Prise en charge de la gestation et de l’allaitement chez les lapines transférées d’embryons et génétiquement modifiées

Résumé

Ce protocole décrit une technique de gestion de la gestation et de l’alimentation des lapins transférés d’embryons et génétiquement modifiés, visant à réduire la mortalité des lapins nouveau-nés et à améliorer l’efficacité de la préparation des lapins génétiquement modifiés.

Résumé

Avec les progrès de la recherche scientifique, la demande de modèles de lapins génétiquement modifiés augmente. Cependant, il existe peu de systèmes de gestion de la gestation et de l’alimentation pour les lapins génétiquement modifiés, ce qui entraîne de faibles taux de survie chez les lapins génétiquement modifiés, préparés par de nombreux chercheurs inexpérimentés. Par conséquent, une bonne orientation est essentielle. Cet article résume les pratiques de gestation et d’alimentation des lapins génétiquement modifiés développées dans le laboratoire de l’auteur et décrit un ensemble de processus fondamentaux. Il s’agit notamment du diagnostic de grossesse, des soins prénatals, des sages-femmes, de l’allaitement maternel assisté, du sevrage et d’autres procédures, ainsi que du sauvetage et des soins de lapins nouveau-nés faibles. Par rapport aux méthodes traditionnelles d’accouchement et d’allaitement naturelles utilisées dans les élevages de lapins, cette approche implique une gestion plus raffinée, nécessitant plus de temps et d’efforts, mais augmentant considérablement le taux de survie des lapins allaitants. Les méthodes décrites dans cet article conviennent à la plupart des scénarios d’élevage en laboratoire impliquant des lapins génétiquement modifiés ou transférés d’embryons et constituent une référence simple et efficace pour d’autres chercheurs.

Introduction

Les lapins sont un modèle animal classique pour la recherche biomédicale et deviennent de plus en plus le modèle translationnel préféré pour combler le fossé entre les modèles de rongeurs et les modèles de grands animaux ^1,2. Par rapport aux grands animaux, les lapins ont une taille corporelle modérée, un petit espace d’alimentation, un faible coût d’alimentation et une collecte de sang pratique, ce qui est propice à la collecte répétée de données de recherche et d’opérations chirurgicales. Les lapins se caractérisent par une bonne capacité de reproduction, une courte période de gestation (28-32 jours pour les lapins blancs de Nouvelle-Zélande), un grand nombre de naissances et une croissance rapide ^3,4. Par rapport aux rongeurs, les lapins sont plus proches des humains dans la phylogenèse⁵. Il s’agit d’un substitut expérimental rentable et pratique pour les porcs et les primates non humains⁶. Comparé à d’autres animaux de grande et moyenne taille (porcs, bovins, moutons, chats, chiens, singes), le coût de préparation des lapins d’édition de gènes est faible et le cycle est court. Avec le développement de la thérapie génique ^7,8,9, de la thérapie par cellules souches 10,11,12,13, de la recherche en sciences du cerveau ¹⁴ et d’autres domaines scientifiques 1,15,16,17,18, la demande d’espèces non rongeurs dans l’édition de gènes augmente.

Les lapins d’édition de gènes étaient autrefois considérés comme l’un des animaux d’édition de gènes de taille moyenne qui pouvaient réaliser des applications industrielles⁶. Cependant, jusqu’à aujourd’hui, les lapins éditeurs de gènes n’ont pas été en mesure d’obtenir une production à grande échelle. L’une des principales raisons est que la production et l’élevage de lapins génétiquement modifiés sont difficiles, et la difficulté est beaucoup plus grande que celle des souris ou des rats génétiquement modifiés. Il n’y a pas beaucoup de laboratoires qui peuvent élever efficacement des lapins d’édition de gènes. Il est souvent difficile pour les débutants de préparer avec succès des lapins d’édition de gènes, et ils rencontrent souvent des problèmes désagréables tels qu’un faible taux de gestation¹⁹, l’avortement²⁰, la dystocie²¹, le refus de la lactation par les lapines²² et la mort des lapines^{de lait 23}. Cependant, il existe peu de données systématiques ou de directives bibliographiques sur la grossesse et l’alimentation des lapins génétiquement modifiés ou des lapins transférés d’embryons. La plupart d’entre eux sont basés sur l’expérience des élevages de lapins ordinaires.

Par conséquent, cet article résume l’expérience mature de la gestion de la grossesse et de l’allaitement des lapins génétiquement modifiés du laboratoire de l’auteur, et présente un ensemble de processus de base des lapins transférés d’embryons et des lapins génétiquement modifiés, y compris le diagnostic de grossesse, les soins prénatals, les sages-femmes, l’alimentation assistée artificielle, l’ablactation, ainsi que le sauvetage et l’allaitement des bébés lapins faibles. Ce processus est spécialement établi pour l’élevage de lapins génétiquement modifiés ou de lapins transférés d’embryons. Par rapport à la méthode traditionnelle d’accouchement et d’allaitement naturels des élevages de lapins, le modèle de gestion de la grossesse et de l’allaitement prend plus de temps et d’énergie, mais il peut réduire considérablement la mortalité des bébés lapins, et l’effort en vaut la peine.

Protocole

Tous les protocoles expérimentaux ont été approuvés par le Comité d’éthique des expériences animales du Guangdong Medical Laboratory Animal Center. Le numéro d’examen éthique de l’élevage de lapins génétiquement modifiés MKRN3 impliqué dans cette étude est B202210-6. L’étude respecte des procédures conformes aux normes éthiques énoncées dans la Déclaration d’Helsinki de 1975 (révisée en 1983). Les lapins néo-zélandais utilisés dans cette étude ont été obtenus du Guangdong Medical Laboratory Animal Center en Chine. La gestation et le processus d’alimentation des lapins génétiquement modifiés décrits dans cet article sont un résumé des pratiques quotidiennes d’élevage des animaux dans le laboratoire de l’auteur. Les détails sur les réactifs et l’équipement utilisé sont répertoriés dans la table des matériaux.

1. Diagnostic de grossesse

1. Du 12^au 14^e jour après le transfert d’embryons (choisissez l’un des points temporels), confirmez la grossesse par palpation directe.
   REMARQUE : Cette étape peut être ignorée. Si la palpation est trop brutale et trop forte, elle peut entraîner une fausse couche chez les lapines enceintes.
   1. Tenez la peau du cou derrière les oreilles du lapin d’une main, laissez les fesses du lapin se rétrécir vers l’avant, près de la cavité abdominale des fesses du lapin, puis utilisez l’autre main pour ouvrir la paume et palper doucement l’extrémité arrière de l’abdomen.
   2. Appuyez sur l’abdomen dans une certaine mesure. Si une chaîne continue de boules de chair lisses et élastiques, de taille similaire à celle des fèves, est palpée, on considère qu’il s’agit d’une grossesse²⁴.
2. Si les conditions le permettent, utilisez une échographie le 15^e jour après le transfert d’embryon pour déterminer si la lapine est enceinte. Le diagnostic de gestation chez la lapine repose sur la présence de petits points échogènes forts (sacs gestationnels) dans la zone sombre liquide.
3. Pendant la période du 16^au 18^e jours après le transfert d’embryons, observez le lapin deux fois par jour, le matin et le soir, pendant environ 15 minutes à chaque fois. Si l’on observe que la lapine présente des comportements tels que l’agitation, la respiration rapide, l’épilation des poils pour construire des nids, etc., pendant le travail ou l’œstrus, cela indique que la lapine est pseudo-enceinte et n’a pas vraiment conçu.
   REMARQUE : Si le transfert d’embryon échoue, les lapines auront une pseudo-grossesse similaire à la parturiente ou à l’œstrus les 16^et 18^e jours en raison de la diminution de l’hormone lutéale.

2. Soins prénatals

1. Laissez les lapines enceintes manger librement pendant la gestation et ajoutez des aliments verts frais une fois par semaine.
2. Le matin ou le soir du 25^e jour après le transfert d’embryons, transférez les lapines gestantes dans la cage d’accouchement.
   1. Désinfectez à l’avance la cage de livraison, l’incubateur d’animaux, les bouts de papier ou les copeaux.
      REMARQUE : Choisissez une cage de livraison pour lapin qui répond aux critères internationaux en termes de taille. Assurez-vous que la cage de mise bas dispose d’un espace suffisant pour que la lapine puisse se déplacer. Choisissez un incubateur qui peut résister au grignotage de la mère lapine. Choisissez des chutes de papier épais avec une bonne absorption d’eau. Selon les exigences et les suggestions de la direction locale des installations pour animaux, choisissez les méthodes de désinfection appropriées.
   2. Fixez l’incubateur d’un côté de la cage d’accouchement et mettez des serviettes, des copeaux ou des bouts de papier dans l’incubateur pour animaux afin que les lapines enceintes fassent un nid.
   3. Fournir suffisamment de nourriture et d’eau potable.
   4. Déplacez doucement les lapines gestantes vers la cage d’accouchement.
   5. Faites attention à ce que les lapines enceintes aient fait un nid dans l’incubateur tous les jours. Sinon, ajoutez des bouts de papier et des serviettes à l’extérieur de l’incubateur le matin du 28^e jour de grossesse.
      REMARQUE : Si les lapines gestantes ne nichent pas dans l’incubateur, elles ne donneront probablement pas naissance dans l’incubateur. Mettez des serviettes et des bouts de papier à l’extérieur de l’incubateur pour éviter que les lapins nouveau-nés ne perdent de la température et ne meurent à l’extérieur de la boîte.

3. Parturition

REMARQUE : Le jour 0 fait référence peu de temps après la fécondation et la formation procaryote. Les lapins sont des animaux stimulant l’ovulation qui ovulent 10 à 12 heures après l’accouplement. Les embryons au stade monocellulaire obtenus le lendemain de l’accouplement sont considérés comme étant au 0,5^e jour. Si des embryons au stade unicellulaire sont cultivés in vitro pendant seulement 2 à 3 heures, puis transférés à des lapins de substitution, on considère également qu’il s’agit du 0,5^e jour de gestation.

1. Suivi prénatal
   REMARQUE : La période de gestation des lapins est de 28 à 32 jours. Si une lapine accouche avant le 30e^{jour de} grossesse, la taille du fœtus est généralement relativement petite et il existe de rares cas de travail difficile. Aucune intervention excessive n’est nécessaire avant le 30^e jour.
   1. Le matin du 30^e jour de gestation chez les lapins, effectuez une palpation abdominale pour déterminer approximativement le nombre, la taille et l’activité du fœtus.
      1. Tenez la peau du cou derrière les oreilles du lapin d’une main, laissez les fesses du lapin se rétrécir vers l’avant, près de la cavité abdominale des fesses du lapin, puis utilisez l’autre main pour ouvrir la paume et palper doucement l’extrémité arrière de l’abdomen. La force doit être légère.
         REMARQUE : En appuyant dans l’abdomen dans une certaine mesure, vous palperez plusieurs ellipsoïdes de la taille d’un œuf, qui peuvent sentir le mouvement du fœtus.
   2. S’il s’avère que le nombre de fœtus conçus par des lapines gestantes n’est que de 1 à 2, le 30^e jour de gestation, injectez 0,02 mg de cloprosténol par voie intramusculaire à 17 heures pour induire l’accouchement des lapines le lendemain.
      REMARQUE : Les lapines gestantes n’ont que 1 à 2 fœtus, qui sont sujets à la dystocie ou à l’échec de l’accouchement à maturité.
2. Accélérer la parturition
   REMARQUE : Si la lapine enceinte n’accouche pas le matin du 31^ème jour de gestation, elle peut envisager s’il doit accélérer la parturition selon les conditions suivantes. S’il y a plus de 2 fœtus, aucune autre mesure ne sera prise.
   1. Si la lapine enceinte n’est enceinte que de 1 à 2 fœtus et qu’on lui a injecté du cloprosténol la veille, le matin du 31^e jour de grossesse, injectez 10 unités d’ocytocine dans les muscles pour induire le travail.
   2. Si la lapine enceinte présente des signes d’accouchement (tels que de l’agitation, une respiration rapide, une dilatation vasculaire de l’oreille, la plumage et la fabrication d’un nid, la planification du sol, etc.), injectez 10 unités d’ocytocine dans les muscles pour induire le travail.
   3. Si la lapine enceinte ne présente aucun signe d’accouchement et que les mouvements du fœtus sont normaux, continuez à observer. S’il n’y a pas d’accouchement le matin du 32e^{jour de} grossesse, injectez 10 unités d’ocytocine dans les muscles pour induire le travail.
      REMARQUE : Habituellement, l’utilisation de l’ocytocine peut résoudre le travail difficile. Généralement, 5 à 10 minutes après l’injection d’ocytocine, les lapines enceintes commenceront l’accouchement. L’ocytocine est efficace pendant environ une demi-heure et peut être administrée à nouveau après une demi-heure. Il n’est pas recommandé de provoquer le travail avec de l’ocytocine plus de 3 fois. Si l’ocytocine est inefficace, demandez à un vétérinaire de pratiquer une césarienne. Sinon, le fœtus mourra dans l’utérus, se ramollira et sera évacué du vagin.

4. Sage-femme

1. Disposez et préparez les incubateurs (figure 1).
   REMARQUE : Préparez-vous à l’avance avant que le lapin ne mette bas. La taille de l’incubateur utilisé dans cette étude est de 45 cm × 30 cm × 15 cm de longueur × de largeur × de hauteur.
   1. Ajouter un rembourrage absorbant stérile. Les granulés d’épis de maïs sont recommandés.
   2. Étalez une serviette comme un tapis recouvert de duvet artificiel de coton.
      REMARQUE : Le matériau du coton artificiel est une fibre de polyester de qualité bébé, qui n’est pas toxique. Le duvet de coton artificiel convient très bien aux lapins nouveau-nés qui se gardent au chaud. Cependant, il ne peut pas être utilisé pour faire un nid pour la mère lapine, ou il peut être mangé dans l’estomac.
2. Essuyez rapidement le mucus sur les lapins nouveau-nés avec une serviette. Assurez-vous qu’ils respirent doucement, puis mettez-les dans l’incubateur.
   REMARQUE : Si la respiration des lapins nouveau-nés s’arrête, appuyez immédiatement sur la poitrine pour une respiration auxiliaire (25-35 fois/min) pour réduire le diamètre de la poitrine de 25 % à 30 % jusqu’à ce que la respiration spontanée soit rétablie.
3. Après l’accouchement de lapines gestantes, comptez le nombre de fœtus nés. Collez des fiches d’information sur l’incubateur : gènes modifiés, nombre de lapins nouveau-nés, date de naissance, etc.
   REMARQUE : La température ambiante appropriée pour les lapins nouveau-nés est de 30-32 °C. Placer une quantité appropriée de poils de lapin ou de coton artificiel à l’intérieur de l’incubateur peut obtenir un bon effet isolant. Le poulailler doit être maintenu à une température de 16 à 25 °C. Les lapines ont généralement 6 à 8 mamelons. S’il y a trop de bébés, certains bébés peuvent être nourris par d’autres lapines.

5. Soins post-partum

1. Soins aux bébés lapins (Figure 2)
   REMARQUE : Après l’accouchement, laissez la lapine se reposer pendant environ 1 heure avant d’allaiter. Les lapins allaitent généralement 1 à 3 fois par jour.
   1. Nettoyez toutes les tétines de la lapine avec du coton imbibé d’alcool avant la première tétée. À l’exception de l’allaitement, gardez les lapines mères et les bébés lapins séparément à d’autres moments.
   2. Massez doucement chaque mamelon et pressez doucement la première goutte de lait.
   3. Alimentation des lapines de 1 à 2 jours : À chaque fois, placez la lapine mère sur le tapis en position latérale ou couchée et placez les lapins qui tètent un par un sur leurs mamelons pour téter le lait (Figure 2A). Les lapins de 1 à 2 jours doivent être nourris 2 à 3 fois par jour.
      REMARQUE : Les lapins prématurés ou les bébés lapins de faible poids à la naissance sont sujets à l’hypoglycémie. Donnez 1 mL de glucose à 5 % et consommez du lait maternel dès que possible. Si le bébé lapin est trop faible pour boire, injectez directement 1 ml de glucose à 5 % dans la cavité abdominale.
   4. Le deuxième jour après la naissance, utilisez un marqueur pour numéroter le dos de chaque bébé lapin. Coupez une petite quantité de tissu de la queue pour le génotypage.
   5. Alimentation des bébés lapins de plus de 2 jours : Lors de l’alimentation, placez la lapine dans un incubateur et laissez-la téter toute seule (Figure 2B). Les lapins de 2 à 9 jours doivent être nourris 1 à 2 fois par jour, et les lapins de plus de 9 jours doivent être nourris une fois par jour jusqu’au sevrage. Assurez-vous que les bébés lapins sont rassasiés (Figure 2C).
      REMARQUE : Si la lapine ne veut pas allaiter, elle peut être nourrie avec des légumes frais pour la rendre plus disposée à coopérer. Si nécessaire, les lapines mères peuvent être allaitées après avoir été placées dans une position stable. Pressez doucement la première goutte de lait de chaque mamelon de la lapine pour soulager l’enflure et la douleur du sein, ce qui est bénéfique pour les bébés lapins pour téter le lait. Si les méthodes ci-dessus sont inefficaces, d’autres lapines allaitantes doivent être utilisées pour l’allaitement.
   6. Pendant les 4 premiers jours après la naissance, nettoyez le périnée du bébé lapin deux fois par jour avec des boules de coton humides pour stimuler l’excrétion de méconium et d’urine (Figure 2D).
   7. Au fur et à mesure que les poils du bébé lapin poussent, retirez un peu de coton de l’incubateur tous les jours.
   8. Changez la serviette une fois par jour jusqu’à ce que le bébé lapin grandisse au point que tout son corps soit recouvert de poils.
      REMARQUE : Généralement, la serviette n’est plus nécessaire le 8^ème jour après la naissance.
   9. Si les bébés lapins (âgés de 1 à 2 semaines) ont la diarrhée, donnez-leur immédiatement 3 gouttes de gentamicine d’origine animale (concentration de 0,04 g/ml) deux fois par jour pendant 5 jours consécutifs.
      REMARQUE : La diarrhée chez les bébés lapins est généralement causée par la succion du lait des lapines atteintes de mammite, ou par la température et l’humidité élevées de l’environnement. Le taux de mortalité des bébés lapins atteints de diarrhée est très élevé.
   10. Une fois que le jeune lapin a ouvert les yeux (environ 2 semaines), déplacez-le dans une cage d’allaitement avec une serviette. Ajoutez des aliments verts et un régime quotidien.
       REMARQUE : La température appropriée pour les bébés lapins (2-3 semaines) est de 23-30 °C.
   11. Séparez la lapine mère des bébés lapins et n’ouvrez le déflecteur qu’une fois par jour pour l’allaitement.
       REMARQUE : Cela peut empêcher les bébés lapins de mordre le mamelon de la lapine.
2. Soins post-partum de la lapine
   1. Pendant la lactation, laissez les lapines boire et manger librement et nourrissez-les avec des aliments verts appropriés pour assurer une nutrition adéquate.
   2. Si la lapine souffre de mammite, arrêtez immédiatement l’allaitement et administrez des antibiotiques vétérinaires appropriés pour le traitement (des céphalosporines sont recommandées). Donnez les jeunes lapines à d’autres lapines allaitantes avec des heures de livraison similaires.

6. L’ablactation

1. Assurez-vous que la plupart des jeunes lapins sont sevrés à l’âge de 35 jours. Les lapins faibles sont sevrés à l’âge de 40 jours.
   REMARQUE : La température appropriée pour les jeunes lapins (3 semaines à 3 mois) est de 20-25 °C. La température appropriée pour les jeunes lapins (3-6 mois) et les lapins adultes est également de 15-25 °C.
2. Envisager de vacciner les vaccins conventionnels en fonction des exigences expérimentales après le sevrage.

Résultats

Cet article décrit une procédure de gestion de la grossesse et de l’alimentation pour les lapins génétiquement modifiés et transférés d’embryons. Fin 2022, le laboratoire de l’auteur a initié le développement d’une plateforme de préparation pour les lapins génétiquement modifiés. Au cours de cette période, plusieurs problèmes courants ont été rencontrés, notamment l’avortement, l’échec de l’accouchement à terme, la dystocie, l’incapacité à épiler le...

Discussion

Les principales étapes de la gestion de la grossesse et de l’allaitement des lapines transférées d’embryons et génétiquement modifiées comprennent la sage-femme et l’allaitement maternel précoce assisté. L’accouchement difficile est un problème courant chez les lapins¹⁹. Les délais d’accouchement prolongés entraînent souvent une ischémie fœtale, une hypoxie et la mort²⁵. L’utilisation appropriée de l’ocytocine p...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Artificial down cotton	Yangzhou Anguang Textile Co., Ltd, China	5490-Jinyu
Cloprostenol Sodium Injection	Shanghai Quanyu Biotechnology (Zhumadian) Animal Pharmaceutical Co., Ltd, China	163232207
Corncob granules	Guangdong Provincial Medical Laboratory Animal Center, China	YUMIXIN
Electronic platform scale	Yongkang Runjin weighing instrument Co., Ltd, China	rj-09
Gentamicin	Shanxi Jinfukang Biological Pharmaceutical Co., Ltd, China	041531504
Glucose injection	Henan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd, China	H41022251
Incubator	Foshan Chancheng Hualong Plastic Factory, China	AAA-2	For newborn rabbits
Incubator box	Hebei mabao wire mesh products Co., Ltd., China	https://qr.1688.com/s/AJ1K7O3p	As a nest for the mother rabbits
Inslin Syringe	Becton,Dickinson and Company, USA	Ultra-Fine,328421
Oxytocin injection	Guangzhou Baiyunshan Mingxing Pharmaceutical Co., Ltd	H44025245
Penicillin injection	Guangdong Kangtaiyuan Animal Husbandry Co., Ltd, China	300012430
Rabbit delivery cage	Suzhou Suhang Technology Equipment Co., Ltd., Suzhou, China	RB42-8G
Towel	Zhejiang Jieliya Co., Ltd, China	W3290