여기에 설명된 방법은 해양 지질으로 작동적으로 정의될 수 있는 화합물을 염려합니다. 이 정의의 기초는 비극성 유기 용매에서 액체 액체 추출에 그들의 편의성, 수성 매트릭스에서 다른 화합물에서 그들을 분리하는 편리한 수단을 제공. 그들의 소수성 성격은 바닷물 또는 생물학 견본에서 그들의 격리를, 뿐만 아니라 그들의 농축 및 소금과 단백질의 제거를 촉진합니다.
해수 샘플의 경우, 첫 번째 단계는 일반적으로 여과에 의한 운영 정의 용해 및 미립자 분획으로 분리하는 것을 포함한다. 미립자 분획은 필터에 의해 유지되고, 공공 크기는 컷오프를 정의하는 데 중요하다는 것입니다. 지질 청정 집게를 사용하여 지질 청정 여과 시스템에 47mm 유리 섬유 필터를 놓습니다.
샘플을 가져 와서 부드럽게 소용돌이하여 정착 했을 수 있는 입자를 다시 일시 중단합니다. 알려진 볼륨을 측정합니다. 부피는 샘플의 미립자 재료의 양에 따라 달라집니다.
부피를 측정하면 여과 시스템에 흡입을 추가하고 여과 된 바닷물로 필터를 부드럽게 적시십시오. 전체 샘플을 여과 깔때기에 천천히 추가하고 모든 입자가 필터에 추가되도록 하기 위해 완성된 실린더를 바닷물로 헹구습니다. 모든 입자가 필터에 헹구지 않도록 장치의 깔때기를 헹구는 다.
필터를 통해 모든 액체를 당기지만 필터에있는 세포를 파열 시킬 수 있으므로 필터가 건조하지 않습니다. 지질 깨끗한 집게를 가져 가서 필터를 반으로 접은 다음 다시 3 분의 1로 접은 다음 절반으로 반으로 접습니다. 그런 다음 필터를 지질 청정 유리병에 넣습니다.
필터를 클로로폼 2ml, 질소 아래 캡, 테플론 테이프로 밀봉합니다. 이 시점에서 샘플은 최대 1 년 동안 영하 20 섭씨에서 저장안정될 것입니다. 샘플을 준비합니다.
지질 청정 유리 졸업 실린더로 여과물의 알려진 볼륨을 측정합니다. 샘플을 지질 청정 분리 깔때기에 넣고 약 20ml의 클로로폼을 추가합니다. 이 혼합물을 2분 이상 자주 섞으세요.
첫 번째 분리 후, 첫 번째 추출물을 제거하고 산의 첨가. 용액을 2분 동안 흔들어진 후, 깔때기를 알루미늄 호일로 감싸고 분리가 발생할 때까지 약 5분간 기다립니다. 분리를 기다린 후 알루미늄 호일 의 바닥을 다시 벗겨 두 층을 볼 수 있습니다.
상단 층을 포함하지 않도록 주의하면서 아래층을 지질 깨끗한 둥근 바닥 플라스크로 수집합니다. 둥근 바닥 플라스크를 질소 아래에 캡하고 냉동실에 넣습니다. 분리 재유입경로를 회수하고 액체에 황산을 추가합니다.
현재 의 모든 리터의 바닷물에 0.25 mls를 추가합니다. 황산이 첨가되면 바닷물을 부드럽게 흔들어 서 클로로폼 10ml를 더 넣고 2분 동안 배출하면서 힘차게 흔들어 줍니다. 그런 다음 분리를 허용합니다.
두 번째 및 세 번째 분리. 물을 포함하지 않고 둥근 바닥 플라스크에 바닥 레이어를 다시 추가합니다. 10mls의 세 번째 양을 추가하고 환기로 또 다른 2 분 동안 흔들어.
분리 후, 클로로폼의 마지막 부분을 동일한 플라스크에 넣고, 결합된 추출물은 회전 증발기에 의해 증발되어 2ml 유리병으로 옮겨질 수 있다. 설치. 추출 설정의 경우 얼음으로 채워진 절연 용기가 필요합니다. 용매는 클로로폼, 클로로폼 추출물 및 2:1 클로로폼 메탄올을 포함한다.
이 솔루션중 시료당 약 1ml가 필요하므로 그에 따라 확인하십시오. 이러한 모든 용매는 추출이 시작될 때까지 추워지도록 얼음 위에 두어야 합니다. 샘플은 또한 모든 것이 차가운 상태로 유지되도록 얼음에 간다.
연삭 및 추출. 샘플은 클로로폼 2ml에 냉동 보관되어 있으므로 얼음 차가운 메탄올 1 ml 또는 파이펫 반을 추가하십시오. 메탄올을 첨가할 때는 파이프로 바이알을 만지지 않도록 주의하십시오.
메탄올로 3회, 클로로폼으로 3회 세척하고 균질화합니다. 연삭 할 때, 당신이 유리병을 깰 경우 당신의 손에 추출 유리병을 잘라하지 않도록주의하고 샘플을 따뜻하게하지 않도록. 빠르게 갈아.
샘플이 완전히 접지되면, 얼음에 서서 2:1 클로로폼 메탄올의 ml를 사용하여 그라인더에서 다시 유리알로 남은 입자를 씻어넣습니다. 필요한 경우 지질 청소 집게 세트를 사용하여 세척 하기 전에 유리병에 입자를 다시 강제로. 파이프를 바이알에 분쇄기 또는 분쇄기에 만지지 않도록 주의하십시오.
그런 다음 바이알에 분쇄기 또는 분쇄기를 건드리지 않고 0.5 ml또는 클로로폼 추출 물의 쿼터 파이프를 추가합니다. 분쇄기가 세척되면 분쇄기에서 바이알까지 매달려 있는 드롭을 터치합니다. 뚜껑을 캡하고 초음파 처리 할 준비가 될 때까지 얼음에 보관하십시오.
이중 파이펫팅. 원심 분리 후 유리병에는 유기 및 수성 층의 두 층이 있습니다. 유기 층을 얻으려면 이중 파이펫팅 기술이 사용됩니다.
이를 위해 전구가 느슨하게 놓인 5센티미터 의 짧은 파이프가 검지 손가락과 가운데 손가락 사이에 잡혀 있습니다. 전구를 압박하면서 두 레이어를 부드럽게 아래로 밀어 거품이 끝까지 나옵니다. 두 번째 레이어의 맨 아래에 도달하면 엄지 손가락을 사용하여 파이펫에 유기 층을 그리지 않고 전구를 튀어 나오십시오.
9센티미터 파이프로 전구를 완전히 짜냅니다. 파이펫의 긴 끝을 5센티미터 파이프에 넣고 5센티미터 파이프를 통해 바닥 층을 제거합니다. 이 추출물은 지질 청정 유리병에 넣습니다.
모든 레이어가 제거될 때까지 아래쪽 레이어를 계속 제거합니다. 지질 깨끗한 유리병에 풀린 모든 층. 파이펫을 씻는다.
9센티미터 파이프에서 전구를 제거합니다. 추출물을 바이알에 놓습니다. 깨끗한 클로로폼을 가지고, 세척되는 하나에 파이프를 만지지 않고, 파이프의 내부 주위에 클로로형태를 분출.
세탁하는 동안 파이프를 부드럽게 돌립니다. 클로로폼의 두 번째 파이프를 가지고 파이프의 외부에 같은 일을. 모든 클로로폼이 파이프 아래로 추출 유리병으로 흘러 들어가는지 확인합니다.
긴 파이펫으로 끝나면 짧은 파이프를 가지고 반복하지만 샘플로 유리병에 넣습니다. 샘플을 발견합니다. 클로로폼으로 주사기를 청소하십시오.
알려진 볼륨샘플을 채취하고 샘플에서 주사기를 헹구십시오. 발견할 양을 지나 샘플을 당깁니다. 그런 다음 플런저를 기포가 없도록 원하는 양으로 떨어지십시오.
버튼을 사용하여 0.5 마이크로리터를 분배하고 막대에 드롭을 만드세요. 같은 자리에 다음 방울을 놓기 전에 건조시키십시오. 따뜻한 핫 플레이트 의 끝에 개최 막대에 라인에 모든 샘플을 발견.
아세톤에 초점을 맞추고 있습니다. 샘플의 초점은 100% 아세톤으로 수행됩니다. 개발 탱크의 바닥에 약 70ml의 아세톤을 추가합니다.
두 랙을 가지고 부드럽게 개발 탱크로 낮춥니다. 그 자리의 바닥이 그 자리의 상단과 합쳐질 때까지 막대를 올라갈 때 용매 전면을 지켜보십시오. 막대를 제거합니다.
약 5초 동안 건조한 다음 절차를 반복합니다. 샘플이 매우 집중되어 있으면 이 초점을 세 번째로 수행할 수 있습니다. 첫 번째 개발 시스템.
첫 번째 개발 시스템은 헥산, 에틸 에테르 및 포믹산으로 구성되어 있습니다 98.5 받는 사람 0.5. 먼저 육산으로 졸업한 실린더를 세 번 헹구고 폐기합니다. 85ml를 조금 넘는 육산 기통을 헥산으로 채웁니다.
그런 다음 파이프와 헥산 병을 사용하여 졸업 한 실린더를 90 mls로 채웁니다. 그런 다음 에틸 에테르를 사용하여 반월 상연의 바닥을 91ml 라인에 가져와 에틸 에테르 1 ml를 줄 것입니다. 해밀턴 주사기를 사용하여 포믹산 0.5 ml를 추가합니다.
그러나 먼저 해밀턴 주사기를 포름산으로 세 번 헹구어 주사기에서 샘플을 헹구는 데 사용 되 었던 클로로폼이 남아 있지 않도록합니다. 총 50마이크로리터에 한 번에 2개의 완전한 주사기 또는 25마이크로리터를 추가합니다. 포름산은 주사기의 금속을 부식시키는 것을 피하기 위해 클로로폼으로 즉시 주사기에서 헹구는 것이 중요합니다.
해밀턴 주사기가 깨끗해지면 헥산과 파이펫을 사용하여 정확히 100ml까지 용액을 만듭니다. 그런 다음 3~4회 제한합니다. 약 30ml를 개발 탱크에 붓습니다.
이 30 mls를 사용하여 종이를 적시고 탱크를 헹노를 헹노를 수 있습니다. 헹기 용액을 폐기합니다. 나머지 70ml를 개발 탱크에 추가합니다.
개발 시스템에 랙을 추가합니다. 개발 시스템에 막대를 추가하는 것은 모든 개발에서 동일합니다. 로드를 개발할 시간 동안 타이머가 설정되어 있는지 확인합니다.
그런 다음 랙을 가져 와서 부드럽게 탱크로 낮춥습니다. 용매 전면이 샘플 반점에 도달할 때까지 지켜본 다음 타이머를 시작합니다. 두 번째 개발 시스템.
두 번째 개발 시스템은 헥산, 에틸렌 및 포믹산, 79 대 20 대 1이다. 그래서 이전과 마찬가지로, 육산으로 졸업 실린더를 세 번 헹구는다. 정확히 20 ml의 에테르와 포믹산 1ml를 첨가하여 21ml의 부피를 가져옵니다.
그런 다음 육산으로 100mls의 부피를 가져옵니다. 병 펌프를 사용하여 약 75ml의 헥산을 추가합니다. 그리고 부분에 대 한, 파이펫을 사용 하 여.
여러 번 뚜껑을 덮고 반전하십시오. 개발 탱크에 약 30ml를 추가하여 종이를 적시고 탱크를 헹노게 합니다. 30ml를 버립니다.
나머지 70을 추가하고 막대 세트에 대한 준비가 되었습니다. 세 번째 개발 시스템. 제3개발시스템은 클로로폼, 메탄올 및 클로로폼 추출물, 50, 40~10의 혼합물이다.
졸업한 실린더를 클로로폼으로 세 번 헹구는 다. 약 45ml의 클로로폼을 추가합니다. 파이펫을 사용하여 반월 상 연골의 바닥을 50ml 마크로 가져옵니다.
메탄올 약 38ml를 추가합니다. 반월 상 연골의 바닥을 90ml 라인에 가져옵니다. 그런 다음 마지막 10 mls를 클로로폼 추출물로 채웁니다.
다른 개발 시스템과 마찬가지로, 이 3~4번 반전한 다음 탱크에 30ml를 부어 종이를 적시다. 그 30 mls를 버리고 탱크에 마지막 70 mls를 추가합니다. 메탄올을 준비합니다.
파생에 사용되는 Hilditch 용액을 구성하려면, 또한 건조 또는 어떤 클로로폼을 제거하기 위해 메탄올과 함께 세 번 추가 로 씻어 지질 깨끗한 볼륨 플라스크를 채웁니다. 반월 상 연골의 바닥이 라인을 포함 할 때까지 메탄올을 추가합니다. 메탄올을 측정한 후 섭씨 60도에서 적어도 24시간 동안 건조된 황산나트륨을 추가합니다.
충분한 황산나트륨을 추가하여 볼륨 메트릭 플라스크의 바닥을 덮습니다. 일단 덮여, 메탄올에있는 모든 물이 나트륨 황산나트륨에 의해 흡수되도록 두 번 반전. 반전과 흔들림 후, 적어도 5 분 동안 앉아 보자.
산을 추가합니다. 메탄올이 5분 후에, 천천히 마지막 유리 병에 담아 모든 황산나트륨이 체피 플라스크의 바닥에 머무를 수 있도록 합니다. 황산나트륨은 보통 바닥에 남아 있으므로 모든 메탄올이 부어야 합니다.
연기 후드 뒤쪽에 황산나트륨과 함께 체피를 남기고 건조시다. PIPETMAN을 사용하여 메탄올에 황산을 천천히 넣습니다. 메탄올이 침을 뱉지 않도록 한 번에 몇 방울을 추가합니다.
모든 산이 첨가되면 뚜껑을 덮고 부드럽게 저어서 섞습니다. 이제 솔루션은 파생 상품에 사용할 준비가 되었지만 매주 구성되어야 합니다. 파생 상품 만들기.
부피가 알려진 양으로 자라난 추출물 바이알에서, 소용돌이, 다음 지질 깨끗한, 표시 15ml 유리병에 추출물의 일부를 제거. 제거한 양은 Iatroscan의 샘플 농도에 의해 결정됩니다. 지질이 깨끗한 드럼몬드 파이펫을 사용하여 샘플을 제거합니다.
시료를 제거하면 15ml 유리병을 질소 아래에 놓고 클로로폼을 완전히 증발시다. 원래 샘플을 보관하고 냉동실로 반환할 수 있습니다. 시료가 건조되면, 디클로로메탄 1.5ml 또는 파이펫 풀 1ml, 힐디치 용액 3ml를 추가하여 그날 또는 두 개의 파이펫풀을 일찍 구성하였다.
이 용액은 질소 아래에 보관하고, 소용돌이를 내고 4 분 동안 초음파 처리기에 넣고 1 시간 동안 섭씨 100도의 오븐에 놓습니다. 반응을 중지합니다. 1시간 동안 섭씨 100°C에서 가열한 후, 포화 나트륨 중탄산염 용액0.5ml를 천천히 추가합니다.
산이 중화됨에 따라 거품이 생성됩니다. 그런 다음 헥산 1.5 mls를 추가합니다. 요약하고 힘차게 흔들어 주세요.
두 개의 레이어로 분리되도록 서게 하십시오. 모든 샘플을 처리합니다. 모두 완료될 때까지 첫 번째 단계는 다음 단계에 대한 준비가 됩니다.
위쪽 레이어를 제거합니다. 일단 파생이 중단되고 15ml 유리병에 명확한 분리가 있으면 상단 층을 제거하고 지질 깨끗한 2 ml 유리병에 놓습니다. 상단 레이어의 일부를 2ml 유리병에 넣는 것이 좋습니다.
대부분의 최상위 계층이 제거되면 나머지 솔루션은 삭제할 수 있습니다. 2 ml에 있는 추출 물 질소의 부드러운 스트림 에서 완전히 증발 한다. 바이알이 완전히 건조되면 육산은 다시 추가 할 수 있으며 샘플을 초음파 처리하여 질소 아래에 보관한 다음 GC로 갈 준비가되어 있습니다. 대표적인 결과.
이 수치는 우리의 표준의 원시 TLC-FIC 크로마토그램을 보여줍니다, 그 다이어트를 공급 연어에서 유채 기름과 간 조직으로 만든 다이어트. 가장 빠르게 성장하는 식품 생산 부문인 양식업은 야생 산어밀과 생선 기름에 대한 의존도를 줄여야 합니다. 식물성 오일은 아쿠아피드의 생선 기름을 대체하는 것으로 조사되고 있습니다.
그리고 간, 지질 대사에 대 한 기본 사이트, 분석을 대상으로. 우리는 간에서 규정식에 있는 트리아실글리세롤의 보급을 볼 수 있고, 또한 간에서 막 인지질의 중요성을 볼 수 있습니다. 이 그림은 표준의 크로마토그램을 보여줍니다.
이곳 해안에서 수집된 지질과 정착 입자와 같은 깊이 근처에서 수집된 마이시드의 지질. 여기서 크로마토그램은 플롯 소프트웨어를 통해 처리되었습니다. 매우 높은 에너지 가치를 가진 탄소가 풍부하기 때문에 지질은 탄소 순환에 특히 중요한 선반 영역의 생산성의 중요한 구성 요소입니다.
더 많은 표면 기본 생산은 얕은 물에 해저에 도달합니다. 우리는 작은 mysid우리의 견본에서 가장 높은 지질 농도가 있었다는 것을 것을을 발견했습니다. 왁스와 멸균 에스테르는 여기에 결합되어 있습니다.
그리고 고도 불포화 지방산의 높은 수준의 존재로 인해 피크 분할이있다. 크로마로드 Iatroscan TLC-FID 시스템이 작은 샘플에서 시놉틱 지질 클래스 데이터를 제공하는 급속성은 보다 상세한 크로마토그래피 분석을 수행하기 전에 해양 샘플을 선별하는 강력한 도구입니다. 이러한 분석은 일반적으로 변동성을 높이기 위해 지질 추출물및 파생물에서 성분 화합물의 방출이 필요합니다.
