Dieses Protokoll liefert einen detaillierten Bedarf an der Entwicklung eines Langzeitmodells für ventrikuläres Vorhofflimmern unter Verwendung des Langendorff-Apparats. Es füllt die Lücke des Langzeit-Kammerflimmerns im Kleintiermodell. Die Technik ist einfach, wirtschaftlich, wiederholbar und stabil.
Diese Technik kann bei der Untersuchung des Kammerflimmerstillstands unter Perfusion eingesetzt werden, die in bestimmten klinischen Situationen im Bereich der herzchirurgischen Sitzungen und Operationen durchgeführt wird. Bereiten Sie zunächst den Krebs-Henseleit- oder KH-Puffer vor, indem Sie 118 millimolare Natriumchloride, 4,7 millimolare Kaliumchloride, 1,2 millimolare Magnesiumchloride, 1,2 millimolare Natriumdihydrogenphosphate, 1,8 millimolare Calciumchloride, 25 millimolare Natriumbicarbonat, 11,1 millimolare Glukose und 0,5 millimolare EDTA in destilliertem Wasser hinzufügen. Anschließend wird das modifizierte Langendorff-Perfusionssystem vorbereitet.
Begasen Sie den Kolben mit KH-Puffer kontinuierlich mit 95 % Sauerstoff und 5 % Kohlendioxid bei einem Druck von etwa 80 Millimetern Quecksilber. Legen Sie ein Ende des Perfusionsschlauchs in den KH-Puffer, führen Sie die Mitte des Perfusionsschlauchs durch das Wasserbad und befestigen Sie eine stumpfe 20-Gauge-Nadel am anderen Ende des Perfusionsschlauchs. Nachdem Sie die Nadel an einem Drahtständer aufgehängt haben, stellen Sie die Temperatur des Wasserbades so ein, dass die Temperatur des KH-Puffers vom Ende des Perfusionssystems 37 Grad Celsius beträgt.
Verwenden Sie einen physiologischen Signalrekorder, um alle analogen Signale zu digitalisieren und aufzuzeichnen. Verwenden Sie zwei Nadelelektroden aus Edelstahl, um ein bipolares Elektrokardiogramm oder EKG aufzuzeichnen, und zwei Nadelelektroden aus Edelstahl zur elektrischen Stimulation. Schließen Sie ein Ende der vier Elektroden an den physiologischen Signalschreiber an und das andere Ende in der Nähe des Bereichs, in dem das Herz nach dem Anbringen an das Gerät positioniert wird.
Verwenden Sie als Nächstes die Laptop-Software, um bipolare EKG- und hämodynamische Parameter automatisch zu erkennen, anzupassen und aufzuzeichnen. Stellen Sie die Parameter des elektrischen Stimulators auf 30 Hertz Wechselstrom ein, wobei die Niederspannungsgruppe 2 Volt und die Hochspannungsgruppe 6 Volt empfängt. Wenn die anästhesierte Ratte nach zervikaler Dissektion und trachealer Intubation an ein Beatmungsgerät angeschlossen ist, heben Sie die Haut mit einer Zahnzange vom Xipoidfortsatz ab und machen Sie mit einer Gewebeschere einen drei Zentimeter langen Querschnitt in die Haut.
Verlängern Sie die Haut- und Rippenschnitte auf beiden Seiten V-förmig bis zu den Achselhöhlen. Verwenden Sie eine stumpfe Dissektion, um den Truncus brachiocephalicus vom umgebenden Gewebe zu trennen. Klemmen Sie dann den Truncus brachiocephalicus mit einer gebogenen Pinzette ein, um die Entfernung des Herzens zu erleichtern.
Tauchen Sie das Herz sofort in eine Petrischale mit KH-Puffer bei 0 bis 4 Grad Celsius, um das restliche Blut zu waschen und abzupumpen. Übertragen Sie das Herz in eine zweite Petrischale. Schneiden Sie das überflüssige Gewebe ab und identifizieren Sie die Aorta.
Heben Sie die Aorta mit zwei Augenzangen an und führen Sie die Aorta in die stumpfe Nadel des Langendorff-Apparates ein. Binden Sie dann mit Hilfe eines Assistenten einen Knoten mit einem 0-Faden. Schalten Sie den Perfusionsflussregler ein.
Schieben Sie den Ballon durch die Mitralklappe in die linke Herzkammer. Füllen Sie den Ballon mit destilliertem Wasser, um einen diastolischen Enddruck von 5 bis 10 Millimetern Quecksilbersäule zu erreichen. Schließen Sie das EKG und die Elektrostimulationselektroden an das Herz an.
Platzieren Sie das Herz in der Mitte der ummantelten Glaskammer, die bei 37 Grad Celsius gehalten wird. Lassen Sie das Herz 20 Minuten lang in der Kammer ausgleichen. Stellen Sie dann die Wasserbadtemperatur ein, um die Temperatur in der ummantelten Glaskammer bei 30 Grad Celsius zu halten.
Nachdem die Temperatur das gewünschte Niveau erreicht hat, aktivieren Sie den Elektrostimulationsschalter in der Laptop-Software. Wenn das Tier zur Gruppe der kontinuierlich stimulierten Langzeit-Kammerflimmern oder VF gehört, lassen Sie 90 Minuten elektrische Stimulation zu. Verwenden Sie nach 90 Minuten VF Elektroden, um eine Gleichstrom-Defibrillation von 0,1 Joule zu erhalten.
Regulieren Sie gleichzeitig die Wasserbadtemperatur, damit die Temperatur in der ummantelten Glaskammer 10 Minuten lang langsam auf 37 Grad Celsius ansteigt. Lassen Sie das Herz nach der Defibrillation 60 Minuten lang schlagen und stoppen Sie dann das Schlagen durch langsame Perfusion mit 10%Kaliumchlorid bei ca. 37 Grad Celsius. Entfernen Sie das Herz für die Kreatinkinase oder den CK-MB-Assay und die histologische Analyse.
Hier werden die VF-Raten, die Erfolgsrate der Defibrillation und die Erfolgsrate des VF-Modells angezeigt. Gruppe LC und Gruppe HC erhielten eine kontinuierliche elektrische Stimulation und somit trat VF mit einer Erfolgsrate von 100% auf. Die Gruppe HC zeigte jedoch geringere Erfolgsraten bei der Defibrillation.
Gruppe LI und Gruppe HI, in denen die elektrische Stimulation nach fünf Minuten ausgeschaltet wurde, wiesen unterschiedliche VF-Raten auf, aber die VF-Rate war in beiden Gruppen langsamer als in Gruppe LC und Gruppe HC. Sowohl die Gruppe LC als auch die Gruppe LI hatten bessere Erfolgsraten bei der Defibrillation. Insgesamt hatte die Gruppe LC jedoch die höchste Erfolgsquote des Modells, während die Gruppe LI eine niedrigere Erfolgsquote des Modells aufwies. Hier werden die Herzfrequenz oder Herzfrequenz, der koronare Fluss oder die Mukoviszidose, die linksventrikuläre Druckdifferenz oder die LVPD-Erholungsraten angezeigt.
Die Hämodynamik der Gruppe C blieb während des Experiments stabil und zeigte eine leichte Abnahme von HR, CF und LVPD. Die beiden Gruppen mit Niederspannungs-induzierter VF wiesen eine ähnliche Leistung und eine gute Wiederfindungsrate auf. Die HR und LVPD unterschieden sich in diesen Gruppen nicht signifikant im Vergleich zu Gruppe C, aber die Genesungsrate der Mukoviszidose war signifikant besser als in der Gruppe C.In Im Gegensatz dazu war die hämodynamische Erholungsrate der beiden Gruppen mit Hochspannungs-induzierter bis langfristiger VF schlecht und die hochspannungs-kontinuierlich stimulierte Langzeit-VF-Gruppe zeigte die schlechteste Erholungsrate.
Die Analyse der koronaren Ergussflüssigkeiten zeigte, dass die CK-MB-Spiegel in beiden Hochspannungsgruppen höher waren. Es wurden keine Unterschiede zwischen den beiden Niederspannungsgruppen und der Gruppe C gefunden.Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung zeigte eine Elektrodenverbrennungsregion in der Gruppe HC. Dieses Protokoll eignet sich für Studien im Zusammenhang mit dem Stillstand von Kammerflimmern und der Perfusion in der kardiovaskulären Chirurgie.
