Aislamiento y cultivo de células epiteliales mamarias humanas primarias

Resumen

El presente estudio informa de un protocolo más fácil, económico y que ahorra tiempo para aislar y cultivar de manera eficiente células epiteliales mamarias humanas primarias (HMEC) a partir de pequeñas cantidades de tejido mamario. Este protocolo es adecuado para producir rápidamente HMEC primarios tanto para aplicaciones de laboratorio como clínicas.

Resumen

La glándula mamaria es una estructura fundamental de la mama y desempeña un papel esencial en la reproducción. Las células epiteliales mamarias humanas (HMEC), que son las células de origen del cáncer de mama y otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la mama, han atraído una atención considerable. Sin embargo, el aislamiento y cultivo de HMECs primarias in vitro con fines de investigación ha sido un desafío debido a su naturaleza altamente diferenciada y queratinizada y su corta vida útil. Por lo tanto, el desarrollo de un método simple y eficiente para aislar y cultivar HMEC es de gran valor científico para el estudio de la biología mamaria y las enfermedades relacionadas con la mama. En este estudio, aislamos con éxito HMECs primarias de pequeñas cantidades de tejido mamario por digestión con una mezcla de enzimas combinada con un cultivo inicial en suero fetal bovino-DMEM al 5% que contenía el inhibidor de la quinasa asociada a Rho (ROCK) Y-27632, seguido de la expansión del cultivo en medio de queratinocitos libre de suero. Este enfoque promueve selectivamente el crecimiento de las células epiteliales, lo que resulta en un rendimiento celular optimizado. La simplicidad y conveniencia de este método lo hacen adecuado tanto para la investigación de laboratorio como para la clínica, que debería proporcionar información valiosa sobre estas importantes áreas de estudio.

Introducción

El cáncer de mama es el principal tipo de cáncer diagnosticado en mujeres a nivel mundial y es la principal causa de muerte por cáncer¹. La patogenia del cáncer de mama es compleja e involucra múltiples factores como la genética, el medio ambiente y el estilo de vida. Las HMEC, células activas productoras de leche, son uno de los componentes más importantes del tejido mamario y probablemente son las células originales involucradas en la carcinogénesis del cáncer de mama. Por lo tanto, las HMEC han recibido la mayor atención de los investigadores para el estudio del cáncer de mama². Además, las células primarias tienen la....

Protocolo

Los tejidos mamarios normales frescos utilizados en este protocolo se recolectan de la cirugía alrededor de la lesión de mastitis lobulillar granulomatosa refractaria en el Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica China de Zhejiang de acuerdo con las pautas del Comité de Ética Médica del Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica China de Zhejiang (Protocolo No. ChiMCTR2100005281, Fecha: 2017-07-17).

1. Adquisición de tejido

1. Recoja tejidos mamarios frescos de muestras quirúrgicas tomadas de mujeres adultas en tubos estériles que contengan 10 mL de solución salina tamponada con fosfato (PBS) con 3% ....

Discusión

Las HMEC son vitales para preservar la integridad anatómica y funcional del tejido mamario y son útiles en investigaciones científicas, implementaciones clínicas y dominios asociados¹⁵. Las células epiteliales primarias son un tipo de células especializadas que tienen pasajes limitados y vidas más cortas. Sin embargo, el crecimiento de las HMEC se ha visto obstaculizado por limitaciones técnicas, que en consecuencia han obstaculizado los avances en la investigación sobre el cáncer de mam.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin	Basalmedia	K431010	For HMECs  dissociation
1.5 mL microcentrifuge Tubes	NEST	081722CK01	For cell digestion
100 µm mesh filter	Solarbio	431752	For HMECs filtration
100 mm Cell Culture Dish	Corning	430167	For cell culture
4% paraformaldehyde	solarbio	P1110-100ml	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
50 mL Centrifuge Tube	Corning	430829	For cell centrifugation
Cell Strainer	Solarbio	431752	Cell filtration
Centrifuge	Eppendorf	5404HN133048	Cell centrifuge
CO2 Incubator	Thermo Scientific	42820906	For cell incubation
Collagenase Type I	Merck	SKU:SCR103	For HMECs isolation
Dispase	Solarbio	CAS:42613-33-2	For HMECs isolation
DMEM	Gibco	8122622	Component of neutralization medium
Fetal Bovine Serum	Gibco	2556132P	Component of neutralization medium
Penicillin/Streptomycin	Thermo Scientific	15140-122	Antibiotics
Phosphate buffered solution	Tecono	20201033	Washing solution
rabbit anti CK7	abcam	ab68459	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
rabbit anti GATA3	abcam	ab199428	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
Y-27632	Solarbio	IY0040	ROCK inhibitor