Bu tekniğin en önemli avantajları geri dönüşümlü, hayvanların maliyetinde ve bakımında azalma ve daha kısa bir hamilelik süresidir. Ayrıca histerektomiye gerek olmadığı için hayvan ölümleri de azalmıştır. Ve genetik çalışmalar için daha geniş fırsatlar var.
Bu teknik konjenital diyafram fıtığı patofizyolojisini araştırmak için kullanılabilir. İnekler ve pulmoner hipoplazi gibi akciğerdeki diğer hastalıkları anlamak için de uygulanabilir. Farelerin aynı kafeste 18:00-09:00 saatleri arasında çiftleşmelerine izin vererek başlayın.
E0'ı belirlemek için, vajina duvarına bağlı homojen, dış bölgeye ve lifli bir iç bölgeye sahip olan ve fiş malzemesinin lifleriyle karıştırılmış dolaşmış kitleler oluşturan bazı spermatozoa içeren vajinal tıkacı gözlemleyin. Devam eden hamileliği sağlamak ve ameliyatı E16.5'te gerçekleştirmek için çiftleşme sırasında ve E10'da farelerin ağırlığını kaydedin. Ameliyat sırasında kullanılacak aletleri sterilize edin.
Ameliyat platformunu 24 santigrat dereceye kadar önceden ısıtın ve ameliyattan önce ılık salin hazırlayın. İyileşme için sıcak bir ortam yaratın ve erken beslenme için kafesin içine ıslak yiyecek bırakın. Karın yüzeyini alkol ve povidon iyot ile temizleyin ve operasyon boyunca steril koşulları koruyun.
Hamile barajların laparotomisi için dikey bir kesi yapın ve tüm katmanları ayrı ayrı kesin. Her iki taraftaki rahim boynuzlarını tanımlayın ve ameliyat için aday fetüsleri belirleyin. Her iki tarafta eşit sayıda fetüs varsa, her rahim boynuzunda iki fetüs ameliyat edin.
Ve her rahim boynuzunda bir fetüste eğer tek bir sayı varsa. Görselleştirme için 2X büyütme gözlükleri kullanarak, rahim boynuzu enine bir şekilde konumlandırın. Yavruları, gözleri ve kuyruğu rehber olarak kullanarak iki parmak arasında yukarı bakacak şekilde konumlandırın.
Başın uzatılmasına ve boynun görselleştirilmesine izin vermek için yavrunun kafasına hafif basınç uygulayın. Trakeal tıkanıklık veya TO'yu atravmatik bir iğne ve 6'ya 0 polipropilen dikiş kullanarak gerçekleştirin. Plastantayı iğnenin giriş ve çıkış noktalarından uzakta ve yan tarafta tutun.
İğneyi uterusun yanından enine, plastantadan boynun üçte bir ön kısmına doğru yerleştirin. Daha sonra iğneyi boynun orta çizgisine hafifçe hareket ettirin. Ön kısmaya yönlendirin.
Daha sonra boyundan nefes borusu arasında ve şahdabı kılıfı ve uterusun karşısında çıkın. Dikişi düğümle, zarların ve rahim duvarının bütünlüğünü korumaya özen göstererek. Karın bölgesindeki rahim boynuzu değiştirin ve kapanmadan önce periton boşluğuna iki mililitre sıcak steril salin enjekte edin.
Karın duvarını kapatmak için çalışan bir 5'e 0 poliglactin dikişi yerleştirin. Ve cildi çalışmayan ipek bir dikişle kapatın. Analjezi için intraperitoneal olarak kilogram başına 0,1 mikrogram uygulayın ve barajın ılık bir inkübatörde toparlanmasını sağlamak.
Ameliyat edilen hayvanın kendini besleyebileceğini ve bireysel kafesinde tek başına tutabileceğini gözlemleyin. Tüm fetüsleri E18.5 ile ceasarean bölümüne kadar hasat edin ve hareketlerini izleyerek canlılıklarını kontrol edin. Tüm fetüsleri tartın.
Akciğerleri parçalamak için toraks üzerinde bir toraktomi için dikey bir kesi gerçekleştirin. Ve toplam akciğer-vücut ağırlığı oranını hesaplamak için onları tartın. Sıvı nitrojen, optimum kesme sıcaklığı bileşiği ve kuru buzda dokuyu dondurun.
Numuneleri kriyostat kullanarak 10 mikrometrelik bölümler halinde kesin ve polilizin kaplı slaytlara monte edin. Slaytları 60 santigrat derecede geceleyin pişirin ve pişmiş slaytları hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. Geniş alan mikroskobu kullanarak 10 ila 20X büyütme slaytlarının görüntüsü.
Protein ve DNA analizleri için, dokuyu dondurun ve 300 mikrolitre radyoimmünötepiasyon test tamponunda homojenleştirdi. Beş dakika boyunca 18.000 x g ve 4 santigrat derecede santrifüj. Daha sonra protein, DNA ve RNA'yı ayıklayın ve ölçün.
Ortalama vücut ağırlığı, akciğer ağırlığı ve LBWR TO grubunda kontrol grubuna göre daha yüksekti. To grubunda akciğer DNA'sı miktarları ve DNA'nın protein oranı daha yüksekti. Akciğer RNA'sında fark gözlenmedi ve protein miktarları TO grubunda kontrol grubuna göre daha düşüktü.
E18.5 kontrol akciğerlerinin histolojik analizleri, gelişen hava sahaları ve epitel yüzeyler arasında kalınlaşmış intersityum ile akciğer gelişiminin geç veya erken sakküler evresini göstermiştir. TO grubundaki akciğerler, subsüratif olarak daha yüksek sayıda çekirdekle merkezi ve distal hava sahalarını genişletmişti. Bu protokolü denerken dikişleri fetüsün gözleri görünür olacak şekilde sabitleyeceğiz ve iğnenin ayarlanan yapıları bozmaması için boyun uzatılır.
CDH'nin nitril fan ve nakavt modellerinde yapıların fetüsün yeniden doğuşu için çıkarılması bu tekniğin gelecekteki uygulamaları olacaktır.
