Этот протокол обеспечивает детальную необходимость разработки долгосрочной модели фибрилляции желудочков крыс с использованием аппарата Лангендорфа. Он заполняет пробел в длительной фибрилляции желудочков на модели мелких животных. Технические характеристики просты, экономичны, воспроизводимы и стабильны.
Данная методика может быть использована при исследовании фибрилляции желудочков, остановке при перфузии, которая выполняется в определенных клинических ситуациях в области кардиохирургических сессий и операций. Для начала приготовьте буфер Кребса-Хенселейта или KH, добавив 118 миллимоляров хлорида натрия, 4,7 миллимоляра хлорида калия, 1,2 миллимоляра хлорида магния, 1,2 миллимоляра дигидрофосфата натрия, 1,8 миллимоляра хлорида кальция, 25 миллимоляров бикарбоната натрия, 11,1 миллимоляра глюкозы и 0,5 миллимоляра ЭДТА в дистиллированную воду. Затем приготовьте модифицированную перфузионную систему Лангендорфа.
Непрерывно газируйте колбу, содержащую буфер KH, 95% кислорода и 5% углекислого газа при давлении примерно 80 миллиметров ртутного столба. Поместите один конец перфузионной трубки в буфер KH, пропустите середину перфузионной трубки через водяную баню и прикрепите тупую иглу 20 калибра к другому концу перфузионной трубки. Подвесив иглу на проволочной подставке, отрегулируйте температуру водяной бани так, чтобы температура буфера KH от конца перфузионной системы составляла 37 градусов Цельсия.
Используйте регистратор физиологических сигналов для оцифровки и записи всех аналоговых сигналов. Используйте два игольчатых электрода из нержавеющей стали для записи биполярной электрокардиограммы или ЭКГ и два игольчатых электрода из нержавеющей стали для электростимуляции. Подключите один конец из четырех электродов к регистратору физиологических сигналов, а другой конец близко к области, где будет расположено сердце после прикрепления к аппарату.
Затем используйте программное обеспечение ноутбука для автоматического распознавания, настройки и записи биполярных параметров ЭКГ и гемодинамики. Установите параметры электростимулятора на переменный ток 30 Гц, при этом группа низкого напряжения получает 2 вольта, а группа высокого напряжения получает 6 вольт. Когда анестезированная крыса подключена к аппарату искусственной вентиляции легких после рассечения шейки матки и интубации трахеи, приподнимите кожу с мечевидного отростка зубчатыми щипцами и сделайте трехсантиметровый поперечный разрез на коже тканевыми ножницами.
Расширьте разрезы кожи и ребер до подмышечных впадин с обеих сторон в форме буквы V. Используйте тупое рассечение, чтобы отделить брахиоцефальный ствол от окружающих тканей. Затем зажмите брахиоцефальный ствол изогнутыми щипцами, чтобы облегчить удаление сердца.
Немедленно погрузите сердце в чашку Петри с буфером KH при температуре от 0 до 4 градусов Цельсия, чтобы промыть и откачать остаточную кровь. Переложите сердце во вторую чашку Петри. Отрежьте лишнюю ткань и определите аорту.
С помощью двух глазных щипцов приподнимите аорту и вставьте аорту в тупую иглу аппарата Лангендорфа. Затем с помощью помощника завяжите узел шовной нитью 0. Включите регулятор потока перфузии.
Протолкните баллон через митральный клапан в левый желудочек. Наполните баллон дистиллированной водой, чтобы достичь конечного диастолического давления от 5 до 10 миллиметров ртутного столба. Подключите электроды ЭКГ и электростимуляции к сердцу.
Поместите сердце в центр стеклянной камеры с рубашкой, поддерживаемой при температуре 37 градусов по Цельсию. Дайте сердцу уравновеситься в течение 20 минут внутри камеры. Затем отрегулируйте температуру водяной бани, чтобы поддерживать температуру в стеклянной камере с рубашкой на уровне 30 градусов по Цельсию.
После того, как температура достигнет желаемого уровня, активируйте переключатель электростимуляции в программном обеспечении ноутбука. Если животное относится к группе непрерывно стимулируемой длительной фибрилляции желудочков или VF, дайте 90 минут электрической стимуляции. После 90 минут VF используйте электроды, чтобы дать 0,1 джоуля дефибрилляции постоянным током.
Одновременно отрегулируйте температуру водяной бани, чтобы температура в стеклянной камере с рубашкой медленно повышалась до 37 градусов по Цельсию в течение 10 минут. После дефибрилляции дайте сердцу побиться в течение 60 минут, а затем остановите биение путем медленной перфузии 10% хлорида калия примерно при 37 градусах Цельсия. Удалите сердце для анализа креатинкиназы или CK-MB и гистологического анализа.
Здесь показаны показатели ВФ, успешность дефибрилляции и успешность модели ВФ. Группа LC и группа HC получали непрерывную электрическую стимуляцию, и, таким образом, VF происходила со 100% успехом. Но группа HC продемонстрировала более низкие показатели успеха для дефибрилляции.
Группа LI и группа HI, в которых электрическая стимуляция была отключена через пять минут, имели разные показатели VF, но частота VF была медленнее в обеих группах по сравнению с группой LC и группой HC. Как в группе LC, так и в группе LI были лучшие показатели успешности дефибрилляции. Но в целом группа LC имела самый высокий уровень успеха модели, тогда как группа LI имела более низкий уровень успеха модели. Здесь показана частота сердечных сокращений или ЧСС, коронарный кровоток или муковисцидоз, а также перепад давления в левом желудочке или показатели восстановления LVPD.
Гемодинамика группы С оставалась стабильной в течение эксперимента и показала незначительное снижение ЧСС, КФ и ЛЖПД. Две группы с низковольтным индуцированным VF имели схожую производительность и хорошую скорость восстановления. ЧСС и LVPD существенно не отличались в этих группах по сравнению с группой C. Но скорость восстановления муковисцидоза была значительно лучше, чем в группе C.In, напротив, скорость гемодинамического восстановления в двух группах с высоким напряжением, индуцированным длительным VF, была низкой, а группа с непрерывно стимулированной высоким напряжением показала худшую скорость восстановления.
Анализ коронарных выпотных жидкостей показал, что уровни CK-MB были выше в обеих группах высокого напряжения. Не было обнаружено различий между двумя группами низкого напряжения и группой C. Окрашивание гематоксилином и эозином показало область ожога электрода в группе HC. Этот протокол подходит для исследований, связанных с остановкой фибрилляции желудочков и перфузией в сердечно-сосудистой хирургии.
