이 방법은 편두통 환자의 주요 불만 인 광공포증에 대한 전임상 행동 대리자를 제공합니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 감지가 자동이므로 매우 편리하다는 것입니다. 또한 가벼운 혐오감과 불안은 이러한 테스트를 수행함으로써 구별 될 수 있습니다.
첫날에는 밝은/어두운 분석 장치를 켭니다. 조명 강도를 27, 000럭스로 설정합니다. 어두운 삽입물을 밝은/어두운 챔버에 넣습니다.
추적 소프트웨어를 열고 새 프로토콜을 설정합니다. 새 프로토콜 설정에서 지속 시간을 30분으로 설정합니다. 새 분석 설정에서 지속 시간별로 데이터 저장소를 300초로 설정합니다.
새 영역 설정에서 미리 정의된 영역을 선택합니다. 두 개를 선택한 다음 수평을 선택합니다. 챔버가 녹화를 위해 수평으로 두 개의 동일한 크기의 영역으로 나뉘어져 있는지 확인하십시오.
테스트 전에 마우스를 한 시간 동안 시험실에 습관화하고 마우스의 일주기 리듬을 방해하지 않도록 방을 밝게 유지하십시오. 빛/어두운 분석용 모든 장비가 켜져 있는지 확인하여 마우스가 시험실 환경에 완전히 적응할 수 있도록 하십시오. 데이터 획득을 선택하고 마우스 ID를 입력한 후 프로토콜을 시작합니다.
서랍을 사운드 감쇠 칸막이 바깥쪽으로 당겨 밝은/어두운 챔버와 어두운 인서트에 접근합니다. 마우스를 챔버의 조명 영역에 부드럽게 놓고 서랍을 칸막이 안쪽으로 밀어 넣습니다. 소프트웨어가 마우스를 즉시 감지하고 활동을 기록하기 시작하는지 확인하십시오.
30분 후에 녹화가 자동으로 중지될 때까지 기다립니다. 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다. 이전 마우스가 남긴 후각 신호를 근절하기 위해 알코올 냄새 살균 일회용 물티슈를 사용하여 챔버와 어두운 삽입물을 청소하십시오.
넷째 날에는 첫날에 수행 된 모든 단계를 반복하십시오. 일곱째 날에는 첫날에 수행 된 단계를 반복하지만 마우스가 습관화 될 때까지만 반복하십시오. 습관화 후, 마우스를 복강내 CGRP로 투여한다.
그런 다음 생쥐를 집 새장으로 돌려 보내십시오. 30분 후 프로토콜을 다시 시작하고 앞에서 언급한 대로 밝은/어두운 챔버에서 마우스를 실행합니다. 앞에서 설명한 대로 챔버와 어두운 삽입물을 청소하십시오.
10 일째에 수행 된 모든 단계를 반복하십시오. 장치를 켜고 광도를 27, 000lux로 설정합니다. 추적 소프트웨어를 열고 이전에 설명한 대로 새 프로토콜을 설정합니다.
새 영역 설정에서 가운데를 선택한 다음 하나를 선택합니다. 주변을 3.97cm로, 중심을 19.05 x 19.05 센티미터로 설정하십시오. 이전에 입증 된 것처럼 마우스를 시험실에 습관화하십시오.
마우스를 복강내 CGRP로 투여한다. 생쥐를 집 새장으로 돌려 보내십시오. 30분 후에 프로토콜을 시작합니다.
풀아웃 서랍을 소리 감쇠 칸막이 바깥쪽으로 당기고 마우스를 열린 필드 챔버 중앙에 부드럽게 놓습니다. 서랍을 칸막이 안쪽으로 밀어 넣습니다. 30 분 동안 마우스의 행동을 추적 한 다음 마우스를 집 케이지로 되돌립니다.
앞에서 설명한 대로 장치를 청소합니다. 결과는 CGRP의 복강내 주사가 CD1 및 C57 검정 6J 마우스의 광/암흑 분석에서 광 영역에서 소요된 시간의 지속기간을 유의하게 감소시켰지만, CD1 및 C57 검정 6J 마우스에서 개방 필드 분석에서 마우스가 중앙에서 보낸 시간에는 영향을 미치지 않았다는 것을 밝혀냈다. CGRP에 의한 처리는 또한 마우스가 어두운 구역에서 쉬는 시간의 양을 증가시켰지만, CD1 및 C57 검정 6J 마우스 둘 다에서 밝은 영역에서는 그렇지 않았다.
후부 시상 핵에서 뉴런의 광학 자극은 대조군 바이러스 주입 마우스에 비해 channelrhodopsin-2 주입 마우스의 빛/어두운 분석에서 광 영역에서 보낸 마우스의 지속 시간의 상응하는 감소를 가져왔다. 어두운 영역에서는 휴지 시간의 증가가 그러나 광 영역에서는 관찰되지 않았지만 대조군 바이러스 주입 마우스와 비교하여 채널로돕신-2 주입 마우스의 경우에도 관찰되었다. 마우스를 밝고 어두운 방에 넣을 때 가능한 한 많은 스트레스를 피하기 위해 마우스를 부드럽게 다루어야한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.
이 기술은 편두통 및 기타 광공포증 관련 장애의 기초가되는 메커니즘을 탐구하고 잠재적 인 치료제에 대한 전임상 효능을 테스트 할 수있는 길을 열어 줄 것입니다.
