Diese Studie wurde von der Seoul National University Research Grant (800-20140542) unterstützt, der Pioneer Research Program der NRF / MEST (2012-0009544) und die Bio-Signalanalyse-Technologie-Innovations-Programm der NRF / MEST (2009-0090895), und die Gewährung von NRF / MEST (2015M3A9E6028949).

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit der Association for Research in Vision and Ophthalmology Erklärung für die Nutzung von Tieren in Ophthalmic und Vision Research durchgeführt und die Richtlinien und Vorschriften von der Seoul National University Institutional Animal Care und Verwenden Committee und Seoul National dargelegt Universitätsklinikum Biosafety Committee. 1. Vorbereiten Injection Kit und Virale Vektoren <ol><li> Bereiten Sie die Mikroliter-Spritze mit einer 33 G stumpfen Nadel sterilisiert mit Ethylenoxid-Gas ausgestattet. Verdünnt den viralen Vektoren in PBS zur adäquaten Titer im Mikroröhre (dh 1 × 10 6 TU / ul). Spülen Sie die Spritze mehrmals mit viralen Vektoren, jede toten Raum in der Spritze zu entfernen. </li></ol> 2. Subretinale Injektion von viralen Vektoren <ol><li> Betäuben den erwachsenen Mäusen (dh, 6-8 Wochen alt) mit einer intraperitonealen Injektion der Mischung aus tiletamine und Zolazepam (1: 1, 2,25 mg / kg Körpergewicht) und Xylazin-Hydrochlorid (0,7 mg / kg Körpergewicht) oder eine alternative geeignete Anästhesie Regimes. </li><li> Erweitern sich die Schüler mit einem Auge Tropfen Phenylephrin 0,5% und 0,5% Tropicamid. </li><li> Bereiten Sie den Mikroliterspritze durch das Laden mit 1,5 bis 2 &amp; mgr; l von viralen Vektoren. </li><li> Öffnen Sie das Augenlid und stehen den Blick auf den Äquator zum bequemen Injektion freizulegen und sich auf unter dem Operationsmikroskop. Aufrechterhaltung der vorstehende Augenposition bis Beendigung der Injektion oder Verschiebung der Nadel während der Injektion ein. Um den Augapfel fest zu halten, legen Sie die Finger außerhalb des Augenhöhlenrand. </li><li> Einen Tropfen Augen viskoelastische Lösung, um die Hornhautoberfläche. </li><li> Setzen Sie einen kleinen runden Deckglas auf der Oberseite der Hornhaut, um die Netzhaut zu visualisieren. </li><li> Stechen ein kleines Loch an leichten hinter dem Limbus mit einer sterilen Nadel 30 G 1/2 für die weitere subretinale Injektion. Machen Sie das Loch unterlegen for das rechte Auge und überlegen für das linke Auge für die Bequemlichkeit. HINWEIS: Wenn das Loch an zeitliche oder Nasen gemacht, ist es schwer, durch das Augenlid nach der Injektion bedeckt sein. Punktion sollte etwas hinter dem Limbus, die Limbusgefäßen, die entlang des Limbus ausgeführt und kann leicht erkannt werden, zu vermeiden. Seien Sie vorsichtig, schlagen Sie das Objektiv mit Nadel und gleichzeitig die Punktion zu vermeiden. Nicht die gesamte Kegel der Nadel legen nicht auf Linsenpunktion zu vermeiden. </li><li> Legen Sie die 33 G stumpfen Nadel der Mikroliterspritze durch die Pre-Stichloch und nähern sich die Nadel in den subretinalen Raum bis zu dem Punkt, wenn mild Widerstand zu spüren ist. HINWEIS: Bei den subretinalen Injektion, der beste Ansatz Winkel der Nadel ist etwa 45 Grad gegen Iris Ebene und die stumpfe Nadel sollte nach hinten in Richtung peripapillären Bereich geschoben werden. Gepunktete Quadrat angezeigt die vorgeschlagene Nadel Weg über den Glaskörperraum für den subretinalen injection in 1. HINWEIS: Es wird kein Widerstand fühlte, als Piercing (oder Weitergabe) die Netzhautschichten, wie sie sind sehr weich. Somit wird das erste Gefühl einer leichten Widerstand zeigt an, dass die Nadel die RPE-Schicht bereits berührt wurde und die Einführung der Nadel gestoppt werden sollte. Achten Sie darauf, Skleragewebe mit Überdruck durchdringen, weil die Nadel in das Potenzial subretinalen Raum platziert werden. Wenn die Nadel in die Lederhautgewebe durch übermäßige Macht, tritt sie in den äußeren Augen orbitalen Bereiche ohne Widerstand. (Dieser Schritt ist kritisch) </li></ol><img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/53030/53030fig1.jpg" /> Abbildung 1. Schematische Darstellung der Subretinale Injection. H &amp; E gefärbten Querschnitt der Maus Auge Darstellung der Strukturen mit einer Nadel Weg für den subretinalen Injektion markiert (eine gepunktete Quadrat). Vergrößerung: 40x, Maßstabsbalken:<html> 500 &amp; mgr; m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53030/53030fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <ol start="9"><li> Injizieren Sie den viralen Vektoren (dh 1 x 10 6 TU / ul) vorsichtig in den subretinalen Raum ohne Zittern um unerwünschte Gewebeschäden zu vermeiden und vorsichtig ziehen Sie die Nadel. Halten Sie den Augapfel fest während der Injektion, wie in 2.4 beschrieben. </li><li> Beachten Sie die Bildung von subretinalen Bläschen nach Injektion unter Operationsmikroskop, um sicherzustellen, gibt es keine Netzhautblutungen. </li></ol><img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/53030/53030fig2.jpg" /> Abbildung 2. Subretinale Belb Formation ohne Netzhautblutungen. Mikroskopische Ansicht des subretinalen belb nach dem subretinalen Injektion unter Operationsmikroskop zeigt erfolgreiche bleb Bildung ohne Netzhautblutungen.m / files / ftp_upload / 53030 / 53030fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. <ol start="11"><li> Schließen Sie vorsichtig das Augenlid auf die Injektionsstelle für selbstdicht decken. Bringen Sie die Maus mit nach Hause Käfig und am Leben zu erhalten, bis die Auswertung. Hinweis: Nach dem die Forscher erhalten den Verfahren verwendet werden, können sie die wiederholbare Ergebnisse mit Schnellverfahren durch Überspringen Sie diese Schritte erhalten (2,5, 6 und 10) </li></ol> 3. Bewertung der Wirksamkeit von Gentransfer in Retinapigmentepithel <ol start="1"><li> Opfern die Mäuse in der CO 2 Kammer. Entkernen die Augen mit einer Schere. </li><li> Fixieren die Augen in der 4% Paraformaldehyd-Lösung bei 4 ° C für mindestens 1 Stunde bis einige Tage. </li><li> Besorgen Sie sich die Hornhaut mit feinen Pinzetten und Punktion der Hornhaut mit Mikro-Schere. Entfernen Sie die Hornhaut nach scissoring entlang des Limbus. Nehmen Sie den Objektiv mit einer Pinzette. </li><li> Schneiden Sie die Ziliarkörper mit micro-Schere ermöglicht Netzhautablösung. Ziehen Sie die gesamte Netzhaut von der RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex. Schneiden Sie den RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex radial von der Peripherie zum Zentrum in der Nähe des Sehnervs mehrmals, um 4 bis 8 Blätter für flache Montage machen. </li><li> Klappen Sie den RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex zu RPE Seite nach unten zu machen, und schneiden Sie die verbleibenden Gewebe an der skleralen Seite einschließlich der Muskeln, Bindehaut und Sehnerv. Dieser Schritt ist wichtig, um eine flache RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex zu machen, weil der verbleibende Gewebe macht die komplexe uneben. </li><li> Inkubieren Sie die Anlage mit primären und sekundären Antikörpers für Ihre spezielle Forschungszwecke (optional, siehe die Referenzen für detaillierte Methoden). Flach montieren RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplexe auf dem Objektträger und absorbieren die PBS mit einem saugfähigen Schwamm. </li><li> In 30 ul Montagelösung und legen Sie das Deckglas. Beachten Sie die Probe für die Wirksamkeit von Vektor-Lieferung unter Fluoreszenzmikroskop. Bewahren Sie die Proben inder Kühlschrank zur weiteren Beobachtung. </li></ol>

<ol>
	<li>Maguire, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+gene+transfer+for+Leber's+congenital+amaurosis.">Safety and efficacy of gene transfer for Leber's congenital amaurosis.</a> N Engl J Med. 358 (21), 2240-2248 (2008).</li><li>Jacobson, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+leber+congenital+amaurosis+caused+by+RPE65+mutations:+safety+and+efficacy+in+15+children+and+adults+followed+up+to+3+years.">Gene therapy for leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years.</a> Arch Ophthalmol. 130 (1), 9-24 (2012).</li><li>Conlon, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+potency+and+safety+studies+of+an+AAV2-mediated+gene+therapy+vector+for+the+treatment+of+MERTK+associated+retinitis+pigmentosa.">Preclinical potency and safety studies of an AAV2-mediated gene therapy vector for the treatment of MERTK associated retinitis pigmentosa.</a> Hum Gene Ther Clin Dev. 24 (1), 23-28 (2013).</li><li>MacLaren, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+gene+therapy+in+patients+with+choroideremia:+initial+findings+from+a+phase+1/2+clinical+trial.">Retinal gene therapy in patients with choroideremia: initial findings from a phase 1/2 clinical trial.</a> Lancet. 383 (9923), 1129-1137 (2014).</li><li>Trapani, I., Puppo, A., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+platforms+for+gene+therapy+of+inherited+retinopathies.">Vector platforms for gene therapy of inherited retinopathies.</a> Prog Retin Eye Res. 43, 108-128 (2014).</li><li>Liang, F. Q., Anand, V., Maguire, A. M., Bennett, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraocular+delivery+of+recombinant+virus.">Intraocular delivery of recombinant virus.</a> Methods Mol Med. 47, 125-139 (2001).</li><li>Peyman, G. A., Lad, E. M., Moshfeghi, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+injection+of+therapeutic+agents.">Intravitreal injection of therapeutic agents.</a> Retina. 29 (7), 875-912 (2009).</li><li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate.">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. (79), (2013).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J Vis Exp. (69), (2012).</li><li>Eberle, D., Santos-Ferreira, T., Grahl, S., Ader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+transplantation+of+MACS+purified+photoreceptor+precursor+cells+into+the+adult+mouse+retina.">Subretinal transplantation of MACS purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina.</a> J Vis Exp. (84), e50932 (2014).</li><li>Sahel, J. A., Roska, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+blindness.">Gene therapy for blindness.</a> Annu Rev Neurosci. 36, 467-488 (2013).</li><li>Allocca, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+virus+serotypes+efficiently+transduce+murine+photoreceptors.">Novel adeno-associated virus serotypes efficiently transduce murine photoreceptors.</a> J Virol. 81 (20), 11372-11380 (2007).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+transduction+of+ocular+cells+with+a+bovine+immunodeficiency+viral+vector.">Sustained transduction of ocular cells with a bovine immunodeficiency viral vector.</a> Hum Gene Ther. 13 (11), 1305-1316 (2002).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapeutic+prospects+in+early+onset+of+severe+retinal+dystrophy:+restoration+of+vision+in+RPE65+Briard+dogs+using+an+AAV+serotype+4+vector+that+specifically+targets+the+retinal+pigmented+epithelium.">Gene therapeutic prospects in early onset of severe retinal dystrophy: restoration of vision in RPE65 Briard dogs using an AAV serotype 4 vector that specifically targets the retinal pigmented epithelium.</a> Bull Mem Acad R Med Belg. 161 (10-12), 497-508 (2006).</li><li>Le Meur, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+vision+in+RPE65-deficient+Briard+dogs+using+an+AAV+serotype+4+vector+that+specifically+targets+the+retinal+pigmented+epithelium.">Restoration of vision in RPE65-deficient Briard dogs using an AAV serotype 4 vector that specifically targets the retinal pigmented epithelium.</a> Gene Ther. 14 (4), 292-303 (2007).</li><li>Alexander, J. J., Hauswirth, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+and+the+retina.">Adeno-associated viral vectors and the retina.</a> Adv Exp Med Biol. 613, 121-128 (2008).</li><li>Puche, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+environmental+factors+associated+with+reticular+pseudodrusen+in+age-related+macular+degeneration.">Genetic and environmental factors associated with reticular pseudodrusen in age-related macular degeneration.</a> Retina. 33 (5), 998-1004 (2013).</li><li>Campochiaro, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+for+neovascular+age-related+macular+degeneration.">Gene transfer for neovascular age-related macular degeneration.</a> Hum Gene Ther. 22 (5), 523-529 (2011).</li><li>Park, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+amyloid+beta+alters+the+tight+junction+of+retinal+pigment+epithelium+in+5XFAD+mice.">Intracellular amyloid beta alters the tight junction of retinal pigment epithelium in 5XFAD mice.</a> Neurobiol Aging. 35 (9), 2013-2020 (2014).</li><li>Shin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+cleavage+of+amyloid+beta+by+a+viral+protease+NIa+prevents+amyloid+beta-mediated+cytotoxicity.">Intracellular cleavage of amyloid beta by a viral protease NIa prevents amyloid beta-mediated cytotoxicity.</a> PLoS One. 9 (6), e98650 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

In diesem Video-Artikel beschrieben wir die Limbus-Ansatz subretinalen Injektionstechnik im Detail mit den repräsentativen Ergebnissen der RPE / Aderhaut / Lederhaut Flachmontage. Dies ist eine einfache und bequeme Technik zum subretinalen Injektion von viralen Vektoren in RPE. Direkte Visualisierung bleb Bildung während der Injektion ist ein wichtiger Schritt für die pünktliche Lieferung für die Anfänger. Es gibt einige subretinalen Injektionstechniken in Blatt eingeführt of Visualized Experiments 8-10.</su...

In der Augenheilkunde hat die Gentherapie als Behandlungsmethode in monogenen geerbt Retinopathien entstanden. Es vererbt Retinopathien mit Genen im retinalen Pigmentepithel (RPE), einschließlich Leber angeborene amurosis 1,2, Retinitis pigmentosa 3 und choroideremia 4 verbunden. Das Forschungsfeld der Gentherapie erweitert in beiden präklinischen Studien und klinischen Studien unter Verwendung von viralen Vektoren, wie Adeno-assoziierte Virus (AAV), Lentiviren (LV) und Adenovirus (Ad) 5. Verschiedene virale Vektoren haben unterschiedliche Tropismus in der Netzhaut. Für eine sichere und wirksame Gentherapie, virale Vektoren sollten sorgfältig entsprechend Zielzellen und Zielgene ausgewählt werden. Die Route der Genübertragung ist auch wichtig für eine effektive Genübertragung an Zielzellen, so sollte es sorgfältig und ausgewählt werden. Die beiden am häufigsten verwendeten Methoden zur intraokularen Abgabe von viralen Vektoren sind SUBRETinal Einspritzung und intravitreale Injektion 6. Letztere, intravitreale Injektion, wurde weit verbreitet für die Arzneimittelabgabe verwendet werden, um CNV in feuchten altersbedingten Makuladegeneration (AMD) und Makulaödem bei diabetischer Retinopathie 7 behandeln. Intravitreale Route bietet Exposition viraler Vektoren zu glasigen und inneren Retina, sondern die Diffusion der Vektoren äußeren Netzhaut begrenzt ist. Auf der anderen Seite stellt die subretinale Route direkte Lieferung von viralen Vektoren zum Potential Raum zwischen Retina und RPE, Induzieren einer lokalisierten Bläschen. Daher wird subretinalen Injektion momentan als ein effizienter Weg für die gezielte Photorezeptorzellen und RPE. In Bezug auf die chirurgischen Ansatz, Pars plana als einen sicheren Bereich für die intravitreale Injektion gewählt, um Netzhautschäden in menschlichen Patienten zu vermeiden. Durch einfaches Ändern dieses Konzept für Mäuse, wir könnten virale Vektoren subretinal oder intravireally via Limbus-Ansatz zu injizieren. In diesem VideoArtikel zeigen wir eine einfache und bequeme Methode der subretinalen Injektion von viralen Vektoren in Mäuse RPE. Nach Einzelpunktion bei posterior zu Limbus mit einer 30 G 1/2 Nadel wird ein 33 G stumpfen Nadel ausgestattet Mikroliterspritze in den subretinalen Raum über den Limbus Einstichstelle eingeführt. Die viralen Vektoren 1,5-2 ul Volumen auf das Potential Raum zwischen Retina und RPE Induzieren subretinalen Bläschen injiziert. Dieser Vorgang kann unter direkter Sicht mit Operationsmikroskop durchgeführt werden. Wiederholte Praxis werden reproduzierbare Ergebnisse auch ohne direkte Visualisierung der Bläschenbildung zu gewährleisten. Dies soll dazu dienen, um eine genaue und zeitsparende Experimente zur subretinalen Gentransfer in Mäusen RPE durchzuführen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>TWEEZERS DUMONT #5 11cm DUMOSTAR 0.1 x 0.06 mm TIPS</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VANNAS Scissors S/S, 105mm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>555583S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33G Blunt needle</td>
			<td>WPI</td>
			<td>NF33BL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoFil Syringe, 10 microliter&#160;</td>
			<td>WPI</td>
			<td>NANOFIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE-KIT</td>
			<td>WPI</td>
			<td>RPE-KIT</td>
			<td>For easy one hand injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30Gx1/2 (0.3mmx 13mm) BD PrecisionGlideTM Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305107</td>
			<td>Initial puncture for subretinal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glasses (No. 1 3 mm diameter)</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0720&#160; (CS-3R)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica operating microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LM M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresecein microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse 80i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>TMO.LV-Ctr</td>
			<td>Used to dilute vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-015</td>
			<td>Used to dilute vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troperin (Phenylephrin 0.5%-Tropicamide 0.5%)</td>
			<td>Hanmi</td>
			<td></td>
			<td>For dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution USP, 0.5% (Sterile)</td>
			<td>Bausch&#38;Lomb</td>
			<td></td>
			<td>For topical anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Healon GV OVD</td>
			<td>Abbott Medical Optics Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoletil 50 (tiletamine hypochloride and zolazepam hypochloride)</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>For general anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun&#174; injection (Xylazine HCl)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td>For general anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in retinopathies using non-viral and viral gene delivery to the retina and retinal pigment epithelium (RPE). Subretinal injection is the best approach to deliver viral vectors directly to RPE cells. Before the clinical trial of a gene therapy, it is inevitable to validate the efficacy of the therapy in animal models of various retinopathies. Thus, subretinal injection in mice becomes a fundamental technique for an ocular gene therapy. In this protocol, we provide the easy and replicable technique for subretinal injection of viral vectors to experimental mice. This technique is modified from the intravitreal injection, which is widely used technique in ophthalmology clinics. The representative results of RPE/choroid/scleral complex flat-mount will help to understand the efficacy of this technique and adjust the volume and titer of viral vectors for the extent of gene transduction.

Um die Wirksamkeit der subretinalen Injektion auf virale Gen-Transduktion durch dieses Protokoll zu bewerten, haben wir im Handel erhältlich LV Vektoren mit CMV-Promotors exprimieren, sowohl GFP und RFP für den Indikator. Augen wurden nach der jeweiligen Zeitperiode nach dem Forschungszweck ausgeschält. Für die repräsentative Ergebnisse wurden die Augen 10 Wochen und 20 Wochen nach der subretinalen Injektion enukleiert. Nach vollständiger Entfernung der Netzhaut mit dem oben beschriebenen Verfahren wurde die Wohnu...

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Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

Subretinal injection is a surgical technique for effective gene delivery to retinal pigment epithelium in the mouse eye. Here we describe an easy and replicable method for subretinal injection of viral vectors to retinal pigment epithelium in experimental mice.

Limbus-Ansatz-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie bei Mäusen Retinapigmentepithel

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

limbal-approach-subretinal-injection-viral-vectors-for-gene-therapy

Research

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Neuroscience

20.8K Aufrufe.  Seoul National University College of Medicine. Subretinal injection is a surgical technique for effective gene delivery to retinal pigment epithelium in the mouse eye. Here we describe an easy and replicable method for subretinal injection of viral vectors to retinal pigment epithelium in experimental mice.