Наиболее важными преимуществами этого метода являются обратимость, снижение стоимости животных и содержание, а также более короткий период беременности. Кроме того, снижается смертность животных, поскольку нет необходимости в гистерэктомии. И есть более широкие возможности для генетической работы.
Этот метод может быть использован для изучения патофизиологии врожденной диафрагмальной грыжи. Он также может быть применен для понимания других заболеваний легких, таких как коровы и легочной гипоплазии. Начните с того, что мышей спариваться в одной клетке с 6:00 вечера до 9:00 утра на следующий день.
Чтобы определить E0, наблюдать вагинальный штепсельная вилка, которая имеет однородную, внешнюю зону, прикрепленную к стенке влагалища и внутренней зоне, которая волокнистая и включает в себя некоторые сперматозоиды, которые образуют запутанные массы, смешанные с волокнами штепсельной вилки материала. Запись веса мышей во время спаривания и на E10 для обеспечения текущей беременности и выполнить операцию на E16.5. Стерилизовать инструменты, которые будут использоваться во время операции.
Разогреть хирургический платформу до 24 градусов по Цельсию и подготовить теплый солевой раствор до операции. Создайте теплую среду для восстановления и оставьте влажную пищу внутри клетки для раннего кормления. Очистите брюшную поверхность спиртом и йодом повидоне и поддерживайте стерильные условия на протяжении всей операции.
Выполните вертикальный разрез для лапаротомии беременных плотин и разрежьте все слои отдельно. Определите рога матки с каждой стороны и определите плод кандидата на операцию. Оперировать на двух плодах в каждом роге матки, если есть 4 количество плодов с каждой стороны.
И на одном плоде в каждом роге матки, если есть нечетное число. Используя очки 2X увеличения для визуализации, распоите рог матки поперечным способом. Распоить щенков, стоящих вверх между двумя пальцами, используя глаза и хвост в качестве руководства.
Нанесите мягкое давление на голову щенка, чтобы обеспечить расширение головы и визуализацию шеи. Выполните трахеальной окклюзии или TO с помощью атрауматической иглы и 6 на 0 полипропиленовый шов. Держите плаценту на стороне и вдали от входных и выходных точек иглы.
Вставьте иглу поперечно через сторону матки, от плаценты через одну треть передней части шеи. Затем осторожно переместите иглу к средней линии шеи. Навемите его на переднюю часть.
Затем выйти из шеи между трахеей и напротив сонной оболочки и матки. Узел шва, заботясь, чтобы сохранить целостность мембран и стенок матки. Замените рог матки в брюшной полости и ввилит два миллилитров теплого стерильного солевого раствора в брюшную полость перед закрытием.
Поместите работает 5 на 0 полиглактин шов, чтобы закрыть брюшную стенку. И закройте кожу неуспеваемой шелковой шов. Нанесите 0,1 микрограмма на килограмм бупренорфина intraperitoneally для анальгезии и позволить плотины восстановиться в теплом инкубаторе.
Обратите на то, что оперировать животное может прокормить себя и держать его в покое в своей отдельной клетке. Урожай всех плодов E18.5 по ceasarean разделе и проверить их жизнеспособность, наблюдая за их движениями. Взвесь все плоды.
Выполните вертикальный разрез на грудной клетке для торакотомии, чтобы вскрыть легкие. И взвесить их, чтобы вычислить общее соотношение веса легких и тела. Заморозить ткани в жидком азоте, оптимальное соединение температуры резки, и сухой лед.
Вырезать образцы в разделах 10 микрометров с помощью криостата, и смонтировать их на полилин покрытием слайдов. Выпекать горки на ночь при температуре 60 градусов по Цельсию и пятно запеченные горки с гематоксилин и эозин. Изображение слайдов с увеличением от 10 до 20X с помощью широкоугольной микроскопа.
Для анализа белка и ДНК, оснастки заморозить ткани и гомогенизировали его в 300 микролитров радиоиммунопроцепиентации анализа буфера. Центрифуга при 18 000 х г и 4 градуса по Цельсию в течение пяти минут. Затем извлекайте и количественно имитуайте белок, ДНК и РНК.
Средний вес тела, вес легких и LBWR были выше в группе TO, чем в контрольной группе. Количество ДНК легких и соотношение ДНК к белку были выше в группе TO. Никакой разницы не наблюдалось в РНК легких, и количество белка было ниже в группе TO, чем в контрольной группе.
Гистологический анализ контрольных легких E18.5 показал поздняя или ранняя саккулярная стадия развития легких с развитием воздушного пространства и утолщенным интерстицием между эпителиальными поверхностями. Легкие в группе ТО имели расширенные центральные и дистальные воздушное пространство с субъективно большим количеством ядер. При попытке этого протокола, Мы исправить швы таким образом, что глаза плода видны и шеи продлен так, что игла не нарушает скорректированные структуры.
Удаление структур для возрождения плода в нитриле вентилятора и нокаут модели CDH будет в будущем применения этой техники.
