该协议可用于简化从自然界中分离和鉴定Caenorhabditis线虫，并记录与线虫自然环境相关的重要生态和环境数据。该技术的主要优点是其可扩展性和准确性，这是通过利用移动数据收集平台，基于云的数据库和标准化数据处理功能实现的。首先，确定一个位置来调查线虫Caenorhabditis。
要创建支点项目，请使用免费教育协议在线创建一个支点帐户，并添加线虫现场采样应用程序。然后添加线虫隔离应用程序。将一组QR码标签打印为C标签以跟踪集合，将S标签打印为跟踪线虫隔离。
将C标签贴在Ziploc塑料袋上进行包装。保留一套S标签，以便在实验室中使用。从支点移动应用程序的下拉菜单中选择线虫场采样，然后按 plus 在项目中开始新记录。
拍摄基材的照片。点击C标签字段，然后选择扫描。使用移动设备摄像头扫描收集袋上的条形码，然后点按完成。
点击基板字段并选择基板类型。使用非接触式温度计测量基板的表面温度，并在基板温度场中记录该值。还要测量和记录环境温度和湿度。
通过点击屏幕左上角的保存来保存并在支点中录制。通过将收集袋倒置为手套来收集一汤匙没有棍子或其他硬块的基材，然后密封袋子。对于每个 Ziploc 袋子，请注意袋子上的 C 标签，并将匹配的 C 标签贴在标有 OP50 细菌的 10 厘米板的盖子上。
使用干净的塑料勺将一汤匙样品从每个收集袋转移到C板中。在“支点”应用程序上，从应用程序菜单中选择线虫隔离。然后通过点击右下角的加号图标来创建新的隔离记录。
点击选择按钮以查找与样品关联的C标签。点击搜索图标。然后点击扫描图标以扫描C标签QR码。
用解剖显微镜在C板上寻找线虫。点击样品场上的蠕虫以记录样品上线虫的存在。如果没有线虫存在，请对C板进行parafilm并将其丢弃在生物危害箱中。
如果存在线虫，从C板中分离出最多五个线虫，并将每个线虫转移到自己的S板。接下来，点击“S 标记的板”字段以输入用于此隔离的 S 板。点击右下角的加号。
点击S-Label，然后单击扫描以打开设备相机，然后扫描S-plate上的S-Label QR码。一旦隔离记录正确添加了所有信息，点击右上角的保存按钮，然后用分离的线虫对S板进行parafilm，并将它们放在指定用于容纳带有线虫的S板的区域。登录支点网站，选择线虫隔离应用。
单击导出程序以下载包含线虫隔离s_labeled_plates的 zip 文件。csv 文件。导航到野生分离基因分型模板谷歌工作表并复制谷歌工作表。
将从线虫隔离复制的S标签放在s_labeled_plates。csv 列到基因分型表中。隔离后48小时检查S板上是否有增殖动物。
如果S板有增殖动物，请在基因分型表的增殖48列中输入一个，然后将S板移动到标有48小时增殖框一的框中。在隔离后168小时再次检查隔离后48小时未增殖的S板。如果S板现在正在增殖，请在基因分型表上的增殖168列中输入一个，然后将S板移动到标有168小时增殖盒一的盒子中。
在Google表格中过滤基因型，使其仅将S标签包含在一个要裂解的增殖框中，然后选择通过裂解节点的S-Label列。为每个要裂解的增殖箱打印裂解工作表。准备12个孔条管用于裂解样品。
打开一个条形管的盖子，并用重复的移液器向每个盖子加入八微升的裂解缓冲液。从源板中选取三到五只动物到裂解工作表上指示的盖子位置。重复多达八个条形管，并将条形管放入零下80摄氏度的冰箱中。
取出成套的条形管，并在热循环仪中运行裂解程序。然后将裂解物储存在零下80摄氏度长达一周。从零下80摄氏度的冰箱中取出条形管，并在冰上解冻裂解材料。
当裂解材料解冻时，在冰上的单独管中制备ITS2和SSU预混液。使用低容量多通道移液管将两微升裂解物加入PCR板中的适当孔中。使用适当的热循环仪程序运行PCR，并在基因分型表中记录哪些S标签产生ITS2或SSU PCR产物。
对于每个 ITS2 阳性样品，使用剩余的 ITS2 PCR 产物进行 Sanger 测序，并从测序平台获取每个 S-Label 的 seq 输出文件。在 Web 浏览器中导航到 NBCI BLAST 网站以开始 BLAST 搜索。对于 BLAST 到 Caenorhabditis 物种的 S 板序列，请在物种 ID 列中输入顶部 BLAST 命中的完整属和物种名称。
按照Caenorhabditis命名惯例，使用唯一名称命名菌株，并在菌株名称列中输入菌株名称。要处理数据，请导航到支点网站并从支点数据库导出原始项目数据。打开一个新的 R 脚本，并按照 easyfulcrum 小插图中的说明处理集合数据。
在NBCI BLAST中，S-Label S-05554的结果表明，最受打击的是Caenorhabditis briggsae。此外，一些分离的线虫需要额外的努力来进行基因分型。例如，在第一次裂解尝试后，大约2%的分离物无法用SSU PCR引物组扩增，必须依靠以确保裂解材料适合使用ITS2引物组扩增。
按照这一程序，研究人员可以探索与野生线虫分离物相关的生态和环境数据，以确定最有可能藏匿特定线虫物种的位置和基质特征。
