In Pharmakokinetik- und Toxikokinetik-Studien müssen wir eine bestimmte Menge Blut zu bestimmten Zeitpunkten bei Ratten sammeln, um die Arzneimittelexposition nachzuweisen. Diese Studie beschreibt eine einfache und effiziente Methode zur Blutentnahme aus der Vena subclavia bei Ratten in diesem Protokoll. Diese Technik ermöglicht eine wiederholte, zeitnahe und leicht identifizierbare Probenahme ohne Anästhesie und erhält qualitativ hochwertiges Blut durch wiederholte Probenentnahme.
Sie sollten die Anatomie der Vena subclavia, die Fähigkeit zur Rattenzurückhaltung und die Nadelspitze kennen. Die Methode ist riskant und erfordert einen qualifizierten Fachmann. Finden Sie zunächst den tiefsten Punkt der dreieckigen Fossa subclavia zwischen Hals und Vorderbein bei einer Ratte.
Bewegen Sie sich etwa zwei bis drei Millimeter in Richtung Kopf und erreichen Sie die Nadelspitze an der Blutentnahmestelle. Entfernen Sie die Haare mit einem elektrischen Rasierer. Um den Kopf, den Hals und die Brust der Ratte aufrecht zu halten, fassen Sie die Haut am Nacken mit einer Hand und legen Sie die Injektionsstelle frei.
Begradigen Sie die Vordergliedmaßen an der Seite der Injektionsstelle, um ihre Höhe zu halten. Halten Sie die Spritze mit der anderen Hand parallel zum Kopf der Ratte und neigen Sie die Spritze um fünf bis 10 Grad nach außen, so dass die Spitze in die ventrale Richtung geneigt ist. Führen Sie die Nadel vollständig in die vordere Höhle ein.
Ziehen Sie die Spritze zurück, um den Unterdruck mit dem Schlauch aufrechtzuerhalten. Bewegen Sie die Nadel langsam von tief nach flach und gehen Sie den gleichen Weg zurück. Wenn Blut in die Spritzennadel eingedrungen ist, fixieren Sie die Position der Nadel.
Abhängig vom Gewicht und der Gesundheit der Ratten ist die maximale Blutmenge zu überwachen, die gemäß den vom Tierpflege- und -verwendungsausschuss der Einrichtung festgelegten Standards festgelegt wird. In Ermangelung anderer Anforderungen dürfen innerhalb von 24 Stunden nicht mehr als 20 % des gesamten Blutvolumens des Tieres entnommen werden. Wenn genügend Blutprobe entnommen ist, ziehen Sie die Spritze sofort heraus und bereiten Sie sich auf die Blutbehandlung vor.
Drucken Sie die Injektionsstelle der Ratte für ein bis zwei Minuten, um die Blutung zu stoppen. Da sich die Entnahmestelle im unteren Teil des Halses befindet, drücken Sie die Haut der Vena subclavia zusammen, um die Blutung zu stoppen, indem Sie darauf drücken. Entfernen Sie die Nadel aus der Spritze und entsorgen Sie sie im scharfen Werkzeugbehälter.
Übertragen Sie das Blut langsam aus der Spritze in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen. Drücken Sie die Spritze gegen die Wand, um Blasenbildung zu vermeiden. Schließen Sie den Deckel des Mikrozentrifugenröhrchens und schnippen Sie vorsichtig daran.
Mischen Sie das Blut gründlich mit dem Antikoagulans, indem Sie es mindestens fünfmal auf den Kopf stellen. Innerhalb von 120 Minuten nach dem Sammeln des Plasmas wird die Vollblutprobe bei 2.000 RCF für 10 bis 15 Minuten bei Raumtemperatur zentrifugiert. Verwenden Sie eine Pipettenpistole, um das obere Plasma in ein frisches Mikrozentrifugenröhrchen zu überführen.
Berühren Sie den Pipettenkopf nicht mit dem unteren Vollblut. Entsorgen Sie das mit den roten Blutkörperchen kontaminierte Plasma oder zentrifugieren Sie es erneut. Plasmaproben, die genau aus der Vena subclavia entnommen wurden, waren durchscheinend hellgelb.
Unsachgemäße Blutentnahme oder Manipulation führte zu Hämolyse. Bei der ersten Probenahme lag das Körpergewicht des männlichen Tieres zwischen 268 und 297 Gramm und bei den Weibchen bei etwa 214 bis 239 Gramm. Bei der letzten Probenahme lag das Körpergewicht des männlichen Tieres zwischen 376 und 462 Gramm und bei den Weibchen bei etwa 254 bis 300 Gramm.
Zwischen der toxikokinetischen Blutentnahme lag ein Abstand von 28 Tagen. Das Körpergewicht des Tieres nahm jede Woche stetig zu und die klinische Beobachtung war normal. Die präzise Nadeleinstichmethode und der präzise Nadeleinstichwinkel können eine reibungslose Blutentnahme gewährleisten und Risiken vermeiden.
Diese Operation erfordert wiederholtes Üben.
