通过非侵入性经鼻途径在免疫功能正常的小鼠大脑中移植人诱导的多能干细胞衍生小胶质细胞

该方案允许通过将CSF1受体拮抗剂PLX5622的药理学开/关与经鼻移植相结合，将iPSMG非侵入性移植到免疫功能正常的小鼠脑中。该技术的主要优点是iPSMG即使在免疫功能正常的小鼠中也可以移植而不会引起脑损伤。小胶质细胞移植可作为未来在各种神经退行性疾病中将功能失调的小胶质细胞与功能性小胶质细胞交换的潜在疗法。

演示该程序的将是Bijay Parajuli，他是我实验室的研究员。首先在37摄氏度的水浴中快速解冻冷冻诱导的多能干细胞衍生的人小胶质细胞。旋转样品，直到所有可见的冰都融化。

将解冻的iPSMG加入培养基中，加热至37摄氏度。将1毫升细胞加入10毫升培养基中。将细胞以300倍g离心五分钟以获得细胞沉淀。

在不干扰细胞沉淀的情况下除去上清液。加入移植培养基以获得每微升10至第五个细胞的细胞浓度。将iPSMG放在冰上，然后立即进行移植。

为了准备小鼠进行经鼻移植，用含有PLX的饮食喂养雄性小鼠七天。在第七天结束时，停止PLX饮食并以正常饮食喂养小鼠。在iPSMG经鼻移植前一小时，使用10微升移液器尖端向每个鼻孔施用2.5微升PBS中的透明质酸酶，以增加对鼻粘膜的通透性。

在施用透明质酸酶后将小鼠置于仰卧位。在iPSMG经鼻移植前10分钟给予2.5微升透明质酸酶。使用10微升移液器吸头将2.5微升细胞悬浮液施加到小鼠的一个鼻孔中。

将小鼠置于仰卧位五分钟，然后将细胞悬浮液施用于另一个鼻孔。给药四次细胞悬浮液，每只动物的总体积为20微升。停止PLX喂养后48小时，在同一只小鼠上重复施用透明质酸酶和细胞悬浮液。

对于细胞因子的施用，使用10微升移液器尖端将2.5微升移植培养基施用于小鼠的一个鼻孔。经过两个月的鼻移植后，移植细胞的数量可以通过计数对人类特异性和全小胶质细胞标志物呈阳性的细胞来确定。内源性小鼠小胶质细胞仅对全小胶质细胞标志物呈阳性。

在对照小鼠中，在皮质和海马体中仅检测到小鼠小胶质细胞。在iPSMG移植小鼠的皮层中，仅检测到小鼠小胶质细胞，而在海马体中检测到iPSMG。当尝试这种方案时，完全去除上清液对于防止细胞因子的稀释至关重要。

每12小时施用细胞因子对于移植细胞的活力至关重要。iPSMG移植需要消耗内源性小鼠小胶质细胞。该程序允许将iPSMG移植到正常或患病的小鼠大脑中。

因此，可以确定iPSMG的特征以及对疾病的反应。该技术适用于确定iPSMG在小鼠大脑中的体内特性。因此，将iPSMG移植到疾病模型小鼠中将有助于我们了解反应，并可能为新的治疗靶点铺平道路。