在免疫缺陷小鼠中表演人类骨骼肌异种移植物

该协议是重要的，因为它可以用来创建人类骨骼肌异种移植，可用于建模肌肉疾病和进行临床前治疗测试。这种异种移植模型使研究人员能够研究人体体内的肌肉，以更好地了解人类肌肉细胞生物学，并开发稀有或后天肌肉疾病的新模型。获得人体肌肉活检后，将标本放在含有肌肉介质的100至15毫米培养皿中，并使用立体显微镜和手术剪刀去除剩余的筋膜或脂肪组织。

将肌肉活检分解成大约七由三毫米的碎片，注意纤维在标本内纵向排列。接下来，将含有解剖肌肉的培养皿转移到冰上，将合成的、不可吸收的缝合线放在100乘15毫米的培养皿中，其中含有70%乙醇。在确认8至12周大的NOT-Rag-Gamma小鼠对脚趾捏没有反应后，对免疫缺陷动物的眼睛涂抹软膏，并使用修剪器将头部从脚踝到膝盖的头饰覆盖。

然后，在暴露的皮肤涂抹脱毛霜一分钟，然后用波维酮碘溶液和70%乙醇对手术地点进行消毒。要移植人体组织，首先将胶带下到小鼠腿部，并在源自侧肌腱的头骨前进行直切口，并在膝盖以下终止。使用钝解剖将皮肤与肌肉组织分离，并使用剪刀通过前肌的表皮切口进行小于0.5毫米的切口，从肌腱开始，到膝盖结束。

切下头骨的侧肌腱后，用虹膜钳抓住肌腱，将肌肉拉到膝盖上。接下来，切开外向数字耳长的外向肌腱，将拉伸器数字肌腱向上拉向膝盖。一旦佩罗努斯长肌的近侧肌腱可见，用剪刀去除外侧数字耳长和头骨前部。

使用带 PBS 的手术擦拭来施加轻微压力，直到达到同部性，并通过近端长牙肌腱缝合线，在肌腱的两侧留下一块大约 1.5 英寸的螺纹。使两手手术方结的上半部分不紧，形成一个圆圈，并放置一个异种移植到圆，拧紧循环，以确保移植组织。完成方结的另一半，将异种移植缝合到佩罗内乌斯长肌腱的近端肌腱上，并通过端骨长肌腱将缝合线线，以在端端肌腱上重复方结技术。

当移植物的两端都固定好时，将皮肤拉过异种移植的肌肉，用手术胶水密封切口，并在胶水上放置两到三个手术钉。然后，将鼠标放在加热垫上的清洁笼中，进行监控，直至完全保持。手术后4至6个月，在异种收获前至少30分钟将装有200毫升2-甲基丁烷的盖杯放在一盒干冰中。

当2甲基丁烷冷却后，确认对脚趾捏没有反应，用修剪剂和脱毛霜将前身的头骨从脚踝到膝盖的毛发去除。应通过皮肤观察将异种移植处在位的缝合线。用胶带固定腿部，并使用剪刀和虹膜钳打开异种移植上的皮肤，直到两个缝合线都被揭开。

使用手术刀在异种移植体和头骨之间切割，以释放异种移植的一侧，然后再在佩罗努斯长肌和胃骨肌肉之间切割。切入远端缝合线下方，通过佩罗内乌斯长牙的远端肌腱，并使用虹膜钳抓住缝合线，将缝合线偏转到膝盖上，同时用剪刀将异种体切离底层肌肉组织。然后，用剪刀在近端缝合线上方切割，以去除异种和佩罗内斯长牙，并将收获的标本放在一小块纸板上。

将组织固定到尽可能靠近缝合线，同时轻轻拉伸肌肉，以确保在捕捉冻结过程中保持纤维方向。当针脚牢固地固定到位时，将肌肉向上滑动针脚，使组织位于纸板的正上方，并在预冷却的 2 甲基丁烷中捕捉冻结异种移植物，以进行零下 80 摄氏度的存储。成功的异种移植表明，与人特异性抗体鉴定的人类异体体具有强大的再生。

阳性胚胎胚胎米奥辛染色在一定比例的 myofibers 表明再生过程仍在进行中。相比之下，糟糕的手术技术或不足的标本可能会导致肌肉纤维再生不良。一名被诊断为特发性炎症性肌病的患者在4个月和6个月的收集中表现出适量的再生人类肌黄体，胚胎肌黄辛染色在6个月时持续。

炎症细胞也存在于异种体中，如H和E染色所观察到的。在特发性炎症性肌病异种移植体中，个体肌纤维大小在4到6个月之间相似。在异种移植体内观察到的横截面面积大于 3，500 微米的稀有纤维，但在特发发性炎症性肌病活检中未观察到，这表明异种移植体中的一些肌纤维可以再生到与健康肌黄体相似的横截面区域。

这个过程最重要的部分是在进行初始切口后识别脚踝的所有肌腱，并成功地切入表皮。异种移植器的功能能力可以通过酶隔离单个 myofibers 和测试钙瞬变或通过电刺激后执行唤起的强制测量来评估。