1. machen die Standards: Verdünnungsreihen

1. Machen Sie eine konzentrierte Stammlösung der Norm. Das Mittel ist in der Regel genau abgewogen, und dann quantitativ in einem volumetrischen Kolben übertragen. Fügen Sie einige Lösungsmittel hinzu, mischen Sie, so dass die Probe auflöst, dann füllen Sie in die Zeile mit dem entsprechenden Lösungsmittel.
2. Durchführen Sie Verdünnungsreihen. Nehmen eine andere volumetrischen Kolben und pipette die Höhe der Standard für die Verdünnung benötigt dann füllen Sie in die Zeile mit Lösungsmittel und mischen. Eine zehnfache Verdünnung ist in der Regel gemacht, also für eine volumetrische 10 mL-Flasche, 1 mL der vorherigen Verdünnung zugeben.
3. Weiterhin Bedarf für weitere Verdünnungen, Pipettieren von der vorherigen Lösung um es zu machen, die nächste Probe verdünnen. Für eine gute Kalibrationskurve werden mindestens 5 Konzentrationen benötigt.

2. führen Sie die Proben für die Eichkurve und das unbekannte

1. Laufen Sie die Proben mit der UV-Vis Spektralphotometer, die instrumentelle Reaktion benötigt für die Eichkurve zu bestimmen.
2. Den Meßwert mit der ersten Probe. Es ist eine gute Idee, die Proben in zufälliger Reihenfolge (d. h. nicht höchsten bis zur niedrigsten zum höchsten oder niedrigsten) laufen, für den Fall, dass systematische Fehler vorliegen. Um eine Schätzung des Rauschens zu erhalten, wiederholen Sie der Lesung zu jeder Probe 3 – 5 X.
3. Die zusätzliche standard Proben, Wiederholung der Messungen für jede Probe eine Schätzung der Lärm zu laufen. Notieren Sie die Daten später zu einem Grundstück.
4. Führen Sie die unbekannten Proben. Verwenden Sie als ähnliche Bedingungen zu den Standards wie möglich laufen. So, die Probenmatrix oder Puffer sollte identisch sein, der pH-Wert sollte identisch sein und die Konzentration sollte im Bereich der Normen ausgeführt werden.

3. machen die Kalibrierkurve

1. Erfassen Sie die Daten in eine Tabelle und verwenden Sie ein Computerprogramm, um die Daten gegen Konzentration zeichnen. Wenn mindestens dreifacher Messungen für jeden Punkt aufgenommen wurden, können Fehlerindikatoren der Standardabweichung dieser Messungen, die Fehler der einzelnen Punkte zu schätzen geplottet werden. Für einige Kurven müssen die Daten mit einer Achse als ein Protokoll zu einer Linie dargestellt werden. Die Gleichung, die die Eichkurve regelt ist im Allgemeinen vor der Zeit, bekannt ein Log-Plot verwendet wird, wenn es gibt ein Protokoll in der Gleichung.
2. Die Eichkurve zu untersuchen. Sieht es linear? Es muss einen Teil, der nicht-linearen sieht (d. h. erreicht die Grenze der instrumentalen Antwort)? Um zu überprüfen, passen alle Daten, um eine lineare Regression mit der Software. Wenn der Bestimmungskoeffizient (R²) nicht hoch ist, entfernen Sie einige der Punkte am Anfang oder Ende der Kurve, die nicht angezeigt werden, passen die Linie und die lineare Regression wieder durchführen. Es geht nicht um Punkte in der Mitte zu entfernen, nur weil sie eine großen Fehler-Bar. Entscheiden Sie aus dieser Analyse, welcher Teil der Kurve linear ist.
3. Die Ausgabe des linearen sollte eine Gleichung für die Format-y = Mx + b, wo m ist die Steigung und b der y-Achsenabschnitt. Die Einheiten für die Neigung sind die y-Achse Einheit/Konzentration, in diesem Beispiel (Abbildung 1) Absorption/μM. Für den y-Achsenabschnitt werden die y-Achse Einheiten. Es ergibt sich ein Bestimmungskoeffizient (R²). Je höher die R² je besser die Passform; eine perfekte Passform verleiht ein R² 1. Das Programm kann auch eine Schätzung des Fehlers auf die Piste und das Abfangen können.

4. Ergebnisse: Kalibrierkurve des Absorption des blauen Farbstoff #1

1. Die Eichkurve für Absorption des blauen Farbstoff #1 (bei 631 nm) wird unten (Abbildung 1) angezeigt. Die Antwort ist linear von 0 bis 10 µM. oben, dass Konzentration das Signal auf Stufe beginnt ab weil die Antwort aus den linearen Bereich der UV-Vis Spektralphotometer ist.
2. Berechnen Sie die LOD. Von der Piste die Eichkurve, die Detailgenauigkeit ist 3*S.D. (Lärm) / m. Für diese Eichkurve der Lärm wurde erreicht, indem man eine Standardabweichung von wiederholten Messungen und 0,021 war. Das LOD wäre 3*0.021/.109=0.58 µM.
3. Berechnung der LOQ. Das LOQ ist 10*S.D. (Lärm) / m. Für diese Eichkurve LOQ ist 10*0.021/.109 = 1,93 µM.
4. Berechnen Sie die Konzentration des unbekannten. Verwenden Sie die Gleichung der Linie um die Konzentration der unbekannten Probe zu berechnen. Die Eichkurve gilt nur, wenn das unbekannte in den linearen Bereich der Standardproben fällt. Wenn die Messwerte zu hoch sind, kann die Verdünnung erforderlich sein. In diesem Beispiel wurde die unbekannte Sportgetränk 1:1 verdünnt. Die Extinktion war 0,243 und dies entspricht einer Konzentration von 2,02 µM. Damit die Endkonzentration von blauer Farbstoff #1 in der in der Sport-Getränk war 4,04 µM.

Abbildung 1: Kalibrierkurven für UV-Vis Absorption des blauen Farbstoff. Links: die Absorption der verschiedenen Konzentrationen von blauen Farbstoff #1 gemessen wurde. Die Antworten einpendeln nach 10 µM bei die Extinktion über 1. Die Fehlerbalken sind durch wiederholte Messungen der gleichen Probe und Standardabweichungen. Recht: Die lineare Teil der Kalibrierkurve ist mit einer Linie fit y = 0.109 * X + 0,0286. Unbekannten Daten werden in schwarz angezeigt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.