这里描述的方法涉及可操作上定义为海洋脂质的化合物。该定义的基础是它们适合在非极性有机溶剂中进行液液萃取，这提供了一种方便的方法将它们与水基质中的其他化合物分离。它们的疏水性有助于它们从海水或生物标本中分离出来，以及它们的富集和去除盐和蛋白质。
对于海水样品，第一步通常涉及通过过滤分离成操作上定义的溶解和颗粒级分。颗粒部分是由过滤器保留的，孔径对于定义截止值很重要。使用脂质清洁镊子，将47毫米玻璃纤维过滤器放在脂质清洁过滤系统上， 该过滤器已经灰化。
取样并轻轻旋转以重悬任何可能已经沉降的颗粒。测量出已知卷。体积将取决于样品中颗粒物质的量。
当测量出体积时，向过滤系统加入吸力，并用过滤后的海水轻轻润湿过滤器。将整个样品缓慢加入过滤漏斗中，并用海水冲洗量筒，以确保所有颗粒都添加到过滤器中。冲洗设备的漏斗，以确保所有颗粒都冲洗到过滤器上。
将所有液体拉过过滤器，但不要让过滤器变干，因为它会使过滤器上的细胞破裂。取脂质清洁的镊子，将过滤器对折，然后再次将其折叠成三分之一，然后纵向对折。然后将过滤器置于脂质清洁的小瓶中。
用两毫升氯仿盖住过滤器，盖在氮气下，并用特氟龙胶带密封。此时，样品将在零下20摄氏度下稳定储存长达一年。准备示例。
测量已知体积的滤液到脂质清洁的玻璃量级圆筒中。将样品放入脂质清洁的分离漏斗中，并加入约20ml氯仿。经常摇晃这种混合物至少两分钟，然后经常通风。
先分离后，先除去提取物，加入酸。摇动溶液两分钟后，将漏斗包裹在铝箔中，等待分离发生，大约五分钟。等待分离后，剥离铝箔的底部以查看两层。
将底层收集到脂质干净的圆底烧瓶中，注意不要包含任何顶层。将圆底烧瓶盖在氮气下，然后放入冰箱中。回收分离漏斗并向液体中加入硫酸。
每升海水加入0.25毫升。加入硫酸后，轻轻摇晃海水，然后再加入10毫升氯仿，并在通风时剧烈摇晃两分钟。然后允许分离。
第二次和第三次分离。再次将底层添加到圆底烧瓶中，不含水。加入第三定量的10毫升氯仿，再摇晃两分钟，通风。
分离后，将氯仿的最后一部分置于同一烧瓶中，混合的提取物可以通过旋转蒸发器蒸发并转移到两ml小瓶中。设置。对于提取设置，您需要一个装满冰的绝缘容器。溶剂包括氯仿、氯仿提取的水和2：1的氯仿甲醇。
对于该溶液，每个样品大约需要一毫升，因此请相应地进行制备。所有这些溶剂都应放在冰上，以便在开始提取时冷却。样品也放在冰上，这样一切都保持低温。
研磨和提取。样品已冷冻储存在两毫升氯仿中，因此加入一毫升冰冷甲醇或半份移液。加入甲醇时要小心，不要用移液器接触小瓶。
用甲醇清洁并均质三次，用氯仿匀浆三次。研磨时，请注意不要切开手中的提取小瓶，以防您打破小瓶并避免加热样品。快速研磨。
一旦样品完全研磨，将其置于冰中，并使用ml 2：1氯仿 - 甲醇将研磨机中的任何剩余颗粒洗回小瓶中。如有必要，在洗涤前使用一组脂质清洁的镊子将颗粒推回小瓶中。注意不要将移液器碰到研磨机或研磨机触摸小瓶。
然后加入0.5ml或四分之一移液的氯仿提取水，而不接触研磨机或研磨机到小瓶中。清洗研磨机后，触摸从研磨机悬挂到小瓶的液滴。盖上盖子，将其保持在冰中，直到准备好超声处理。
双重移液。离心后，小瓶中将有两层：有机层和水层。为了获得有机层，使用双重移液技术。
为此，在食指和中指之间抓住一个五厘米短的移液器，将灯泡松散地放在其中。轻轻地将移液器向下推过两层，同时挤压灯泡，使气泡从末端出来。当到达第二层的底部时，用拇指弹出灯泡，而不会将有机层吸入移液器中。
用九厘米的移液器完全挤压灯泡。将移液器的长端放入五厘米移液器中，并通过五厘米移液管取出底层。然后将该提取物置于脂质清洁的小瓶中。
继续取下底层，直到全部取下。所有层都汇集在脂质清洁的小瓶中。清洗移液器。
从 9 厘米移液器中取出灯泡。将其放入含有提取物的小瓶中。取一滴干净的氯仿移液，不要将移液器碰到正在洗涤的移液器上，将氯仿喷洒在移液管内部周围。
清洗时轻轻转动移液器。取第二次吸取氯仿，并对移液管的外部做同样的事情。确保所有氯仿都顺着移液管流下并进入提取瓶。
用长移液器完成后，取短移液器并重复，但将其与样品一起洗涤到小瓶中。发现样品。用氯仿清洁注射器。
取已知体积的样品并冲洗样品中的注射器。将样品拉过您想要发现的量。然后将柱塞降低到您想要的量，确保没有气泡。
使用按钮分配0.5微升，然后将液滴触摸到杆上。让其干燥，然后再将下一滴液滴放在同一位置。在温热板末端的杆上发现所有样品。
在丙酮中聚焦。样品的聚焦在100%丙酮中完成。向显影罐的底部添加约70毫升丙酮。
拿起两个机架，轻轻地将它们放入显影槽中。观察溶剂前部爬上杆，直到光斑的底部与光斑的顶部合并。取下杆。
将它们干燥约五秒钟，然后重复该过程。如果样品非常浓缩，则可以进行第三次聚焦。第一个开发系统。
第一个开发系统由己烷，乙醚和甲酸组成，价格为98.5比1至0.5。首先用己烷冲洗量筒三次并丢弃。用己烷填充量筒略高于85毫升。
然后使用移液器和一瓶己烷将量筒填充到90ml。然后使用乙醚将半月板的底部带到91ml线，这将产生一ml乙醚。使用汉密尔顿注射器加入0.5毫升甲酸。
但首先用甲酸冲洗汉密尔顿注射器三次，以确保没有用于冲洗注射器样品的氯仿残留。一次加入两个完整的注射器或25微升，总共50微升。重要的是，甲酸应立即用氯仿从注射器中冲洗出来，以避免腐蚀注射器中的金属。
一旦汉密尔顿注射器清洁，使用己烷和移液器使溶液达到100毫升。然后盖上盖子并倒置三到四次。将约30毫升倒入显影罐中。
使用这30毫升弄湿纸张并冲洗水箱。丢弃冲洗液。将剩余的70毫升添加到开发罐中。
将机架添加到开发系统。将杆添加到开发系统对于每个开发都是相同的。确保计时器设置为要开发杆的时间。
然后拿起架子，轻轻地将它们放入水箱中。观察直到溶剂前端到达样品点，然后启动计时器。第二开发系统。
第二种开发体系是己烷、乙烯和甲酸，79~20比1。因此，像以前一样，用己烷冲洗量筒三次。加入20毫升乙醚，然后加入一毫升甲酸，使体积达到21毫升。
然后用己烷将体积调至100毫升。使用瓶泵添加约75毫升己烷。对于该部分，请使用移液器。
盖帽并倒置几次。向显影罐中加入约30ml以润湿纸张并冲洗罐。丢弃30毫升。
添加剩余的 70 个，即可使用一组杆。第三个开发系统。第三种开发系统是氯仿、甲醇和氯仿提取水的混合物，50、40~10。
用氯仿冲洗量筒三次。加入约45毫升氯仿。使用移液器，将半月板的底部带到50ml标记处。
加入约38毫升甲醇。将半月板的底部带到90ml线。然后用氯仿提取的水填充最后的10毫升。
与其他开发系统一样，将其倒置三到四次，然后将30毫升倒入罐中以润湿纸张。丢弃30毫升，将最后70毫升加入水箱。制备甲醇。
为了组成用于衍生化的Hilditch溶液，填充一个脂质清洁的清洁容量瓶，该容量瓶也已用甲醇干燥或额外冲洗三次以除去任何氯仿。加入甲醇，直到半月板的底部处于包含管线处。测量甲醇后，加入在60摄氏度下干燥至少24小时的硫酸钠。
加入足够的硫酸钠，使其覆盖容量公制瓶的底部。一旦覆盖，倒置两次，使甲醇中的任何水被硫酸钠吸收。倒置和摇晃后，让它静置至少五分钟。
加入酸。甲醇沉降五分钟后，缓慢将其倒入最终的玻璃瓶中，确保所有硫酸钠都留在容量瓶的底部。硫酸钠通常保持在底部，因此所有甲醇都应倒掉。
将带有硫酸钠的体积留在通风橱的背面晾干。使用PIPETMAN缓慢地将硫酸加入甲醇中。一次添加几滴，这样甲醇就不会吐出。
加入所有酸后，盖上盖子，轻轻搅拌混合。该解决方案现已准备好用于衍生品，但必须每周补一次。制作衍生品。
从已经将体积提高到已知量的提取物小瓶中，旋转，然后将一部分提取物取出到脂质清洁，标记的15ml小瓶中。您去除的量将由Iatroscan样品的浓度决定。使用脂质清洁的德拉蒙德移液器除去样品。
取出样品后，将15ml小瓶置于氮气下以完全蒸发氯仿。原始样品可以保存并返回冰箱。当样品干燥时，加入1.5毫升二氯甲烷或一个移液器和三毫升当天早些时候制成的Hilditch溶液或两个移液。
然后将该溶液保存在氮气下，涡旋并置于超声仪中四分钟，然后置于100摄氏度的烤箱中一小时。停止反应。在100摄氏度下加热一小时并冷却后，慢慢加入0.5ml饱和碳酸氢钠溶液。
当酸被中和时，会产生气泡。然后加入1.5毫升己烷。盖上盖子，用力摇晃。
让它站立，以便它分成两层。处理所有样品。当它们全部完成时，第一个将准备好进行下一步。
删除顶层。一旦衍生化停止并且在15ml小瓶中有明确的分离，除去顶层并将其放入脂质清洁的两ml小瓶中。最好留下一些顶层，而不是将任何底层放入两毫升小瓶中。
一旦大部分顶层被移除，其余的溶液就可以被丢弃。两毫升中的提取物应在温和的氮气流下完全蒸发。一旦小瓶完全干燥，就可以重新加入己烷，然后对样品进行超声处理，保持在氮气下，然后准备进入GC。具有代表性的结果。
该图显示了我们标准的原始TLC-FIC色谱图，这是一种用菜籽油和来自喂养该饮食的鲑鱼的肝脏组织的饮食。水产养殖是增长最快的食品生产部门，必须减少对野生鱼粉和鱼油的依赖。正在研究植物油作为水产饲料中鱼油的替代品。
肝脏是脂质代谢的主要部位，是分析的目标。我们可以看到肝脏饮食中三酰基甘油的流行，以及膜磷脂在肝脏中的重要性。此图显示了标准的色谱图。
脂质和沉降颗粒聚集在这里的海岸附近，而神秘肌中的脂质收集在相同的深度附近。在这里，色谱图通过绘图软件进行处理。脂质富含碳，具有非常高的能量值，是大陆架区域生产力的重要组成部分，对碳循环尤为重要。
更多的地表初级生产到达较浅水域的海底。我们发现小mysid在我们的样品中具有最高的脂质浓度。在这里，蜡和无菌酯结合在一起。
并且由于存在高水平的多不饱和脂肪酸而存在峰分裂。铬罗德Iatroscan TLC-FID系统提供来自小样品的天气脂质类数据的速度使其成为在进行更详细的色谱分析之前筛选海洋样品的强大工具。这种分析通常需要从脂质提取物中释放组分化合物并衍生化以增加挥发性。
