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* Diese Autoren haben gleichermaßen beigetragen
Dieses Protokoll beschreibt eine Trächtigkeits- und Fütterungsmanagementtechnik für embryoübertragene und genetisch veränderte Kaninchen, die darauf abzielt, die Sterblichkeit von Neugeborenen bei Kaninchen zu verringern und die Präparationseffizienz von genmanipulierten Kaninchen zu verbessern.
Mit dem Fortschritt der wissenschaftlichen Forschung steigt die Nachfrage nach geneditierten Kaninchenmodellen. Es gibt jedoch nur begrenzte Trächtigkeits- und Fütterungsmanagementsysteme für genmanipulierte Kaninchen, was zu niedrigen Überlebensraten bei genmanipulierten Kaninchen führt, die von vielen unerfahrenen Forschern vorbereitet wurden. Daher ist eine angemessene Anleitung unerlässlich. Dieser Artikel fasst die im Labor des Autors entwickelten Trächtigkeits- und Fütterungspraktiken für gentechnisch veränderte Kaninchen zusammen und skizziert eine Reihe grundlegender Prozesse. Dazu gehören Schwangerschaftsdiagnose, Schwangerschaftsvorsorge, Hebammenwesen, assistiertes Stillen, Entwöhnung und andere Verfahren sowie die Rettung und Pflege von schwachen neugeborenen Kaninchen. Im Vergleich zu den traditionellen natürlichen Geburts- und Pflegemethoden, die in Kaninchenfarmen verwendet werden, erfordert dieser Ansatz ein verfeinertes Management, das zusätzlichen Zeit- und Arbeitsaufwand erfordert, aber die Überlebensrate der Mutterkaninchen erheblich erhöht. Die in diesem Artikel beschriebenen Methoden eignen sich für die meisten Laborzuchtszenarien mit geneditierten oder embryoübertragenen Kaninchen und bieten eine einfache und effektive Referenz für andere Forscher.
Kaninchen sind ein klassisches Tiermodell für die biomedizinische Forschung und werden zunehmend zum bevorzugten translationalen Modell, um die Lücke zwischen Nagetiermodellen und Großtiermodellen zu schließen 1,2. Im Vergleich zu großen Tieren haben Kaninchen eine moderate Körpergröße, einen kleinen Futterplatz, niedrige Fütterungskosten und eine bequeme Blutentnahme, was für die wiederholte Sammlung von Forschungsdaten und chirurgische Eingriffe förderlich ist. Kaninchen zeichnen sich durch eine gute Fortpflanzungsfähigkeit, eine kurze Tragzeit (28-32 Tage für neuseeländische weiße Kaninchen), eine große Anzahl von Geburten und ein schnelles Wachstum aus 3,4. Im Vergleich zu Nagetieren stehen Kaninchen in der Phylogenese dem Menschen näher5. Es ist ein kostengünstiger und praktischer experimenteller Ersatz für Schweine und nichtmenschliche Primaten6. Im Vergleich zu anderen großen und mittelgroßen Tieren (Schweine, Rinder, Schafe, Katzen, Hunde, Affen) sind die Vorbereitungskosten für die Gen-Editierung von Kaninchen gering und der Zyklus kurz. Mit der Entwicklung der Gentherapie 7,8,9, der Stammzelltherapie 10,11,12,13, der Hirnforschung14 und anderer wissenschaftlicher Bereiche 1,15,16,17,18 steigt die Nachfrage nach Nicht-Nagetierarten bei der Genbearbeitung.
Kaninchen galten einst als eines der mittelgroßen Gen-Editing-Tiere, die industrielle Anwendungen realisieren konnten6. Bis heute war es Kaninchen, die Gene editieren, jedoch nicht in der Lage, eine großtechnische Produktion zu erreichen. Einer der Hauptgründe ist, dass die Produktion und Zucht von Kaninchen, die Gene editieren, eine Herausforderung darstellen, und die Schwierigkeit ist viel größer als die von Mäusen oder Ratten, die Gene editieren. Es gibt nicht viele Labore, die Gen-Editing-Kaninchen effizient kultivieren können. Für Anfänger ist es oft schwierig, die Gen-Editierung von Kaninchen erfolgreich vorzubereiten, und sie stoßen oft auf so unangenehme Probleme wie niedrige Trächtigkeitsrate19, Abtreibung20, Dystokie21, Verweigerung der Laktation durch weibliche Kaninchen22 und Tod von Milchkaninchen23. Es gibt jedoch nur wenige systematische Daten oder Literaturleitlinien zur Trächtigkeit und Fütterung von Kaninchen, die Gen-Editing betreiben, oder von Kaninchen, die Embryonen übertragen haben. Die meisten von ihnen basieren auf den Erfahrungen gewöhnlicher Kaninchenfarmen.
Aus diesem Grund fasst dieser Artikel die ausgereiften Erfahrungen mit der Trächtigkeit und dem Stillmanagement von genetisch veränderten Kaninchen aus dem Labor des Autors zusammen und stellt eine Reihe grundlegender Prozesse von embryoübertragenen Kaninchen und genetisch veränderten Kaninchen vor, einschließlich Schwangerschaftsdiagnose, Schwangerschaftsvorsorge, Hebammenwesen, künstlich assistierte Fütterung, Ablaktation sowie die Rettung und Pflege von schwachen Kaninchenbabys. Dieses Verfahren ist speziell für die Zucht von Kaninchen mit Gen-Editierung oder embryotransferierten Kaninchen etabliert. Im Vergleich zur traditionellen natürlichen Geburts- und Pflegemethode von Kaninchenfarmen erfordert das Modell des Trächtigkeits- und Stillmanagements mehr Zeit und Energie, aber es kann die Sterblichkeit von Kaninchenbabys erheblich reduzieren, und der Aufwand lohnt sich.
Alle Versuchsprotokolle wurden von der Ethikkommission für Tierversuche des Guangdong Medical Laboratory Animal Center genehmigt. Die ethische Überprüfungsnummer für die MKRN3-Gen-modifizierte Kaninchenzucht, die an dieser Studie beteiligt ist, beträgt B202210-6. Die Studie orientiert sich an Verfahren, die den ethischen Standards entsprechen, die in der Deklaration von Helsinki von 1975 (überarbeitet 1983) festgelegt sind. Die neuseeländischen Kaninchen, die in dieser Studie verwendet wurden, wurden vom Guangdong Medical Laboratory Animal Center in China bezogen. Der in diesem Artikel beschriebene Trächtigkeits- und Fütterungsprozess von gentechnisch veränderten Kaninchen ist eine Zusammenfassung der täglichen Tierzuchtpraktiken im Labor des Autors. Details zu den Reagenzien und den verwendeten Geräten sind in der Materialtabelle aufgeführt.
1. Diagnose einer Schwangerschaft
2. Schwangerenvorsorge
3. Geburt
HINWEIS: Tag 0 bezieht sich auf kurz nach der Befruchtung und der prokaryotischen Bildung. Kaninchen sind ovulationsstimulierende Tiere, die 10-12 Stunden nach der Paarung einen Eisprung haben. Die einzelligen Embryonen, die am Tag nach der Paarung gewonnen werden, gelten als am 0,5. Tag. Wenn einzellige Embryonen nur 2-3 Stunden in vitro kultiviert und dann auf Leihkaninchen übertragen werden, gilt dies ebenfalls als der 0,5. Tag der Trächtigkeit.
4. Hebammenwesen
5. Betreuung nach der Geburt
6. Ablaktation
In diesem Artikel wird ein Trächtigkeits- und Fütterungsmanagement für embryoübertragene und genetisch veränderte Kaninchen beschrieben. Ende 2022 hat das Labor des Autors die Entwicklung einer Präparationsplattform für genveränderte Kaninchen initiiert. Während dieser Zeit traten mehrere häufige Probleme auf, darunter Abtreibung, nicht termingerechte Geburt, Dystokie, Versäumnis, vor der Entbindung Haare für die Nestvorbereitung zu zupfen, mangelnde Bereitschaft von Kaninche...
Zu den wichtigsten Schritten bei der Schwangerschaft und Stillung von embryoübertragenen und genetisch veränderten Kaninchen gehören die Hebammenarbeit und das frühe assistierte Stillen. Schwierige Geburten sind ein häufiges Problem bei Kaninchen19. Verlängerte Entbindungszeiten führen häufig zu fetaler Ischämie, Hypoxie und Tod25. Die richtige Anwendung von Oxytocin kann die Entbindungszeiten effektiv verkürzen und die fetale Dys...
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Diese Forschung wurde unterstützt von der National Natural Science Foundation of China (Grant No. 82101937), dem Guangdong Medical Science and Technology Research Fund Project, China (Grant No. B2024069) und dem Guangzhou Science and Technology Plan Project, China (Grant No. SL2023A04J02229, Abtretungs-Nr. 2024A04J4923).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Artificial down cotton | Yangzhou Anguang Textile Co., Ltd, China | 5490-Jinyu | |
Cloprostenol Sodium Injection | Shanghai Quanyu Biotechnology (Zhumadian) Animal Pharmaceutical Co., Ltd, China | 163232207 | |
Corncob granules | Guangdong Provincial Medical Laboratory Animal Center, China | YUMIXIN | |
Electronic platform scale | Yongkang Runjin weighing instrument Co., Ltd, China | rj-09 | |
Gentamicin | Shanxi Jinfukang Biological Pharmaceutical Co., Ltd, China | 041531504 | |
Glucose injection | Henan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd, China | H41022251 | |
Incubator | Foshan Chancheng Hualong Plastic Factory, China | AAA-2 | For newborn rabbits |
Incubator box | Hebei mabao wire mesh products Co., Ltd., China | https://qr.1688.com/s/AJ1K7O3p | As a nest for the mother rabbits |
Inslin Syringe | Becton,Dickinson and Company, USA | Ultra-Fine,328421 | |
Oxytocin injection | Guangzhou Baiyunshan Mingxing Pharmaceutical Co., Ltd | H44025245 | |
Penicillin injection | Guangdong Kangtaiyuan Animal Husbandry Co., Ltd, China | 300012430 | |
Rabbit delivery cage | Suzhou Suhang Technology Equipment Co., Ltd., Suzhou, China | RB42-8G | |
Towel | Zhejiang Jieliya Co., Ltd, China | W3290 |
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