Este protocolo fornece uma necessidade detalhada para o desenvolvimento de um modelo de fibrilação ventricular de longo prazo em ratos usando o aparelho de Langendorff. Ele preenche a lacuna de fibrilação ventricular de longa duração no modelo de pequenos animais. A técnica é simples, econômica, repetível e estável.
Esta técnica pode ser utilizada no estudo da parada de fibrilação ventricular sob perfusão que é realizada em determinadas situações clínicas no campo das sessões e operações de cirurgia cardíaca. Para começar, prepare o tampão Krebs-Henseleit ou KH adicionando 118 milimolares de cloreto de sódio, 4,7 milimolares de cloreto de potássio, 1,2 milimolar de cloreto de magnésio, 1,2 milimolar de dihidrogenofosfato de sódio, 1,8 milimolar de cloreto de cálcio, 25 milimolares de bicarbonato de sódio, 11,1 milimolar de glicose e 0,5 milimolar EDTA em água destilada. Em seguida, prepare o sistema de perfusão Langendorff modificado.
Gaseificar continuamente o balão contendo tampão KH com 95% de oxigénio e 5% de dióxido de carbono a uma pressão de aproximadamente 80 milímetros de mercúrio. Coloque uma extremidade do tubo de perfusão no tampão KH, passe o meio do tubo de perfusão através do banho-maria e prenda uma agulha romba de calibre 20 na outra extremidade do tubo de perfusão. Depois de suspender a agulha em um suporte de arame, ajuste a temperatura do banho-maria de modo que a temperatura do tampão KH da extremidade do sistema de perfusão seja de 37 graus Celsius.
Use um gravador de sinais fisiológicos para digitalizar e gravar todos os sinais analógicos. Use dois eletrodos de agulha de aço inoxidável para registrar um eletrocardiograma ou ECG bipolar e dois eletrodos de agulha de aço inoxidável para estimulação elétrica. Conecte uma extremidade dos quatro eletrodos ao registrador de sinais fisiológicos e a outra extremidade próxima à área onde o coração será posicionado após a fixação ao aparelho.
Em seguida, use o software do laptop para reconhecer, ajustar e registrar automaticamente parâmetros bipolares de ECG e hemodinâmica. Ajuste os parâmetros do estimulador elétrico para corrente alternada de 30 hertz com o grupo de baixa tensão recebendo 2 volts e o grupo de alta tensão recebendo 6 volts. Com o rato anestesiado conectado a um ventilador após dissecção cervical e intubação traqueal, levante a pele do processo xifoide com pinça dentada e faça uma incisão transversal de três centímetros na pele com tesoura de tecido.
Estenda as incisões da pele e das costelas até as axilas de ambos os lados em forma de V. Use dissecção romba para separar o tronco braquiocefálico do tecido circundante. Em seguida, pinça o tronco braquiocefálico com pinça curva para facilitar a remoção do coração.
Mergulhe imediatamente o coração em uma placa de Petri com tampão KH a 0 a 4 graus Celsius para lavar e bombear o sangue residual. Transfira o coração para uma segunda placa de Petri. Cortar o tecido redundante e identificar a aorta.
Use duas pinças oftálmicas para levantar a aorta e inserir a aorta na agulha romba do aparelho de Langendorff. Em seguida, com a ajuda de um assistente, amarre um nó com um fio de sutura 0. Ligue o regulador de fluxo de perfusão.
Empurre o balão através da válvula mitral para o ventrículo esquerdo. Encha o balão com água destilada para atingir uma pressão diastólica final de 5 a 10 milímetros de mercúrio. Conecte o ECG e os eletrodos de estimulação elétrica ao coração.
Coloque o coração no centro da câmara de vidro encamisado mantido a 37 graus Celsius. Deixe o coração se equilibrar por 20 minutos dentro da câmara. Em seguida, ajuste a temperatura do banho-maria para manter a temperatura dentro da câmara de vidro encamisada em 30 graus Celsius.
Depois que a temperatura atingir o nível desejado, ative o interruptor de estimulação elétrica no software do laptop. Se o animal fizer parte do grupo fibrilação ventricular de longa duração ou FV continuamente estimulada, permitir 90 minutos de estimulação elétrica. Após 90 minutos de FV, utilizar eletrodos para dar 0,1 joule de desfibrilação por corrente contínua.
Simultaneamente, regule a temperatura do banho-maria para permitir que a temperatura suba lentamente dentro da câmara de vidro encamisado para 37 graus Celsius por 10 minutos. Após a desfibrilação, deixe o coração bater por 60 minutos e, em seguida, pare o batimento por perfusão lenta com cloreto de potássio a 10% a aproximadamente 37 graus Celsius. Remover o coração para dosagem de creatina quinase ou CK-MB e análise histológica.
As taxas de FV, a taxa de sucesso da desfibrilação e a taxa de sucesso do modelo de FV são mostradas aqui. O Grupo LC e o Grupo HC receberam estimulação elétrica contínua e, assim, a PV ocorreu com 100% de sucesso. Já o grupo HC demonstrou menores taxas de sucesso para a desfibrilação.
O Grupo LI e o Grupo HI, nos quais a estimulação elétrica foi desligada após cinco minutos, apresentaram diferentes taxas de FV, mas a taxa de PV foi mais lenta em ambos os grupos em comparação com o Grupo LC e o Grupo HC. Tanto o Grupo LC quanto o Grupo LI apresentaram melhores taxas de sucesso na desfibrilação. Mas, no geral, o Grupo LC teve a maior taxa de sucesso do modelo, enquanto o Grupo LI teve uma menor taxa de sucesso do modelo. A frequência cardíaca ou FC, o fluxo coronariano ou FC e a diferença de pressão ventricular esquerda ou taxas de recuperação da DPVE são mostrados aqui.
A hemodinâmica do Grupo C manteve-se estável durante o experimento e mostrou discreta diminuição da FC, FC e DLVE. Os dois grupos com PV induzida por baixa voltagem apresentaram desempenho semelhante e boa taxa de recuperação. A FC e a DLVE não foram significativamente diferentes nesses grupos em comparação com o Grupo C. Mas a taxa de recuperação da FC foi significativamente melhor do que no Grupo C.In contraste, a taxa de recuperação hemodinâmica dos dois grupos com alta voltagem induzida à FV de longa duração foi pobre e o grupo de FV de longa duração continuamente estimulada de alta voltagem mostrou a pior taxa de recuperação.
A análise dos fluidos de derrame coronariano mostrou que os níveis de CK-MB foram maiores em ambos os grupos de alta voltagem. Não foram encontradas diferenças entre os dois grupos de baixa voltagem e o Grupo C. A coloração de hematoxilina e eosina mostrou uma região de queimadura do eletrodo no Grupo HC. Este protocolo é adequado para estudo relacionado à parada de fibrilação ventricular e à perfusão em cirurgia cardiovascular.
