يوفر هذا البروتوكول حاجة مفصلة لتطوير نموذج فأر الرجفان البطيني طويل الأمد باستخدام جهاز Langendorff. يملأ فجوة الرجفان البطيني على المدى الطويل في النموذج الحيواني الصغير. التقنية بسيطة واقتصادية وقابلة للتكرار ومستقرة.
يمكن استخدام هذه التقنية في دراسة توقف الرجفان البطيني تحت التروية والذي يتم إجراؤه في حالات سريرية معينة في مجال جلسات وعمليات جراحة القلب. للبدء ، قم بإعداد المخزن المؤقت Krebs-Henseleit أو KH بإضافة 118 مليمول كلوريد الصوديوم ، 4.7 مليمول كلوريد البوتاسيوم ، 1.2 مليمولار كلوريد المغنيسيوم ، 1.2 مليمولار فوسفات هيدروجين الصوديوم ، 1.8 مليمولار كلوريد الكالسيوم ، 25 مليمول بيكربونات الصوديوم ، 11.1 مليمولار الجلوكوز ، و 0.5 مليمولار EDTA في الماء المقطر. ثم قم بإعداد نظام نضح Langendorff المعدل.
الغاز المستمر القارورة التي تحتوي على عازلة KH مع 95 ٪ الأكسجين و 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون عند ضغط حوالي 80 ملليمتر من الزئبق. ضع أحد طرفي أنبوب التروية في المخزن المؤقت KH ، وقم بتمرير منتصف أنبوب التروية عبر الحمام المائي ، وقم بتوصيل إبرة قياس 20 حادة بالطرف الآخر من أنبوب التروية. بعد تعليق الإبرة على حامل سلكي ، اضبط درجة حرارة الحمام المائي بحيث تكون درجة حرارة المخزن المؤقت KH من نهاية نظام التروية 37 درجة مئوية.
استخدم مسجل إشارة فسيولوجية لرقمنة وتسجيل جميع الإشارات التناظرية. استخدم قطبين كهربائيين بإبرة من الفولاذ المقاوم للصدأ لتسجيل مخطط كهربية القلب ثنائي القطب أو ECG وقطبين كهربائيين بإبرة من الفولاذ المقاوم للصدأ للتحفيز الكهربائي. قم بتوصيل أحد طرفي الأقطاب الكهربائية الأربعة بمسجل الإشارات الفسيولوجية والطرف الآخر بالقرب من المنطقة التي سيتم وضع القلب فيها بعد توصيله بالجهاز.
بعد ذلك ، استخدم برنامج الكمبيوتر المحمول للتعرف تلقائيا على معلمات تخطيط القلب ثنائي القطب ومعلمات الدورة الدموية وضبطها وتسجيلها. اضبط معلمات المحفز الكهربائي على تيار متناوب 30 هرتز مع مجموعة الجهد المنخفض التي تستقبل 2 فولت ومجموعة الجهد العالي التي تتلقى 6 فولت. مع توصيل الفئران المخدرة بجهاز التنفس الصناعي بعد تشريح عنق الرحم والتنبيب الرغامي ، ارفع الجلد عن عملية الخنجري بالملقط المسنن وقم بعمل شق عرضي بطول ثلاثة سنتيمترات في الجلد بمقص الأنسجة.
قم بتمديد شقوق الجلد والأضلاع إلى الإبطين على كلا الجانبين على شكل حرف V. استخدم تشريحا حادا لفصل الجذع العضدي الرأسي عن الأنسجة المحيطة. ثم قم بتثبيت الجذع العضدي الرأسي بالملقط المنحني لتسهيل إزالة القلب.
اغمر القلب على الفور في طبق بتري مع مخزن مؤقت KH عند 0 إلى 4 درجات مئوية لغسل وضخ الدم المتبقي. نقل القلب إلى طبق بتري الثاني. قطع الأنسجة الزائدة عن الحاجة وتحديد الشريان الأورطي.
استخدم ملقطين للعين لرفع الشريان الأورطي وإدخال الشريان الأورطي في الإبرة الحادة لجهاز Langendorff. ثم بمساعدة مساعد ، اربط عقدة بخيط خياطة 0. قم بتشغيل منظم تدفق التروية.
ادفع البالون عبر الصمام التاجي إلى البطين الأيسر. املأ البالون بالماء المقطر لتحقيق ضغط انبساطي نهائي من 5 إلى 10 ملليمترات من الزئبق. قم بتوصيل مخطط كهربية القلب وأقطاب التحفيز الكهربائي بالقلب.
ضع القلب في وسط الحجرة الزجاجية المغلفة عند 37 درجة مئوية. اسمح للقلب بالتوازن لمدة 20 دقيقة داخل الغرفة. ثم اضبط درجة حرارة حمام الماء للحفاظ على درجة الحرارة داخل الغرفة الزجاجية المغلفة عند 30 درجة مئوية.
بعد أن تصل درجة الحرارة إلى المستوى المطلوب ، قم بتنشيط مفتاح التحفيز الكهربائي على برنامج الكمبيوتر المحمول. إذا كان الحيوان جزءا من الرجفان البطيني طويل الأمد أو مجموعة VF التي يتم تحفيزها باستمرار ، فاترك 90 دقيقة من التحفيز الكهربائي. بعد 90 دقيقة من VF ، استخدم الأقطاب الكهربائية لإعطاء 0.1 جول من إزالة الرجفان بالتيار المباشر.
في نفس الوقت ، قم بتنظيم درجة حرارة حمام الماء للسماح لدرجة الحرارة بالارتفاع ببطء داخل الغرفة الزجاجية المغلفة إلى 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بعد إزالة الرجفان ، اترك القلب ينبض لمدة 60 دقيقة ثم أوقف النبض عن طريق التروية البطيئة مع 10٪ كلوريد البوتاسيوم عند حوالي 37 درجة مئوية. إزالة القلب لكيناز الكرياتين أو مقايسة CK-MB والتحليل النسيجي.
يتم عرض معدلات VF ومعدل نجاح إزالة الرجفان ومعدل نجاح نموذج VF هنا. تلقت المجموعة LC والمجموعة HC تحفيزا كهربائيا مستمرا ، وبالتالي حدث VF بمعدل نجاح 100٪. لكن المجموعة HC أظهرت معدلات نجاح أقل لإزالة الرجفان.
المجموعة LI والمجموعة HI التي تم فيها إيقاف التحفيز الكهربائي بعد خمس دقائق كان لها معدلات مختلفة من VF ، لكن معدل VF كان أبطأ في كلتا المجموعتين مقارنة بالمجموعة LC والمجموعة HC. كان لدى كل من Group LC و Group LI معدلات نجاح أفضل في إزالة الرجفان. ولكن بشكل عام ، حققت Group LC أعلى معدل نجاح للنموذج ، في حين كان لدى Group LI معدل نجاح نموذج أقل. يتم عرض معدل ضربات القلب أو HR ، وتدفق الشريان التاجي أو CF ، وفرق ضغط البطين الأيسر أو معدلات استرداد LVPD هنا.
ظلت ديناميكا الدم في المجموعة C مستقرة أثناء التجربة وأظهرت انخفاضا طفيفا في HR و CF و LVPD. كان للمجموعتين ذات الجهد المنخفض الناجم عن VF أداء مماثل ومعدل استرداد جيد. لم يكن معدل HR و LVPD مختلفين بشكل كبير في تلك المجموعات مقارنة بالمجموعة C.لكن معدل استرداد CF كان أفضل بكثير مما كان عليه في المجموعة C.In النقيض ، كان معدل استرداد الدورة الدموية للمجموعتين ذوات الجهد العالي الناجم عن VF طويل الأجل ضعيفا وأظهرت مجموعة VF طويلة الأجل ذات الجهد العالي المحفز باستمرار أسوأ معدل استرداد.
أظهر تحليل سوائل الانصباب التاجي أن مستويات CK-MB كانت أعلى في كلتا مجموعتي الجهد العالي. لم يتم العثور على فروق بين مجموعتي الجهد المنخفض وأظهر تلطيخ المجموعة C.Hematoxylin و eosin منطقة حرق القطب في المجموعة HC. هذا البروتوكول مناسب للدراسة المتعلقة بتوقف الرجفان البطيني والتروية في جراحة القلب والأوعية الدموية.
