该协议描述了一种测量心小梁中松弛的机械控制或肌肉松弛的应变依赖性的方法。这种技术的主要优点是它专注于心脏松弛。鉴于缺乏舒张期疾病的治疗选择，该技术可用于识别与心脏松弛相关的新指标和药物靶点。
这种方法将在啮齿动物心脏上显示，但它可用于任何完整的肌肉。演示这个程序的将是我和我实验室的本科生研究助理Anita Abbo。首先，从套管中取出粗略解剖的小动物模型的心脏，并将其放入硅胶弹性体涂层的称重盘中，为小梁隔离做准备。
然后将心脏放在体视显微镜下照亮。定位右心室流出道后，将左心房和心室顶端固定在培养皿中的硅胶弹性体上。使用长Vannas剪刀，沿隔从右心室流出道切到顶点。
接下来，从右心室流出道切到主动脉附近的右心房，然后切开右心房。使用镊子，小心地从流出道拉开右心室游离壁，不要拉伸组织。如果发现白色细结缔组织链，可以切割，但不能切割较大的粉红色组织链，因为它们可能是小梁。
将右心室三角形的自由壁固定在培养皿上，露出右心室。使用薄的钝端熔化玻璃移液管，在不施加压力的情况下搜索暴露的心内膜是否有独立的小梁。避免使用三角形肌，选择平行侧的小梁，这些小梁通常位于右心室游离壁底部附近和沿隔膜。
使用小Vannas剪刀解剖小梁，在小梁的每一端留下一毫米立方的组织以允许附着。接下来，从七毫升移液管的末端切下约两英寸，慢慢将小梁吸入移液器中，然后将其转移到新的称重盘中，其中包含50%灌注溶液和50%改良的Tyrode溶液。让肌肉平衡到混合溶液中细胞外钙的增加几分钟。
关闭向实验室提供超流或抽吸的泵。使用大口径转移移液器，将小梁移动到充满Tyrode溶液的实验室中。将小梁末端的一块立方组织固定在力传感器上的钩子上，然后将第二个立方体固定到电机上。
重新启动超级融合并开始起搏肌肉以确定阈值电压。以高于阈值电压 20% 的速度行驶约 1 小时。在这个平衡期结束时，使用连接到电机的千分尺慢慢拉伸肌肉，直到通过观察产生的张力达到最佳应力生成。
当被动舒张张力上升速度快于峰值张力时，停止增加肌肉长度，表明已通过最佳长度。关闭透射显微镜照明，并使用鹅颈照明器以陡峭的角度照亮小梁。使用通过显微镜光学元件连接的先前校准的相机，将舒张期间的小梁图像捕获到实验文件夹中。
平均直径测量值，并使用先前获得的校准将直径和长度从像素转换为毫米。以微米为单位计算横截面积和肌肉长度。在数据采集软件中，通过在dap文件中定义后载荷来获取负载钳位数据，并通过在文本编辑器中保存文件来迭代比例增益和积分参数的值，然后在界面中按“运行实验”。
通过改变模式来控制负载钳的末端。重复采集，同时将负载钳的末端从零更改为完成，重新延长回起始长度。要增加长度，请逐渐增加结束负荷钳的阈值，从零开始，直到肌肉几乎重新延长到其原始长度。
如果需要，修改后载荷并立即重复采集。如果需要，通过拉伸或缩短肌肉来改变预紧力，或者通过在 Tyrode 溶液中添加化合物来治疗肌肉，但至少等待 20 分钟以确保缓慢的力反应稳定并让化合物完全穿透肌肉。数据采集完成后，去除小梁并清洁实验系统。
通过确保数据分析程序分析钳位节拍，并且程序正确获取负载钳位的开始来量化松弛。在量化给定条件的所有迹线后，绘制松弛率和应变率之间的关系，将最大数据限制为每秒小于 1 的生理应变率。排除低应变率下的数据，因为弛豫阶段可能无法反映指数衰减。
得到松弛率与应变率之间的直线斜率，并将斜率记录为松弛机械控制的指标。此处显示了使用鹅颈管LED灯以与显微镜镜头轴线成75度的陡峭角度照亮的单个心脏小梁。同一小梁的应力时间和应变时间曲线在收缩期应变率增加时显示等长抽搐和3个负荷钳夹抽搐。
应变率是根据等距松弛之前应变的导数计算得出的。数据绘制在松弛率与应变率图上，其中线的斜率提供了松弛的机械控制或MCR指数。该方案中最困难的组成部分是仔细分离心小梁。
该方案可以与其他肌肉测量相结合，包括细胞内钙、收缩力和肌节长度。此外，该方法正用于识别分子机制并更好地了解心脏松弛受损的病理生理学。
