このプロトコルは、ランゲンドルフ装置を用いて長期心室細動ラットモデルを開発するための詳細な必要性を提供する。小動物モデルにおける長期心室細動のギャップを埋めます。技術はシンプルで、経済的で、再現性があり、安定しています。
この技術は、心臓手術セッションおよび手術の分野で特定の臨床状況で行われる灌流下での心室細動停止の研究に使用することができる。まず、蒸留水に118ミリモルの塩化ナトリウム、4.7ミリモルの塩化カリウム、1.2ミリモルの塩化マグネシウム、1.2ミリモルのリン酸二水素ナトリウム、1.8ミリモルの塩化カルシウム、25ミリモルの重炭酸ナトリウム、11.1ミリモルのグルコース、および0.5ミリモルのEDTAを加えて、クレブスヘンゼライトまたはKHバッファーを調製します。次に、修正されたランゲンドルフ灌流システムを準備します。
KH緩衝液を入れたフラスコを95%酸素、5%二酸化炭素で約80ミリメートルの水銀柱の圧力で連続的にガス化する。灌流チューブの一方の端をKHバッファーに入れ、灌流チューブの中央を水浴に通し、灌流チューブのもう一方の端に鈍い20ゲージの針を取り付けます。針をワイヤースタンドに吊り下げた後、灌流系の端部からのKH緩衝液の温度が摂氏37度になるように水浴の温度を調整する。
生理学的信号レコーダーを使用して、すべてのアナログ信号をデジタル化して記録します。2つのステンレス鋼針電極を使用して双極心電図またはECGを記録し、2つのステンレス鋼針電極を使用して電気刺激を行います。4つの電極の一方の端を生理学的信号レコーダーに接続し、もう一方の端を装置に取り付けた後に心臓が配置される領域の近くに接続します。
次に、ラップトップソフトウェアを使用して、バイポーラECGおよび血行動態パラメータを自動的に認識、調整、および記録します。電気刺激装置のパラメータを30ヘルツの交流に設定し、低電圧グループは2ボルトを受け取り、高電圧グループは6ボルトを受け取ります。麻酔をかけたラットを子宮頸部郭清と気管挿管後に人工呼吸器に接続し、歯付き鉗子で剣状突起から皮膚を持ち上げ、組織ハサミで皮膚を横切って3センチ切開します。
皮膚と肋骨の切開を両側の腋窩までV字型に伸ばします。鈍的解剖を使用して、腕頭体幹を周囲の組織から分離します。次に、腕頭体幹を湾曲した鉗子で固定して、心臓の除去を容易にします。
すぐに0〜4°CのKHバッファーを入れたペトリ皿に心臓を浸し、残りの血液を洗い流して汲み出します。心臓を2番目のペトリ皿に移します。冗長な組織を切り取り、大動脈を特定します。
2つの眼科用鉗子を使用して大動脈を持ち上げ、大動脈をランゲンドルフ装置の鈍い針に挿入します。次に、アシスタントの助けを借りて、0縫合糸で結び目を結びます。灌流流量調整器をオンにします。
バルーンを僧帽弁を通して左心室に押し込みます。バルーンを蒸留水で満たして、5〜10ミリメートルの水銀柱の拡張期末圧を達成します。ECGと電気刺激電極を心臓に接続します。
摂氏37度に維持されたジャケット付きガラスチャンバーの中央に心臓を置きます。チャンバー内で心臓を20分間平衡化させます。次に、水浴の温度を調整して、ジャケット付きガラスチャンバー内の温度を摂氏30度に維持します。
温度が希望のレベルに達したら、ラップトップソフトウェアの電気刺激スイッチをアクティブにします。動物が継続的に刺激された長期心室細動またはVFグループの一部である場合は、90分間の電気刺激を許可します。.VFの90分後、電極を使用して0.1ジュールの直流除細動を行います。
同時に、水浴の温度を調整して、ジャケット付きガラスチャンバー内の温度を摂氏37度まで10分間ゆっくりと上昇させます。除細動後、心臓を60分間鼓動させてから、摂氏約37度で10%塩化カリウムをゆっくりと灌流して鼓動を停止します。クレアチンキナーゼまたはCK-MBアッセイおよび組織学的分析のために心臓を取り除きます。
VF率、除細動成功率、VFモデルの成功率を示します。LC群とHC群は継続的な電気刺激を受けたため、VFは100%の成功率で発生しました。しかし、グループHCは除細動の成功率が低いことを示しました。
5分後に電気刺激をオフにしたLI群とHI群はVF率が異なっていたが,VF速度はLC群,HC群に比べて両群で遅かった。LC群とLI群は除細動成功率が高かった。しかし、全体として、グループLCはモデル成功率が最も高く、グループLIはモデル成功率が低かった。心拍数またはHR、冠動脈流またはCF、および左心室圧差またはLVPD回復率がここに示されています。
グループCの血行動態は実験中安定しており、HR、CF、およびLVPDのわずかな減少を示しました。低電圧誘導VFを有する2つのグループは、同様の性能および良好な回復率を有した。HRとLVPDはC群と比較して有意差はなかったが、CFの回復率は C.In 群よりも有意に優れており、高電圧で長期VFに誘導された2群の血行動態回復率は悪く、高電圧連続刺激長期VF群は最悪の回復率を示した。
冠動脈滲出液の分析は、CK-MBレベルが両方の高電圧グループでより高いことを示しました。2つの低電圧群とC群の間に差は認められず、ヘマトキシリン染色とエオジン染色はHC群に電極焼け領域を示した。このプロトコルは、心臓血管手術における心室細動停止および灌流に関連する研究に適しています。
