功能化螺环杂环合成和细胞毒性测定

该协议利用可回收和改良的方法生产螺环化合物。MTT测定有助于回答有关这些新分子的细胞毒性的问题。该技术使用再生起始材料生产新型可修饰分子。

MTT测定提供相对快速且易于分析的生物学结果 如前所述，首先进行螺环杂环六和七的固相合成。使用无菌PBS作为稀释剂制备20毫升每毫升5毫克的MTT溶液。过滤并将溶液储存在零下20摄氏度。

然后，在DMEM中制备MTT溶液的一对一稀释液。在DMSO中测试化合物的1.5毫升微量离心管中制备每毫升储备溶液一毫升。将它们存放在零下 20 摄氏度。

通过稀释原液浓度，每剂量制备200微升测试化合物的工作溶液。在无血清培养基中为1至1000。在组织培养种子中，COS将7个细胞在完全培养基中放入平底组织培养物上，以每孔200微升4， 000个细胞的浓度处理96孔板。

使用多通道移液器。将细胞在含有5%二氧化碳的气氛中在37摄氏度下孵育24小时。第二天，使用连接到真空泵的玻璃牧场移液管从孔中吸出上清液。

使用先前制备的工作溶液将细胞与测试化合物一式三份给药。然后将细胞放回培养箱。24小时后，从孔中吸出上清液，并向每个孔中加入200微升MTT溶液。

将板孵育四小时。从孔中轻轻吸出上清液，而不会干扰紫色甲氮烷晶体。向每个孔中加入200微升DMSO以溶解晶体。

然后将板在室温下孵育15分钟。使用96孔板读数器测量每个孔在590或600纳米处的吸光度。使用没有细胞的孔作为背景并平均吸光度值。

使用改进的方案合成螺环 gox 接缝 6 和 7。通过使用红外光谱检测αβ不饱和以斯帖的消失来监测反应的进展。MTT测定用于确定细胞活力。

已知顺铂在高浓度下诱导细胞死亡，作为阳性对照。正如预期的那样，顺铂的浓度越高，细胞活力就越低。然后使用MTT测定法测试螺环化合物六和七以及糠胺。

糠胺和螺环型六线的细胞毒性相似。但螺环类化合物7的毒性明显大于糠胺和6。尝试此方案时，请记住，使用大块酰基卤化物进行的N-烷基化被发现会降低β消除速率，从而降低产品产量。