Diese Methode kann wichtige Informationen im Zusammenhang mit der Verpupationsökologie von Teeblattraupen, Ectropis grisescens, wie ihre Welpen verhalten und die Pupae Überleben als Reaktion auf verschiedene Umweltfaktoren. Der Hauptvorteil dieser Technik, ermöglicht es Ihnen, eine einfache Methode wie die Messung der Pupationspräferenz und Entstehungserfolg von Ectropis grisescens zu verwenden. Zu Beginn frische Triebe aus Teepflanzen schneiden.
Dann füllen Sie einen 250 Milliliter dreieckigen Kolben mit Leitungswasser und legen Sie die Triebe in den Kolben. Drei bis vier Kolben in ein Kunststoffbecken geben. Als nächstes lassen Sie 1 000 bis 2 000 Larven aus einer Laborkolonie von E.grisescens auf die Blätter der Teetriebe ab.
Pflegen Sie die Larven unter kontrollierten Laborbedingungen. Erhalten Sie die reifen, letzten Instar Larven, die von den Blättern der Triebe fallen und aktiv entlang des Bodens des Beckens wandern. Boden und Sand in einem 80 Grad Celsius Ofentrockner für drei Tage sterilisieren.
Dann trocknen Sie den Boden und Sand bei 50 Grad Celsius für mehrere Wochen. Die Substratproben sind ausreichend getrocknet, wenn sich das Gewicht im Laufe der Zeit nicht ändert. Verwenden Sie einen hölzernen Stößel und Mörtel, um den getrockneten Boden zu mahlen.
Dann sieben Sie den Sand und den Boden durch ein drei Millimeter Sieb. Die benötigte Menge destilliertes Wasser in die versiegelten Säcke mit den Substraten geben und gründlich vermischen. Verwenden Sie als Nächstes PVC-Platten, um Polypropylenbehälter in sechs gleiche Kammern aufzuteilen.
Befestigen Sie die PVC-Platten und versiegeln Sie die Risse mit Heißkleber. Als nächstes füllen Sie die sechs Kammern mit der gleichen Art von Substrat mit unterschiedlichen Feuchtigkeitsgehalt. Verwenden Sie kleine Klebestücke, um vier bis sechs Stücke frischer Blätter auf die Innenfläche des Deckels des Polypropylenbehälters zu kleben.
Als nächstes lassen Sie 30 reife Last-Instar-Larven auf die Blätter, die auf den Deckel des kammerförmigen Behälters geklebt sind. Drehen Sie den Deckel vorsichtig um und bedecken Sie den Behälter. Pflegen Sie die Bioassay-Arena in einer Umweltkammer mit einer 14 bis 10 hell/dunklen Photoperiode bei 26 Grad Celsius.
Zählen Sie am fünften Tag die Anzahl der Welpen auf der Oberfläche des Substrats in jeder Kammer. Demontieren Sie den Bioassay und zählen Sie die Anzahl der Welpen. Verwenden Sie zunächst PVC-Platten, um die Polypropylenbehälter in vier Kammern aufzuteilen.
Dann fixieren und versiegeln Sie die PVC-Platten mit Heißkleber. Füllen Sie die Kammern des Behälters mit vier Arten von Substrat mit dem gleichen Feuchtigkeitsgehalt und zufällig zugewiesenen Aufträgen. Dann verwenden Sie Klebeband, um frische Teeblätter auf den Deckel zu kleben, bevor Sie es auf den Behälter drehen.
Als Nächstes übertragen Sie Larven auf die Blätter und zeichnen und analysieren Sie die Daten, wie im Textprotokoll beschrieben. Nach der Vorbereitung der 12 Substrat-Feuchtigkeitsgehaltsbehandlungen fügen Sie das Substrat in Kunststoffbehälter ein. Dann lassen Sie 15 reife Last-Instar-Larven in das Substrat jeder Arena frei.
Pflegen Sie jede der Bioassay-Arenen in einer Umweltkammer mit einer 14 bis 10 hell/dunklen Photoperiode bei 26 Grad Celsius. Zählen Sie am dritten Tag die Anzahl der Pupas und aller toten Larven auf der Oberfläche des Substrats jeder Arena. Notieren Sie schließlich die Anzahl der aufstrebenden Erwachsenen jeden Tag, bis 15 Tage lang keine neuen Erwachsenen auftauchen.
In diesem Protokoll wurden Bioassays zur Feuchtigkeits- und Substratwahl verwendet, um die Verpupationspräferenz von E.grisescens zu untersuchen. Die Feuchtigkeitsauswahl-Bioassays zeigten, dass mehr Personen auf oder innerhalb des 5% und 35%feuchtigkeitsigen Sandes verpupzierten als der 80%ige Feuchtigkeitssand. Deutlich mehr Personen zogen es jedoch vor, auf oder innerhalb des Bodens mit einem mittleren Feuchtigkeitsgehalt zu verpupen.
Substratauswahl-Bioassays ergaben, dass Sand von E.grisescens unter 20% Feuchtigkeitsbedingungen und unter 80% Feuchtigkeitsbedingungen am bevorzugt wurde. Unter den vier Substraten unter 50%feuchtigkeitsbedingt enthoben wurde jedoch keine Vergupmungspräferenz gefunden. Nach der Entwicklung ebnete diese Technik den Forschern auf dem Gebiet der Entomologie den Weg, um die Verpupationsökologie vieler bodenverachtender Insekten zu erforschen.
