרת המבנים ללידה מחדש של העובר במאוורר הניטריל ומודלים נוקאאוט של CDH יהיה יישומים עתידיים של טכניקה זו.
