Esta investigación fue financiada por becas-en-Ayudas a la Investigación Científica de la Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia (JSPS), Grant-in-Aid del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología de Japón, Grants-in- La ayuda de los AVE y la cresta de Japón Agencia de Ciencia y Tecnología, Grant-in-Aid de Neuroinformática Japan Center (NIJC), RIKEN y por la subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica en la investigación del cerebro áreas prioritarias-Integrativa (Shien) - de MEXT en Japón. Damos las gracias a O&#39;hara &amp; Co. y Hayashi Mariko por su ayuda en la creación de esta película.

Protocolo <ol><li> El aparato utilizado para la prueba del laberinto más elevada está en la configuración de un + y consta de dos brazos abiertos (25 x 5 x 0,5 cm) a través de sí y perpendiculares a los dos brazos cerrados (25 x 5 x 16 cm) con un centro de plataforma (5 x 5 x 0,5 cm). Los brazos abiertos tienen una muy pequeña (0,5 cm) de la pared para disminuir el número de caídas, mientras que los brazos cerrados tienen un alto (16 cm) de la pared para encerrar el brazo. Todo el aparato es de 50 cm sobre el suelo (Ohara &amp; Co., de Tokio) y se coloca en un tanque vacío circular (100 cm de diámetro, 35 cm de altura, normalmente se utiliza para la tarea laberinto de Morris) para proteger a los ratones que caen o intento de escapar durante el experimento. El aparato está fabricado con materiales de plástico. La plataforma es de color blanco y las paredes son transparentes. Hay una variación en los materiales y los colores de los aparatos de laberinto elevado. </li><li> Los ratones se encuentran con una luz de 12 h / oscuridad ciclo (luces a las 7:00 AM), como se describió previamente (Takao y Miyakawa, 2006a). Las pruebas de comportamiento se lleva a cabo 09 a.m.-06:00 PM. Todos los ratones experimentales se transfieren a las pruebas de comportamiento sala 30 minutos antes del comienzo del primer juicio a habituarse a las condiciones de la sala de pruebas de comportamiento. El orden de los ensayos se compensa a través de los genotipos. Hay dos efectos de la prueba de ensayo con un animal de la práctica. Uno de ellos es para asegurarse de que todo está bien con el sistema de grabación. Otra es la de mantener la condición de prueba lo más uniforme posible. Es decir, el ratón muy por primera vez en toda la sesión sería condición experimentan algo diferente con los demás (es decir, no hay ruido previo realizado por las operaciones de prueba y no señales del olor de los ensayos previos), sin una prueba práctica. Los animales son mantenidos de acuerdo con las directrices del Comité de Investigación Animal de la Universidad de Kyoto. </li><li> La sala de pruebas de comportamiento (170 x 210 x 200 cm, Ohara &amp; Co., de Tokio) está insonorizada y el nivel de iluminación se mantiene a 100 lux. Se coloca un ratón en la zona centro del laberinto, con su cabeza dirigida hacia un brazo cerrado. La prueba de laberinto elevado se registra con una cámara de vídeo conectada a un ordenador, que es controlada por un dispositivo remoto. El número de entradas (una entrada se define como el centro de masa del mouse entra en el brazo) en cada brazo y el tiempo empleado en los brazos abiertos y se registran estas mediciones sirven como un índice de ansiedad-como comportamiento. </li><li> Los ratones se les permite moverse libremente por el laberinto durante 10 minutos. Cada ratón recibe una prueba de nuestra batería de pruebas. La aplicación que se utiliza para obtener y analizar los datos de comportamiento (imagen EP) se basa en el programa J dominio público de la imagen (desarrollado por Wayne Rasband en el Instituto Nacional de Salud Mental y está disponible en <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ ij /</a> ), que fue modificada por Tsuyoshi Miyakawa (disponible a través de O&#39;Hara &amp; Co., Tokio, Japón). </li><li> La distancia recorrida, el número de entradas en cada brazo, el tiempo empleado en cada brazo, y el porcentaje de entradas en los brazos abiertos son calculados por el programa EP imagen. </li><li> Después de cada ensayo, todas las armas y la zona centro se limpian con agua súper hipocloroso, que es un agente de eliminación de olores eficiente y tiene un olor relativamente débil de sí mismo en comparación con otras soluciones de limpieza, para evitar un sesgo sobre la base de señales olfativas. Por tanto, podemos realizar las pruebas bajo condiciones controladas con respecto a señales olfativas. </li></ol>

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	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong With My Mouse? Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 240 (2007).</li><li>Rodgers, R. J., Dalvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiety,+defense+and+the+elevated+plus-maze.">Anxiety, defense and the elevated plus-maze.</a> Neurosci Behav Rev. 21, 801-810 (1997).</li><li>Handley, S. L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+'fear'-motivated+behaviour.">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 324, 1-5 (1984).</li><li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+open:closed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat.">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Meth. 14, 149-167 (1985).</li><li>File, S. E., Pellow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+triazolobenzodiazepines+in+two+animal+tests+of+anxiety+and+in+the+holeboard.">The effects of triazolobenzodiazepines in two animal tests of anxiety and in the holeboard.</a> Br J Pharmac. 86, 729-7235 (1985).</li><li>Lister, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+plus-maze+to+measure+anxiety+in+the+mouse.">The use of a plus-maze to measure anxiety in the mouse.</a> Psychopharmacology. 92, 180-185 (1987).</li><li>Miyakawa, T., Yagi, T., Kagiyama, A., Niki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radial+maze+performance,+open-field+and+elevated+plus-maze+behaviors+in+Fyn-kinase+deficient+mice:+further+evidence+for+increased+fearfulness.">Radial maze performance, open-field and elevated plus-maze behaviors in Fyn-kinase deficient mice: further evidence for increased fearfulness.</a> Brain Res Mol Brain Res. 37, 145-150 (1996).</li><li>Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. M., De Boer, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+animal+model+of+state+anxiety:+fear-potentiated+behaviour+in+the+elevated+plus-maze.">A robust animal model of state anxiety: fear-potentiated behaviour in the elevated plus-maze.</a> Eur J Phamacol. 463, 163-175 (2003).</li><li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety.">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54, 21-30 (1996).</li><li>Holmes, A., Parmigiani, S., Ferrari, P. F., Palanza, P., Rodgers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+profile+of+wild+mice+in+the+elevated+plus-maze+test+for+anxiety.">Behavioral profile of wild mice in the elevated plus-maze test for anxiety.</a> Physiol Behav. 71, 509-516 (2000).</li><li>Tsujimura, A., Matsuki, M., Takao, K., Yamanishi, K., Miyakawa, T., Hashimoto-Gotoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+the+kf-1+gene+exhibit+increased+anxiety-+but+not+despair-like+behavior.">Mice lacking the kf-1 gene exhibit increased anxiety- but not despair-like behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 10, (2008).</li><li>Nakajima, R., Takao, K., SM, H. u. a. n. g., Takano, J., Iwata, N., Miyakawa, T., Saido, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Todos los procedimientos fueron aprobados por el Uso de Animales y el Comité de Atención de la Universidad de Kyoto.

Aunque el genoma del ratón ha sido secuenciado, las funciones de la mayoría de los genes no se conocen. Técnicas de modificación genética permite la eliminación u otra manipulación de un gen específico en ratones (Austin et al, 2004;.. Aiba et al, 2007). La influencia de un determinado gen en una determinada conducta puede ser determinada por la realización de análisis de comportamiento de los ratones mutantes (Takao y Miyakawa, 2006b;. Takao et al, 2007). La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más populares de todos los modelos animales disponibles en la actualidad de la ansiedad (Rodgers y Dalvi, 1997; Crawley, 2007). Esta prueba de la ansiedad-como el comportamiento ha sido utilizado para la detección y el fenotipo de ratones transgénicos y knock-out (Crawley, 1999) y de descubrimiento de fármacos (Hogg et al 1996;. Crawley, 2007). La prueba de elevación de laberinto tiene una validez predictiva sólida para la detección de fármacos ansiolíticos (Rodgers y Dalvi, 1997; Mechiel Korte y De Boer, 2003; Crawley, 2007); ansiolíticos específicamente aumento, y las drogas ansiogénicos disminución en concreto, el número de entradas en los brazos abiertos y el tiempo que pasé allí. La puntuación total de entradas y la distancia total se considera un índice útil de la actividad general. Puntuación total de entradas es también un índice de ansiedad, y los porcentajes de las entradas y el tiempo invertido en cada brazo constituyen el índice de ansiedad primario (Rodgers y Dalvi, 1997, Mechiel Korte y De Boer, 2003). Los brazos abiertos y cerrados se consideran para evocar la unidad de exploración mismo, por lo tanto, la evitación de los brazos abiertos se considera ser el resultado de la inducción de los niveles más altos de miedo (Rodgers y Dalvi, 1997). Se cree que la aversión de los ratones para explorar los brazos abiertos del laberinto es causada por el temor a los espacios abiertos y elevados. En 1984, Handley y Mithani informó sobre el trabajo preliminar con la prueba del laberinto elevado X (más) se ha descrito anteriormente. El aparato de prueba original fue levantado 70 cm del suelo, y compuesto por dos cerrados y dos brazos abiertos, cada uno de los cuales mide 45 cm de largo por 10 cm de ancho. En sus estudios iniciales, se informó la razón de las entradas de brazo abierto / total (Handley y Mithani, 1984). Posteriormente, se desarrollaron otros índices que incluyen el número de entradas en los brazos abiertos y cerrados y el tiempo empleado en los brazos cerrados y abiertos para las ratas (Pellow et al, 1985; Pellow y Archivo, 1986) y ratones (Lister, 1987) . Cambios en la prueba del laberinto más elevado incluyen alargamiento de ambos los brazos abiertos (50 x 10 cm) y los brazos cerrados (50 x 10 x 40 cm) con altos muros que rodean y un techo abierto en los brazos cerrados, y el laberinto entero fue elevada a una altura de 50 cm (Pellow et al, 1985; Pellow y Archivo, 1986). En la actualidad, en nuestro laboratorio, el aparato más elevados prueba del laberinto está configurado en forma de +, con dos brazos abiertos (25 x 5 cm, con una muy leve, de 0,5 cm, la pared) a través de sí y perpendiculares a dos brazos cerrados (25 x 5 x 16 cm), y se eleva 50 cm sobre el suelo (Miyakawa et al, 1996; Manabe et al, 2000; Miyakawa et al, 2001; Seeger et al, 2004; Morishima et al, 2005; Miyamoto et al, 2005; Arrow et al, 2006; Hattori et al, 2007; Niemann et al, 2007; Sano et al, 2008; Horii et al, 2008; Fukuda et al, 2008; Ikeda et al, 2008). El ratón se coloca en el centro de la + (5 cm x 5 cm) y se le permite explorar el laberinto libremente. Aunque cinco minutos de grabación es común, el comportamiento se registra durante 10 minutos en el protocolo para aumentar la oportunidad de detectar el fenotipo. Los brazos en alto abiertos y cerrados provocar un conflicto de exploración (Mechiel Korte y De Boer, 2003; Crawley, 2007). Las medidas de la prueba del laberinto más elevados se registran por un observador durante el experimento. En nuestro laboratorio, la prueba se grabó con una cámara de vídeo conectada a un ordenador y los datos de comportamiento (imagen EP) son adquiridos y analizados utilizando el programa EP imagen. Número de entradas en los brazos abiertos frente al número de entradas del brazo total, y el tiempo empleado en los brazos abiertos frente a los brazos cerrados, suministrar a las medidas de ansiedad-como comportamiento. Se evaluaron más de 90 cepas de ratones mutantes modificados genéticamente mediante el protocolo se muestra en la película y tiene un gran conjunto de datos en bruto para más de 5.000 ratones (incluidos de tipo salvaje y ratones mutantes). En nuestra batería de pruebas, de tipo salvaje camada suelen ser utilizados como control. Como una cepa de fondo, los ratones C57BL/6J son ampliamente utilizados. Se recogieron los datos de los ratones C57BL/6J en las pruebas de comportamiento. Los valores obtenidos de ratones C57BL/6J en nuestra prueba de laberinto elevado son los siguientes (n = 914; media ± SEM), la distancia total recorrida: 1.547,55 14,27 cm, la duración del tiempo pasado: 56,49 2,42 s (brazos abiertos), 384,02 3,13 s (brazos cerrados), 161,90 2,17 s (centro de laberinto), proporción de tiempo dedicado en los brazos abiertos: 9.19 0.36%, la proporción de tiempo empleado en los brazos cerrados: 63,82 0,52%, el número de entradas: 7,64 0,21 (brazos abiertos), 24,32 0,28 (brazos cerrados);% las entradas de abrir el brazo: 21,9 0,05% cerrando las entradas de los brazos: 78,1 0,05. Ratones C57BL/6J pasar menos tiempo en los brazos abiertos que en los brazos cerrados (p &lt;0,0001, n = 914, a la par-test). Esto indica que los ratones C57BL/6J tienden a evitar los brazos abiertos, y que el tiempo empleado en los brazos abiertos es un índice válido de ansiedad-como comportamiento. Además, el orden de los ensayos se compensa a través de los genotipos, ya que el número de juicio afecta al tiempo de permanencia en los brazos abiertos y la plataforma del centro. Es decir, los índices se incrementan durante los días 3 y 4 ratones en comparación con el primero ratones (p = 0.0089, n = 476) (datos no publicados). Con nuestro protocolo, análisis de más de 1.661 ratones mostraron que el orden secuencial de los ratones en una jaula a prueba no afecta significativamente el tiempo de estancia brazo abierto (datos no publicados). Es decir, las actuaciones de los primeros ratones tomada de la jaula no difieren significativamente de las del segundo, el tercero o los ratones pasado. Aunque la prueba de elevación de laberinto y la prueba de la transición de luz / oscuridad son utilizados para la evaluación de la ansiedad-como el comportamiento, los resultados no son siempre coherentes entre sí (Holmes et al, 2000; Tujimura et al, 2008; Nakajima et al, en prensa ) Por ejemplo, el prosencéfalo específicos nocaut calcineurina ratones pasar una disminución en la cantidad de tiempo en la cámara de luz en la prueba de la transición de luz / oscuridad, pero una mayor cantidad de tiempo en los brazos abiertos en la prueba del laberinto elevado más (Miyakawa et al. , 2003). El análisis factorial de nuestra batería de pruebas de comportamiento indica que la prueba de elevación de laberinto y la prueba de la transición de luz / oscuridad evaluar los diferentes aspectos de la ansiedad-como el comportamiento, tales como brillante del espacio de ansiedad en la prueba de la transición de luz / oscuridad y abrir el espacio-la ansiedad-como comportamiento en el ensayo a campo abierto (Takao y Miyakawa, 2006b; Yamasaki et al, 2006). En consecuencia, tanto la luz / oscuridad de la prueba de transición y la prueba de laberinto elevado se incluyen en nuestra batería de pruebas de comportamiento. Crabbe y sus colegas informaron que variables no controladas y caracterización de los experimentos mutantes pueden producir resultados que son específicos de un laboratorio particular (Crabbe et al., 1999). Las diferencias de procedimiento que existe entre los laboratorios hacen que sea difícil de replicar o comparar los resultados entre ellos. El establecimiento de la documentación visual del protocolo promover una mejor comprensión de los procedimientos experimentales, lo que permite la estandarización de los protocolos utilizados en laboratorios y para la comparación de los fenotipos del comportamiento de las distintas cepas de ratones mutantes evaluó a través de estas pruebas. Anteriormente hemos publicado un protocolo de cine de la prueba de la transición de luz / oscuridad (Takao y Miyakawa, 2006a). Del mismo modo, las películas de otros protocolos, como por ejemplo la prueba de campo abierto, la prueba de natación forzada Porsolt, y las pruebas de miedo acondicionado que utilizamos en nuestra batería de pruebas de comportamiento se están realizando para la publicación de futuros artículos de revistas de vídeo.

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<td>Elevated plus maze</td>
<td>Tool</td>
<td>O&#x2019;hara & Co.</td>
<td>(none)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
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elevated plus maze for mice

Aunque el genoma del ratón está completamente secuenciado, las funciones de la mayoría de los genes expresados ​​en el cerebro no se conocen. La influencia de un determinado gen en una determinada conducta puede ser determinada por el análisis del comportamiento de los ratones mutantes. Si un gen diana se expresa en el cerebro, el fenotipo conductual de los ratones mutantes para dilucidar el mecanismo genético de los comportamientos normales. La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más utilizadas para medir la ansiedad-como comportamiento. La prueba se basa en la aversión natural de los ratones en las zonas abiertas y elevadas, así como sobre sus recursos naturales, el comportamiento espontáneo de exploración en ambientes nuevos. El aparato se compone de los brazos abiertos y los brazos cerrados, cruzó en medio perpendicularmente entre sí, y un área central. Los ratones se les da acceso a todas las armas y se les permite moverse libremente entre ellos. El número de entradas en los brazos abiertos y el tiempo empleado en los brazos abiertos se utilizan como índices de abrir un espacio de ansiedad inducido en ratones. Desafortunadamente, las diferencias de procedimiento que existe entre los laboratorios hacen que sea difícil de duplicar y comparar los resultados entre laboratorios. A continuación, presentamos una película detallada que demuestra nuestro protocolo de la prueba del laberinto más elevado. En nuestro laboratorio, hemos evaluado más de 90 cepas de ratones mutantes utilizando el protocolo se muestra en la película. Estos datos serán divulgados como parte de una base de datos pública que ahora estamos construyendo. Visualización del protocolo promoverá una mejor comprensión de los detalles del procedimiento experimental completa, que permite la estandarización de los protocolos utilizados en los diferentes laboratorios y comparaciones de los fenotipos del comportamiento de las distintas cepas de ratones mutantes evaluó a través de esta prueba.

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Elevated Plus Maze for Mice

La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más utilizadas para medir la ansiedad-como el comportamiento de los ratones. A continuación, presentamos una película que muestra los procedimientos detallados para la realización de la prueba.

Laberinto elevado Plus para ratones

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Research

JoVE Journal

Biology

89.7K vistas.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. La prueba de elevación de laberinto es una de las pruebas más utilizadas para medir la ansiedad-como el comportamiento de los ratones. A continuación, presentamos una película que muestra los procedimientos detallados para la realización de la prueba.

Video: Elevated Plus Maze for Mice

Light/dark Transition Test for Mice

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, however, can be used to delete or manipulate a specific gene in mice. The influence of a given gene on a specific behavior can then be determined by conducting behavioral analyses of the mutant mice. As a test for behavioral phenotyping of mutant mice, the light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. The test is based on the natural aversion of mice to brightly illuminated areas and on their spontaneous exploratory behavior in novel environments. The test is sensitive to anxiolytic drug treatment. The apparatus consists of a dark chamber and a brightly illuminated chamber. Mice are allowed to move freely between the two chambers. The number of entries into the bright chamber and the duration of time spent there are indices of bright-space anxiety in mice. To obtain phenotyping results of a strain of mutant mice that can be readily reproduced and compared with those of other mutants, the behavioral test methods should be as identical as possible between laboratories. The procedural differences that exist between laboratories, however, make it difficult to replicate or compare the results among laboratories. Here, we present our protocol for the light/dark transition test as a movie so that the details of the protocol can be demonstrated. In our laboratory, we have assessed more than 60 strains of mutant mice using the protocol shown in the movie. Those data will be disclosed as a part of a public database that we are now constructing.

Visualization of the protocol will facilitate understanding of the details of the entire experimental procedure, allowing for standardization of the protocols used across laboratories and comparisons of the behavioral phenotypes of various strains of mutant mice assessed using this test.

The light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. Here, we present a movie that shows detailed procedures on how we conduct the test.

Luz / oscuridad de transición de prueba para ratones

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Investigación

Biología

Morris Water Maze Experiment

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered non-fat milk or non-toxic tempera paint, where they must swim to a hidden escape platform. Because they are in opaque water, the animals cannot see the platform, and cannot rely on scent to find the escape route. Instead, they must rely on external/extra-maze cues. As the animals become more familiar with the task, they are able to find the platform more quickly. Developed by Richard G. Morris in 1984, this paradigm has become one of the "gold standards" of behavioral neuroscience.

The Morris water maze is a well-accepted tool used to document the involvement of the hippocampus in a behavioral task.

Agua Morris laberinto Experimento

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of microbiology was transformed with the advent of Anton van Leeuwenhoek&#39;s microscope, which allowed scientists to visualize prokaryotes for the first time. The development of the polymerase chain reaction (PCR) is one of those innovations that changed the course of molecular science with its impact spanning countless subdisciplines in biology. The theoretical process was outlined by Keppe and coworkers in 1971; however, it was another 14 years until the complete PCR procedure was described and experimentally applied by Kary Mullis while at Cetus Corporation in 1985. Automation and refinement of this technique progressed with the introduction of a thermal stable DNA polymerase from the bacterium Thermus aquaticus, consequently the name Taq DNA polymerase.
PCR is a powerful amplification technique that can generate an ample supply of a specific segment of DNA (i.e., an amplicon) from only a small amount of starting material (i.e., DNA template or target sequence). While straightforward and generally trouble-free, there are pitfalls that complicate the reaction producing spurious results. When PCR fails it can lead to many non-specific DNA products of varying sizes that appear as a ladder or smear of bands on agarose gels. Sometimes no products form at all. Another potential problem occurs when mutations are unintentionally introduced in the amplicons, resulting in a heterogeneous population of PCR products. PCR failures can become frustrating unless patience and careful troubleshooting are employed to sort out and solve the problem(s). This protocol outlines the basic principles of PCR, provides a methodology that will result in amplification of most target sequences, and presents strategies for optimizing a reaction. By following this PCR guide, students should be able to: 
 
&#9679; Set up reactions and thermal cycling conditions for a conventional PCR experiment 
&#9679; Understand the function of various reaction components and their overall effect on a PCR experiment 
&#9679; Design and optimize a PCR experiment for any DNA template 
&#9679; Troubleshoot failed PCR experiments

PCR has emerged as a common technique in many molecular biology laboratories. Provided here is a quick guide to several conventional PCR protocols. Because each reaction is a unique experiment, optimal conditions required to generate a product vary. Understanding the variables in a reaction will greatly enhance troubleshooting efficiency, thereby increasing the chance to obtain the desired result.

Reacción en cadena: Protocolo Básico Plus Estrategias de resolución de problemas y optimización

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Métodos de recolección de leche Ratones y Reeves Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Intravenous Injections in Neonatal Mice

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are technically feasible and routine. However, some mouse models can have early onset of disease with a rapid progression that makes administration of potential therapies difficult. The temporal (or facial) vein is just anterior to the ear bud in mice and is clearly visible for the first two days after birth on either side of the head using a dissecting microscope. During this window, the temporal vein can be injected with volumes up to 50 &#956;l. The injection is safe and well tolerated by both the pups and the dams. A typical injection procedure is completed within 1-2 min, after which the pup is returned to the home cage. By the third postnatal day the vein is difficult to visualize and the injection procedure becomes technically unreliable. This technique has been used for delivery of adeno-associated virus (AAV) vectors, which in turn can provide almost body-wide, stable transgene expression for the life of the animal depending on the viral serotype chosen.

Animal models of pediatric disease can experience early onset and aggressive disease progression. Clinically relevant therapy delivery to young mouse models can be technically difficult. This protocol describes a non-invasive intravenous injection method for newborn mice within the first two postnatal days of life.

Las inyecciones intravenosas en ratones recién nacidos

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

Subclonación Plus Inserción (SPI) - Un nuevo método recombinería para la rápida construcción de la orientación de genes Vectores

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Strategy to Validate the Role of Callose-mediated Plasmodesmal Gating in the Tropic Response

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The establishment of an auxin gradient is a key event leading to phototropism and gravitropism. Previously, polar auxin transport (PAT) was shown to establish an auxin gradient in different cellular domains of plants. However, Han et al. recently demonstrated that for proper auxin gradient formation, plasmodesmal callose-mediated symplasmic connectivity between the adjacent cells is also a critical factor. In this manuscript, the strategy to elucidate the role of particular genes, which can affect phototropism and gravitropism by altering the symplasmic connectivity through modulating plasmodesmal callose synthesis, is discussed. The first step is to screen aberrant tropic responses from 3-day-old etiolated seedlings of mutants or over-expression lines of a gene along with the wild type. This preliminary screening can lead to the identification of a range of genes functioning in PAT or controlling symplasmic connectivity. The second screening involves the sorting of candidates that show altered tropic responses by affecting symplasmic connectivity. To address such candidates, the movement of a symplasmic tracer and the deposition of plasmodesmal callose were examined. This strategy would be useful to explore new candidate genes that can regulate symplasmic connectivity directly or indirectly during tropic responses and other developmental processes.

This article describes the methods for screening the genes controlling plasmodesmal permeability and hence auxin gradient during tropic response. This includes the measurement of the degree of tropic response in hypocotyl of Arabidopsis thaliana and checking plasmodesmal permeability by 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid (HPTS) loading and finally callose level assessment.

Una estrategia para validar el papel de callosa mediada Plasmodesmal de apertura de puerta en la respuesta Tropic

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Un Método De Perfusión Anterógrada Para El Aislamiento De Cardiomiocitos De Ratones

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Terminal H-reflex Measurements in Mice

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits after injuries such as spinal cord damage or stroke. An increase of the H-reflex response, together with symptoms like non-voluntary muscle contractions, pathologically augmented stretch reflex, and hypertonia in the corresponding muscle, is an indicator of post-stroke spasticity (PSS).
In contrast to rather nerve-unspecific transcutaneous measurements, here, we present a protocol to quantify the H-reflex directly at the ulnar and median nerves of the forepaw, which is applicable, with minor modifications, to the tibial and sciatic nerve of the hindpaw. Based on the direct stimulation and the adaptation to different nerves, the method represents a reliable and versatile tool to validate electrophysiological changes in spasticity-related disease models.

The clinical evaluation of spasticity based on the Hoffmann reflex (H-reflex) and using electrical stimulation of peripheral nerves is an established method. Here, we provide a protocol for a terminal and direct nerve stimulation for H-reflex quantification in the mouse forepaw.

Mediciones terminales del reflejo H en ratones

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits ...

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of pressure overload in mouse models. The main challenge of this procedure is to clearly visualize the transverse aortic arch and precisely band the target vessel. Classical approaches perform a partial thoracotomy to expose the transverse aortic arch. However, it is an open-chest model that causes a rather large surgical trauma and requires a ventilator during the surgery. To prevent unnecessary trauma and simplify the operating procedure, the aortic arch is approached via the proximal proportion of the sternum, reaching and binding the target vessel using a small self-made retractor that contains a snare. This procedure can be conducted without entering the pleura cavity and does not need a ventilator or microsurgical operation, which leaves the mice with physiological breathing patterns, simplifies the procedure, and significantly reduces operation time. Due to the less invasive approach and less operation time, mice can undergo fewer stress reactions and recover rapidly.

The present protocol describes a modified and simplified technique with a minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) procedure using a self-made retractor. This procedure can be conducted without a ventilator or microscope and introduces pressure overload, eventually leading to cardiac hypertrophy or heart failure.

Una técnica modificada para la constricción aórtica transversa en ratones

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...