Isolement et culture de cellules épithéliales mammaires humaines primaires

Résumé

La présente étude fait état d’un protocole plus facile, rapide et économique permettant d’isoler et de cultiver efficacement des cellules épithéliales mammaires primaires (HMEC) humaines à partir de petites quantités de tissu mammaire. Ce protocole est adapté à la production rapide de HMEC primaires pour des applications de laboratoire et cliniques.

Résumé

La glande mammaire est une structure fondamentale du sein et joue un rôle essentiel dans la reproduction. Les cellules épithéliales mammaires humaines (HMEC), qui sont à l’origine du cancer du sein et d’autres maladies inflammatoires liées au sein, ont suscité une attention considérable. Cependant, l’isolement et la culture d’HMEC primaires in vitro à des fins de recherche ont été difficiles en raison de leur nature kératinisée hautement différenciée et de leur courte durée de vie. Par conséquent, le développement d’une méthode simple et efficace pour isoler et cultiver les HMEC est d’une grande valeur scientifique pour l’étude de la biologie du sein et des maladies liées au sein. Dans cette étude, nous avons réussi à isoler les HMEC primaires à partir de petites quantités de tissu mammaire par digestion avec un mélange d’enzymes combiné à une culture initiale dans du sérum fœtal bovin à 5 % contenant l’inhibiteur de la kinase associée à la Rho (ROCK) Y-27632, suivie d’une expansion de la culture dans un milieu kératinocytaire sans sérum. Cette approche favorise sélectivement la croissance des cellules épithéliales, ce qui permet d’optimiser le rendement cellulaire. La simplicité et la commodité de cette méthode la rendent adaptée à la fois à la recherche en laboratoire et à la recherche clinique, ce qui devrait fournir des informations précieuses sur ces domaines d’étude importants.

Introduction

Le cancer du sein est le principal type de cancer diagnostiqué chez les femmes dans le monde et est la principale cause de décès par cancer¹. La pathogenèse du cancer du sein est complexe et implique de multiples facteurs tels que la génétique, l’environnement et le mode de vie. Les HMEC, cellules actives productrices de lait, sont l’un des composants les plus importants du tissu mammaire et sont probablement les cellules d’origine impliquées dans la cancérogenèse du cancer du sein. Par conséquent, les HMEC ont reçu le plus d’attention de la part des chercheurs pour l’étude du cancer du sein². De plus, les cellules prima....

Protocole

Les tissus mammaires normaux frais utilisés dans ce protocole sont prélevés lors d’une intervention chirurgicale autour de la lésion de la mammite lobulaire granulomateuse réfractaire dans le premier hôpital affilié de l’Université de médecine chinoise du Zhejiang, conformément aux directives du Comité d’éthique médicale du premier hôpital affilié de l’Université de médecine chinoise du Zhejiang (protocole n° ChiMCTR2100005281, Date : 2017-07-17).

1. Acquisition de tissus

1. Prélever des tissus mammaires frais à partir d’échantillons chirurgicaux prélevés sur des femmes adultes dans des tubes stériles contenant 10 ml....

Discussion

Les HMEC sont essentiels à la préservation de l’intégrité anatomique et fonctionnelle du tissu mammaire et sont utiles dans les recherches scientifiques, les mises en œuvre cliniques et les domaines associés¹⁵. Les cellules épithéliales primaires sont un type de cellules spécialisées qui ont des passages limités et une durée de vie plus courte. Cependant, la croissance des HMEC a été entravée par des contraintes techniques, qui ont par conséquent entravé les progrès de la reche.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin	Basalmedia	K431010	For HMECs  dissociation
1.5 mL microcentrifuge Tubes	NEST	081722CK01	For cell digestion
100 µm mesh filter	Solarbio	431752	For HMECs filtration
100 mm Cell Culture Dish	Corning	430167	For cell culture
4% paraformaldehyde	solarbio	P1110-100ml	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
50 mL Centrifuge Tube	Corning	430829	For cell centrifugation
Cell Strainer	Solarbio	431752	Cell filtration
Centrifuge	Eppendorf	5404HN133048	Cell centrifuge
CO2 Incubator	Thermo Scientific	42820906	For cell incubation
Collagenase Type I	Merck	SKU:SCR103	For HMECs isolation
Dispase	Solarbio	CAS:42613-33-2	For HMECs isolation
DMEM	Gibco	8122622	Component of neutralization medium
Fetal Bovine Serum	Gibco	2556132P	Component of neutralization medium
Penicillin/Streptomycin	Thermo Scientific	15140-122	Antibiotics
Phosphate buffered solution	Tecono	20201033	Washing solution
rabbit anti CK7	abcam	ab68459	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
rabbit anti GATA3	abcam	ab199428	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
Y-27632	Solarbio	IY0040	ROCK inhibitor