孤立大鼠心脏长期心室颤动模型

该协议提供了使用Langendorff装置开发长期心室颤动大鼠模型的详细需求。它填补了小动物模型中长期心室颤动的空白。该技术简单、经济、可重复且稳定。

该技术可用于在心脏外科手术和手术领域的某些临床情况下进行灌注下的心室颤动停止的研究。首先，通过在蒸馏水中加入 118 毫摩尔氯化钠、4.7 毫摩尔氯化钾、1.2 毫摩尔氯化镁、1.2 毫摩尔磷酸二氢钠、1.8 毫摩尔氯化钙、25 毫摩尔碳酸氢钠、11.1 毫摩尔葡萄糖和 0.5 毫摩尔 EDTA 来制备 Krebs-Henseleit 或 KH 缓冲液。然后准备改进的朗根道夫灌注系统。

在大约80毫米汞柱的压力下，用95%的氧气和5%的二氧化碳连续地向含有KH缓冲液的烧瓶充气。将灌注管的一端放入KH缓冲液中，将灌注管的中间穿过水浴，并将钝的20号针连接到灌注管的另一端。将针头悬挂在金属丝支架上后，调节水浴的温度，使灌注系统末端的KH缓冲液温度为37摄氏度。

使用生理信号记录仪将所有模拟信号数字化并记录下来。使用两个不锈钢针电极记录双极心电图或ECG，使用两个不锈钢针电极进行电刺激。将四个电极的一端连接到生理信号记录器，另一端靠近连接到设备后心脏将定位的区域。

接下来，使用笔记本电脑软件自动识别、调整和记录双极心电图和血流动力学参数。将电刺激器参数设置为 30 赫兹交流电，低压组接收 2 伏，高压组接收 6 伏。将麻醉的大鼠在颈椎夹层和气管插管后连接到呼吸机上，用齿钳将皮肤从剑突上抬起，并用组织剪刀在皮肤上做一个三厘米的横向切口。

将皮肤和肋骨切口以V形延伸至两侧的腋窝。使用钝性夹层将头臂干与周围组织分开。然后用弯曲的镊子夹住头臂躯干，以方便取出心脏。

立即将心脏浸入带有0至4摄氏度KH缓冲液的培养皿中，以洗涤并泵出残留的血液。将心脏转移到第二个培养皿中。切断多余的组织并识别主动脉。

使用两个眼科钳提起主动脉并将主动脉插入朗根道夫装置的钝针中。然后在助手的帮助下，用 0 缝合线打一个结。打开灌注流量调节器。

将球囊通过二尖瓣推入左心室。用蒸馏水填充气球，以达到 5 至 10 毫米汞柱的舒张压结束。将心电图和电刺激电极连接到心脏。

将心脏放在保持在 37 摄氏度的夹套玻璃室的中心。让心脏在腔室内平衡 20 分钟。然后调节水浴温度，使夹套玻璃室内的温度保持在30摄氏度。

温度达到所需水平后，激活笔记本电脑软件上的电刺激开关。如果动物是持续刺激的长期心室颤动或VF组的一部分，请允许90分钟的电刺激。VF 90 分钟后，使用电极进行 0.1 焦耳的直流除颤。

同时，调节水浴温度，使夹套玻璃室内的温度缓慢上升至37摄氏度，持续10分钟。除颤后，让心脏跳动 60 分钟，然后用 10% 氯化钾在大约 37 摄氏度下缓慢灌注停止跳动。取出心脏进行肌酸激酶或 CK-MB 测定和组织学分析。

此处显示了 VF 的速率、除颤的成功率和 VF 模型的成功率。LC组和HC组接受连续电刺激，因此VF的成功率为100%。但HC组显示出较低的除颤成功率。

5分钟后关闭电刺激的LI组和HI组的VF率不同，但与LC组和HC组相比，两组的VF率均较慢。LC组和LI组都有更好的除颤成功率。但总体而言，LC组的模型成功率最高，而LI组的模型成功率较低。此处显示了心率或心率、冠状动脉血流或CF，以及左心室压差或LVPD恢复率。

C组血流动力学在实验期间保持稳定，HR、CF和LVPD略有下降。两组低电压诱导VF性能相似，恢复率较好。与C组相比，这些组的HR和LVPD差异无统计学意义，但CF的恢复率明显优于 C.In 组，高电压诱导长期VF组的血流动力学恢复率较差，高压连续刺激的长期VF组的血流动力学恢复率最差。

冠状动脉积液分析显示，两个高压组的CK-MB水平均较高。两低电压组间无差异，C组苏木精和伊红染色显示HC组电极烧伤区。该方案适用于与心室颤动骤停和心血管外科灌注相关的研究。