Bu protokol, Langendorff aparatını kullanarak uzun süreli bir ventriküler fibrilasyon sıçan modeli geliştirmek için ayrıntılı bir ihtiyaç sağlar. Küçük hayvan modelinde uzun süreli ventriküler fibrilasyon boşluğunu doldurur. Teknik basit, ekonomik, tekrarlanabilir ve kararlıdır.
Bu teknik, kalp cerrahisi seansları ve operasyonları alanında belirli klinik durumlarda gerçekleştirilen perfüzyon altında ventriküler fibrilasyon durması çalışmasında kullanılabilir. Başlamak için, Krebs-Henseleit veya KH tamponunu, damıtılmış suya 118 milimolar sodyum klorür, 4.7 milimolar potasyum klorür, 1.2 milimolar magnezyum klorür, 1.2 milimolar sodyum dihidrojen fosfat, 1.8 milimolar kalsiyum klorür, 25 milimolar sodyum bikarbonat, 11.1 milimolar glikoz ve 0.5 milimolar EDTA ekleyerek hazırlayın. Daha sonra modifiye Langendorff perfüzyon sistemini hazırlayın.
KH tamponu içeren şişeyi yaklaşık 80 milimetre cıva basıncında %95 oksijen ve %5 karbondioksit ile sürekli olarak gazlayın. Perfüzyon tüpünün bir ucunu KH tamponuna yerleştirin, perfüzyon tüpünün ortasını su banyosundan geçirin ve perfüzyon tüpünün diğer ucuna künt bir 20 gauge iğne takın. İğneyi bir tel stand üzerinde askıya aldıktan sonra, su banyosunun sıcaklığını, perfüzyon sisteminin sonundan KH tamponunun sıcaklığı 37 santigrat derece olacak şekilde ayarlayın.
Tüm analog sinyalleri dijitalleştirmek ve kaydetmek için fizyolojik bir sinyal kaydedici kullanın. Bipolar elektrokardiyogram veya EKG kaydetmek için iki paslanmaz çelik iğne elektrodu ve elektriksel stimülasyon için iki paslanmaz çelik iğne elektrodu kullanın. Dört elektrotun bir ucunu fizyolojik sinyal kaydediciye, diğer ucunu ise cihaza bağlandıktan sonra kalbin konumlandırılacağı alana yakın bir yere bağlayın.
Ardından, bipolar EKG ve hemodinamik parametreleri otomatik olarak tanımak, ayarlamak ve kaydetmek için dizüstü bilgisayar yazılımını kullanın. Elektrik stimülatör parametrelerini, düşük voltaj grubu 2 volt ve yüksek voltaj grubu 6 volt alırken 30 hertz alternatif akıma ayarlayın. Servikal diseksiyon ve trakeal entübasyondan sonra ventilatöre bağlanan anestezili sıçan ile, cildi dişli forsepslerle ksifoid süreçten kaldırın ve doku makası ile deride üç santimetrelik enine bir kesi yapın.
Deri ve kaburga insizyonlarını V şeklinde her iki taraftaki aksillaya uzatın. Brakiyosefalik gövdeyi çevreleyen dokudan ayırmak için künt diseksiyon kullanın. Daha sonra kalbin çıkarılmasını kolaylaştırmak için brakiyosefalik gövdeyi kavisli forsepslerle kelepçeleyin.
Kalan kanı yıkamak ve pompalamak için kalbi derhal 0 ila 4 santigrat derecede KH tamponlu bir Petri kabına daldırın. Kalbi ikinci bir Petri kabına aktarın. Gereksiz dokuyu kesin ve aortu tanımlayın.
Aortu kaldırmak ve aortu Langendorff aparatının künt iğnesine sokmak için iki oftalmik forseps kullanın. Sonra bir asistanın yardımıyla, 0 dikiş ipliği ile bir düğüm bağlayın. Perfüzyon akış regülatörünü açın.
Balonu mitral kapaktan sol ventriküle doğru itin. 5 ila 10 milimetre cıva son diyastolik basıncı elde etmek için balonu damıtılmış suyla doldurun. EKG ve elektriksel stimülasyon elektrotlarını kalbe bağlayın.
Kalbi, 37 santigrat derecede tutulan ceketli cam odanın ortasına yerleştirin. Kalbin odanın içinde 20 dakika boyunca dengelenmesine izin verin. Ardından, ceketli cam haznesindeki sıcaklığı 30 santigrat derecede tutmak için su banyosu sıcaklığını ayarlayın.
Sıcaklık istenen seviyeye ulaştıktan sonra, dizüstü bilgisayar yazılımındaki elektriksel stimülasyon anahtarını etkinleştirin. Hayvan sürekli olarak uyarılan uzun süreli ventriküler fibrilasyon veya VF grubunun bir parçasıysa, 90 dakikalık elektriksel stimülasyona izin verin. 90 dakikalık VF'den sonra, 0.1 joule doğru akım defibrilasyonu vermek için elektrotlar kullanın.
Aynı zamanda, ceketli cam oda içindeki sıcaklığın 10 dakika boyunca 37 santigrat dereceye yavaşça yükselmesini sağlamak için su banyosu sıcaklığını düzenleyin. Defibrilasyondan sonra, kalbin 60 dakika boyunca atmasına izin verin ve daha sonra yaklaşık 37 santigrat derecede% 10 potasyum klorür ile yavaş perfüzyonla atışı durdurun. Kreatin kinaz veya CK-MB testi ve histolojik analiz için kalbi çıkarın.
Burada VF oranları, defibrilasyonun başarı oranı ve VF modelinin başarı oranı gösterilmektedir. Grup LC ve Grup HC sürekli elektriksel stimülasyon aldı ve böylece VF %100 başarı oranı ile gerçekleşti. Ancak grup HC, defibrilasyon için daha düşük başarı oranları göstermiştir.
Elektriksel stimülasyonun beş dakika sonra kapatıldığı Grup LI ve Grup HI farklı VF oranlarına sahipti, ancak VF oranı her iki grupta da Grup LC ve Grup HC ile karşılaştırıldığında daha yavaştı. Hem Grup LC hem de Grup LI daha iyi defibrilasyon başarı oranlarına sahipti. Ancak genel olarak, Grup LC en yüksek model başarı oranına sahipken, Grup LI daha düşük bir model başarı oranına sahipti. Kalp hızı veya HR, koroner akım veya CF ve sol ventrikül basıncı farkı veya LVPD iyileşme oranları burada gösterilmektedir.
Grup C'nin hemodinamiği deney sırasında stabil kaldı ve HR, CF ve LVPD'de hafif bir düşüş gösterdi. Düşük voltaj kaynaklı VF'ye sahip iki grup benzer performansa ve iyi bir iyileşme oranına sahipti. HR ve LVPD, bu gruplarda Grup C'ye kıyasla anlamlı olarak farklı değildi.Ancak KF'nin iyileşme oranı, Grup C.In kontrastına göre anlamlı derecede daha iyiydi, uzun süreli VF'ye indüklenen yüksek voltajlı iki grubun hemodinamik iyileşme oranı zayıftı ve yüksek voltajlı sürekli uyarılmış uzun süreli VF grubu en kötü iyileşme oranını gösterdi.
Koroner efüzyon sıvılarının analizi, her iki yüksek voltaj grubunda da CK-MB düzeylerinin daha yüksek olduğunu göstermiştir. İki alçak gerilim grubu ile Grup C arasında fark saptanmadı.Hematoksilin ve eozin boyamasında Grup HC'de elektrot yanık bölgesi saptandı. Bu protokol kardiyovasküler cerrahide ventriküler fibrilasyon durması ve perfüzyon ile ilgili çalışmalar için uygundur.
