Hochdurchsatz-Screening-Bewertung der Erzeugung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) mit Dihydroethidium (DHE)-Fluoreszenzfarbstoff

Unser Labor untersucht die Auswirkungen von Umweltschadstoffen wie Schwermetallen auf die Leberfunktion und Krankheiten im Zusammenhang mit der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies. Dieses Protokoll zielt darauf ab, den ROS-Spiegel in Zellen mit einer Dihydroethidium-Fluoreszenzsonde quantitativ zu messen. Dieses Protokoll verwendet eine High-Content-Screening-Plattform, um intrazelluläre ROS-Speziesspiegel in hepatozellulären Linien quantitativ zu messen.

Die genaue Messung des interzellulären ROS-Spiegels ist von entscheidender Bedeutung für toxikologische Hochdurchsatzstudien, die ein wichtiges Interessengebiet in unserem Labor sind. Die DHE-Fluoreszenz ist eine hochspezifische Methode zur Messung des Gesamt-ROS-Spiegels, die insbesondere auf das Superoxidradikal abzielt, was ihr einen erheblichen Vorteil gegenüber anderen häufig verwendeten ROS-Fluoreszenzsonden verschafft. Darüber hinaus bietet dieses Protokoll die einzigartige Möglichkeit, den gesamten zellulären ROS-Spiegel in einer Hochdurchsatzplattform zu messen.

Unser Protokoll ist eine robuste und reproduzierbare Wahl zur Charakterisierung der intrazellulären Gesamtproduktion von ROS. Hochdurchsatzansätze zur Messung des ROS-Spiegels sind in einer Vielzahl von Studien hilfreich, wie z. B. Toxikologie, Wirkstoffscreening und Krebsbiologie, auf die wir uns in Zukunft konzentrieren werden.