Bu araştırma tarafından desteklenen Hibeler Bilim Teşvik (JSP&#39;ler) Hibe Yardım, Milli Eğitim Bakanlığı, Japonya Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Burslar-Japonya Derneği Bilimsel Araştırma Yardım KUŞ ve CREST Japonya Bilim ve Teknoloji Ajansı, Sinirbilim Japonya Merkezi (NIJC), RIKEN Öncelikli Alanlar-Bütünleştirici Beyin Araştırmaları (SHIEN) Bilimsel Araştırma Hibe Yardım ve Hibe Yardım Yardım içinde MEXT gelen Japonya. Biz bu filmi oluşturarak O&#39;hara &amp; Co ve Mariko Hayashi, yardım için teşekkür ederim.

Protokol <ol><li> Yükseltilmiş artı labirent testi için kullanılan aparat + yapılandırma ve iki kapalı bir merkezi ile silah (25 x 5 x 16 cm) karşısında dik her iki açık silah oluşmaktadır (25 x 5 x 0,5 cm) platformu (5 x 5 x 0,5 cm). Kapalı, kollar kol içine yüksek bir duvar (16 cm) var ise açık kollar, düşme sayısını azaltmak için bir çok küçük (0.5 cm) duvar var. Tüm aparatları, zeminden 50 cm (Ohara &amp; Co, Tokyo) ve boş bir yuvarlak tankı (35 cm boyunda 100 cm çapında, Morris su labirenti görev için normalde kullanılan) yerleştirilir veya düşme fareleri korumak için deney sırasında kaçmaya çalışmayın. Cihaz, plastik malzemelerin yapılır. Platform, beyaz ve duvarları şeffaf. Cihazı yükseltilmiş artı labirent malzeme ve renkler bir varyasyon vardır. </li><li> Fareler 12 saat aydınlık / karanlık döngüsü (7:00 PM ışıklar) ev sahipliği yapmaktadır, daha önce (Takao &amp; Miyakawa, 2006a). Davranışsal test 9:00 arasında yapılan ve 6:00 AM. Tüm deney fareleri davranış test odası durumuna alışmakta ilk deneme başlamadan önce davranışlarını test odası 30 dakika aktarılır. Çalışmalarda sırası genotipler arasında dengeli. Bir uygulama hayvan kullanarak test deneme iki amacı vardır. Her şeyi kayıt sistemi ile iyi olduğundan emin olun. Başka bir üniforma olarak test durumu mümkün olduğunca tutmak için. Yani, böyle bir uygulama deneme tüm oturumda ilk fare olmadan diğerleri (yani, test işlemleri ve önceki çalışmalarda hiçbir koku ipuçları tarafından yapılan önceden hiçbir sesler) ile biraz daha farklı bir durum deneyim olacaktır. Hayvanlar, Kyoto Üniversitesi Hayvan Araştırma Komitesi kurallarına göre korunur. </li><li> Davranış test odası (170 x 210 x 200 cm, Ohara &amp; Co, Tokyo) ve ses yalıtımlı ve aydınlatma seviyesi 100 lux tutulur. Bir fare, kapalı bir kol yönelik merkez labirentin merkezinde alanda yer almaktadır. Yükseltilmiş artı labirent testi, bir uzaktan kumanda ile kontrol edilir bir bilgisayara bağlı bir video kamera, kullanarak kaydedilir. Her kol ve açık kollarında harcanan zaman içine girişlerin sayısı (bir giriş fare kitle kol girer merkezi olarak tanımlanır) ve bu ölçümlerin, kaygı gibi davranış bir göstergesi olarak hizmet vermektedir. </li><li> Fare 10 dakika labirent hakkında serbestçe hareket etmesine izin verilir. Her fare test bataryası bir deneme alır. Davranışsal verileri (Görüntü AP) edinme ve analiz etmek için kullanılan uygulama, kamu malı Görüntü J programı (Wayne Rasband Ulusal Ruh Sağlığı Enstitüsü tarafından geliştirilen ve mevcut <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">dayanmaktadır</a> http://rsb.info.nih.gov/ <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">ij /</a> Tsuyoshi Miyakawa (O&#39;Hara &amp; Co, Tokyo, Japonya üzerinden kullanılabilir) tarafından güncellenmiştir). </li><li> Bu mesafe, yolculuk, her kol giriş sayısı, her kolunda harcanan zaman ve açık kollarına girdiler yüzde Resim EP program tarafından hesaplanır. </li><li> Her denemede sonra, tüm silah ve merkez alan etkin bir koku giderici ve koku alma ipuçları dayalı bir önyargı önlemek için kendisini diğer temizleme solüsyonları ile karşılaştırıldığında nispeten zayıf kokulu, süper hipokloröz su ile temizlenir. Böylece koku alma ipuçları ile ilgili kontrollü koşul altında testleri yapabilirler. </li></ol>

<ol>
	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong With My Mouse? Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 240 (2007).</li><li>Rodgers, R. J., Dalvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiety,+defense+and+the+elevated+plus-maze.">Anxiety, defense and the elevated plus-maze.</a> Neurosci Behav Rev. 21, 801-810 (1997).</li><li>Handley, S. L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+'fear'-motivated+behaviour.">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 324, 1-5 (1984).</li><li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+open:closed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat.">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Meth. 14, 149-167 (1985).</li><li>File, S. E., Pellow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+triazolobenzodiazepines+in+two+animal+tests+of+anxiety+and+in+the+holeboard.">The effects of triazolobenzodiazepines in two animal tests of anxiety and in the holeboard.</a> Br J Pharmac. 86, 729-7235 (1985).</li><li>Lister, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+plus-maze+to+measure+anxiety+in+the+mouse.">The use of a plus-maze to measure anxiety in the mouse.</a> Psychopharmacology. 92, 180-185 (1987).</li><li>Miyakawa, T., Yagi, T., Kagiyama, A., Niki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radial+maze+performance,+open-field+and+elevated+plus-maze+behaviors+in+Fyn-kinase+deficient+mice:+further+evidence+for+increased+fearfulness.">Radial maze performance, open-field and elevated plus-maze behaviors in Fyn-kinase deficient mice: further evidence for increased fearfulness.</a> Brain Res Mol Brain Res. 37, 145-150 (1996).</li><li>Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. M., De Boer, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+animal+model+of+state+anxiety:+fear-potentiated+behaviour+in+the+elevated+plus-maze.">A robust animal model of state anxiety: fear-potentiated behaviour in the elevated plus-maze.</a> Eur J Phamacol. 463, 163-175 (2003).</li><li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety.">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54, 21-30 (1996).</li><li>Holmes, A., Parmigiani, S., Ferrari, P. F., Palanza, P., Rodgers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+profile+of+wild+mice+in+the+elevated+plus-maze+test+for+anxiety.">Behavioral profile of wild mice in the elevated plus-maze test for anxiety.</a> Physiol Behav. 71, 509-516 (2000).</li><li>Tsujimura, A., Matsuki, M., Takao, K., Yamanishi, K., Miyakawa, T., Hashimoto-Gotoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+the+kf-1+gene+exhibit+increased+anxiety-+but+not+despair-like+behavior.">Mice lacking the kf-1 gene exhibit increased anxiety- but not despair-like behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 10, (2008).</li><li>Nakajima, R., Takao, K., SM, H. u. a. n. g., Takano, J., Iwata, N., Miyakawa, T., Saido, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Tüm işlemler, Kyoto Üniversitesi Hayvan Kullanım ve Bakım Komitesi tarafından kabul edildi.

Farenin genom dizisi olmasına rağmen, genlerin fonksiyonları bilinmemektedir. Genetik modifikasyon teknikleri, belirli bir genin, farelerde (; Aiba ve ark, 2007 Austin ve ark, 2004) silinmesi veya diğer manipülasyon için izin verir. Belirli bir davranışı üzerinde verilen bir genin etkisi mutant fareler (Takao ve ark, 2007 Takao ve Miyakawa, 2006b) davranışsal analizler yaparak tespit edilebilir. (Crawley, 2007 Rodgers ve Dalvi, 1997) yükseltilmiş artı labirent testi, anksiyete, tüm mevcut hayvan modellerinde en popüler testleri biridir. Bu test, davranış gibi anksiyete için tarama ve fenotipleme transgenik ve nakavt fareler (Crawley, 1999) ve ilaç keşfi için kullanılır olmuştur (. Hogg ve ark 1996; Crawley, 2007). Yükseltilmiş artı labirent testi anksiyolitik ilaçlar (Rodgers ve Dalvi Mechiel Korte ve De Boer, 2003; Crawley, 2007, 1997); tarama için güçlü bir öngörü geçerliliği vardır, girişlerin sayısı içine anksiyolitik ilaçlar, özellikle artırmak ve anksiyojenik ilaçların özellikle azaltmak kollar açık ve zaman harcadı. Toplam girdileri puan ve toplam mesafe genel faaliyet yararlı bir indeksi olarak kabul edilir. Toplam girişler skoru da anksiyete bir göstergesi olup, her iki kolunda da harcanan zaman girişleri ve yüzdeleri primer anksiyete indeksi (Dalvi ve Rodgers, 1997, Mechiel Korte ve De Boer, 2003) oluşturmaktadır. Açık ve kapalı silah aynı keşif sürücüyü uyandırmak için kabul edilir, bu nedenle açık silah kaçınma, korku yüksek seviyelerde (Rodgers ve Dalvi, 1997) indüksiyon bir sonucu olarak kabul edilir. Bu yükseltilmiş ve açık alanlarda korkusu neden farelerin kaçınma açık kollar labirent keşfetmek için düşünülüyor. 1984 yılında, Handley ve Mithani yükseltilmiş X (artı) yukarıda açıklanan labirent testi ile ön çalışma bildirdi. Orijinal test aparatı, yerden 70 cm yükseltilmiş ve her biri 45 cm uzunluğunda 10 cm genişliğinde ölçülen iki kapalı ve iki açık kollar, oluşuyordu. Ilk çalışmalarda, toplam açık / kol girişlerinin oranı (Handley ve Mithani, 1984) bildirdi. Ve fareler (Lister, 1987); Daha sonra, diğer endeksleri, sıçan (Pellow ve Dosya, 1986 Pellow ve ark, 1985) için kapalı ve açık silah harcanan açık ve kapalı silah ve zaman içine girişlerinin sayısını içeren geliştirildi . Yükseltilmiş artı labirent testi değişiklikler açık silah (50 x 10 cm) ve uzun boylu çevreleyen duvarlar ve kapalı kollar açık bir çatı ile kapalı silah (50 x 10 x 40 cm), uzatma ve tüm labirent artmıştı yüksekliği 50 cm (Pellow ve Dosya, 1986 Pellow ve ark, 1985). Halen, laboratuar, yükseltilmiş artı labirent testi cihazı iki karşısında dik her iki açık silah (çok hafif 25 x 5 cm, 0.5 cm, duvar) + şeklinde yapılandırılmış Manabe ve ark, 2000; Miyakawa ve ark, 2001; Seeger ve ark, 2004; Morishima ve ark, 2005; kapalı silah (25 x 5 x 16 cm) ve zeminden 50 cm (Miyakawa ve ark, 1996 yükseltilir Miyamoto ve ark, 2005; Ok ve ark, 2006; Hattori ve ark, 2007; Niemann ve ark, 2007; Sano ve ark, 2008; Horii ve ark, 2008; Fukuda ve ark, 2008; Ikeda ve ark, 2008). Fare + (5 cm x 5 cm) merkezine yerleştirilir ve serbestçe labirenti keşfetmek için izin verilir. 5 dakika kayıt yaygın olmasına rağmen, davranış fenotip algılamak için fırsat artırmak için 10 dakika protokolde kaydedilir. Açık ve kapalı yükseltilmiş silah, bir keşif çatışma (; Crawley, 2007 Mechiel Korte ve De Boer, 2003) neden olur. Yükseltilmiş artı labirent testi önlemler, deney sırasında bir gözlemci tarafından kaydedildi. Laboratuvarımızda, test, bir bilgisayar ve davranışsal verileri (Görüntü AP) satın aldı ve Resim EP programı kullanılarak analiz bağlı bir video kamera ile kaydedilir. Karşısında açık kapalı silah silah harcanan toplam kol girişlerin sayısı karşısında silah ve zaman açık üzerine girişlerin sayısı, kaygı gibi davranış önlem alınmasını sağlamaktadır. Biz 90&#39;dan fazla filmin gösterildiği protokolünü kullanarak genetiği mutant farelerin suşları değerlendirdi ve 5000&#39;den fazla fareler (yabani tip ve mutant fareler dahil) ham veriler büyük bir set var. Test bataryası, yabani tip littermates genellikle kontrol olarak kullanılır. Bir arka plan gerginlik olarak, C57BL/6J farelerin yaygın olarak kullanılmaktadır. Biz davranış testleri C57BL/6J farelerin veri topladı. Yükseltilmiş artı labirent testinde C57BL/6J fareler elde edilen değerler aşağıdaki gibidir (n = 914; SEM); toplam katedilen mesafe: 1547,55 14,27 cm; harcanan zaman süresi: 56,49 2.42 (kollar açık), 384,02 3.13 s (kapalı kolları), 161,90 2.17 (labirent merkezi); zaman oranı kolları açık geçirdi: 9.19 0.36%, kapalı silah harcanan zamanı oranı: 63.82% 0.52; girişlerin sayısı: 7.64 0.21 (kollar açık) 24.32 0.28 (kapalı kolları);% açık kol entries: 78.1 0.05 21.9 0.05,% silah girişlerini kapattı. C57BL/6J fareler, kolları açık, kapalı silah (p &lt;0.0001, n = 914, eşleştirilmiş-t t daha az zaman harcamakEST). Bu C57BL/6J fareler açık kollar önlemek için eğiliminde olduğunu gösterir ve kollar açık harcanan zaman, kaygı gibi davranış geçerli bir dizin olduğunu. Ayrıca, deneme sayısı, kolları açık ve merkezi bir platform harcanan zamanı etkiler, çünkü çalışmaların sırasını, genotipler arasında dengeli. Yani, endeksler, 1. fareler (p = 0,0089, n = 476) (yayınlanmamış veriler) ile karşılaştırıldığında, 3. ve 4. fare sırasında tüm artış. Protokol ile, 1661 farelerin fazla analizi bir kafes test farelerin sırayla açık kol kalış süresi (yayınlanmamış veri) önemli ölçüde etkilemez gösterdi. Yani, kafes alınan ilk farelerin performansları da önemlisi, bu ikinci, üçüncü veya son fareler farklılık yoktur. Tujimura ve ark, 2008; Nakajima ve ark basın yükseltilmiş artı labirent testi ve açık / koyu geçiş testi her ikisi de anksiyete gibi davranış değerlendirmek için kullanılır olmasına rağmen, sonuçlar her zaman onlara (Holmes ve ark, 2000 tutarlı değil. ) Örneğin, ön beyin özel kalsinörin-knockout farelerde, ışık açık / koyu geçiş test odasında azalmış bir miktar zaman harcamak, ancak yükseltilmiş artı labirent testi (Miyakawa ark kolları açık bir zaman miktarının artması. , 2003). Davranışsal test bataryası faktör analizi yükseltilmiş artı labirent testi ve açık / koyu geçiş testi, kaygı gibi davranış, açık / koyu geçiş test parlak boşluk kaygı ve anksiyete gibi açık alan gibi farklı yönlerini değerlendirmek olduğunu gösterir açık alan testi (Yamasaki ve ark, 2006 Takao ve Miyakawa, 2006b) davranış. Buna göre, açık / koyu geçiş testi ve yükseltilmiş artı labirent testi hem de davranışsal test bataryası dahildir. Crabbe ve arkadaşları mutantlar karakterize kontrolsüz değişkenler ve deneyler belirli bir laboratuvar (Crabbe ve ark, 1999) özgü sonuçlar verebilir. Laboratuarlar arasında mevcut usul farklılıkları zor çoğaltmak veya aralarında sonuçları karşılaştırmak olun. Protokol görsel belgeler oluşturulması, bu testler kullanarak laboratuvarlar boyunca ve mutant farelerde çeşitli suşları davranış fenotipleri karşılaştırmalar için kullanılan protokol standardizasyonu sağlayan, deneysel prosedürleri daha iyi anlaşılmasını değerlendirdi teşvik edecektir. Daha önce açık / koyu geçiş testi (Takao ve Miyakawa, 2006a) bir film protokol yayınlamıştır. Aynı şekilde, açık alan testi gibi diğer protokoller, film, porsolt yüzmeye testi zorla ve davranışsal test bataryası kullanmak korku klima testleri halen gelecek video dergi makaleleri gibi yayın yapılıyor.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Elevated plus maze</td>
<td>Tool</td>
<td>O&#x2019;hara & Co.</td>
<td>(none)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

elevated plus maze for mice

Fare genomu artık tamamen sıralı olmasına rağmen, beyinde ifade edilen genlerin çoğunun fonksiyonları bilinmemektedir. Verilen bir genin belirli bir davranışı üzerinde etkisi mutant farelerde davranış analizi ile tespit edilebilir. Eğer bir hedef gen, beyin olarak ifade edilir, mutant farelerin davranışsal fenotip normal davranışların genetik mekanizmayı açıklığa kavuşturduk. Yükseltilmiş artı labirent testi, davranış gibi anksiyete ölçmek için en yaygın kullanılan testler biridir. Test yükseltilmiş ve açık alanlarda farelerin doğal kaçınmanın yanı sıra, roman ortamlarda doğal kendiliğinden keşif davranışı üzerinde dayanmaktadır. Cihaz, silah ve kapalı silah, birbirine dik ortada geçti ve bir merkez alan açık oluşur. Fare tüm silah verilir ve aralarında serbestçe hareket etmesine izin verilir. Kollar açık ve açık kollarında harcanan zaman giriş sayısı, açık alan farelerde indüklenen anksiyete endeksleri olarak kullanılmaktadır. Ne yazık ki, laboratuarlar arasında mevcut usul farklılıkları zor yinelenen ve laboratuarlar arasında sonuçları karşılaştırmak. Burada, yükseltilmiş artı labirent testi için bizim protokol gösteren ayrıntılı bir film sunuyoruz. Laboratuvarımızda, 90&#39;dan fazla filmin gösterildiği protokolünü kullanarak mutant farelerin suşları değerlendirilmiştir. Bu veriler, şimdi inşa kamu veritabanının bir parçası olarak ilan edilecektir. Protokol Görselleştirme mutant farelerde çeşitli suşları davranış fenotipleri farklı laboratuvarlar ve karşılaştırmalarda kullanılan protokoller standardizasyonu sağlayan, tüm deneysel işlemin detayları daha iyi anlaşılmasını sağlamak, bu test ile değerlendirildi.

Watch this Scientific Journal Video about Elevated Plus Maze for Mice at JoVE.com

Elevated Plus Maze for Mice

Yükseltilmiş artı labirent testi, farelerde davranış gibi anksiyete ölçmek için en yaygın kullanılan testler biridir. Burada, test yapılması için ayrıntılı yordamlar gösteren bir film sunuyoruz.

Fareler için Yükseltilmiş Artı Labirent

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Research

JoVE Journal

Biology

89.7K Görüntüleme.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. Yükseltilmiş artı labirent testi, farelerde davranış gibi anksiyete ölçmek için en yaygın kullanılan testler biridir. Burada, test yapılması için ayrıntılı yordamlar gösteren bir film sunuyoruz.

Video: Elevated Plus Maze for Mice

Light/dark Transition Test for Mice

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, however, can be used to delete or manipulate a specific gene in mice. The influence of a given gene on a specific behavior can then be determined by conducting behavioral analyses of the mutant mice. As a test for behavioral phenotyping of mutant mice, the light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. The test is based on the natural aversion of mice to brightly illuminated areas and on their spontaneous exploratory behavior in novel environments. The test is sensitive to anxiolytic drug treatment. The apparatus consists of a dark chamber and a brightly illuminated chamber. Mice are allowed to move freely between the two chambers. The number of entries into the bright chamber and the duration of time spent there are indices of bright-space anxiety in mice. To obtain phenotyping results of a strain of mutant mice that can be readily reproduced and compared with those of other mutants, the behavioral test methods should be as identical as possible between laboratories. The procedural differences that exist between laboratories, however, make it difficult to replicate or compare the results among laboratories. Here, we present our protocol for the light/dark transition test as a movie so that the details of the protocol can be demonstrated. In our laboratory, we have assessed more than 60 strains of mutant mice using the protocol shown in the movie. Those data will be disclosed as a part of a public database that we are now constructing.

Visualization of the protocol will facilitate understanding of the details of the entire experimental procedure, allowing for standardization of the protocols used across laboratories and comparisons of the behavioral phenotypes of various strains of mutant mice assessed using this test.

The light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. Here, we present a movie that shows detailed procedures on how we conduct the test.

Fareler için açık / koyu Geçiş Testi

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Biyoloji

Morris Water Maze Experiment

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered non-fat milk or non-toxic tempera paint, where they must swim to a hidden escape platform. Because they are in opaque water, the animals cannot see the platform, and cannot rely on scent to find the escape route. Instead, they must rely on external/extra-maze cues. As the animals become more familiar with the task, they are able to find the platform more quickly. Developed by Richard G. Morris in 1984, this paradigm has become one of the "gold standards" of behavioral neuroscience.

The Morris water maze is a well-accepted tool used to document the involvement of the hippocampus in a behavioral task.

Morris Su Labirent Deney

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of microbiology was transformed with the advent of Anton van Leeuwenhoek&#39;s microscope, which allowed scientists to visualize prokaryotes for the first time. The development of the polymerase chain reaction (PCR) is one of those innovations that changed the course of molecular science with its impact spanning countless subdisciplines in biology. The theoretical process was outlined by Keppe and coworkers in 1971; however, it was another 14 years until the complete PCR procedure was described and experimentally applied by Kary Mullis while at Cetus Corporation in 1985. Automation and refinement of this technique progressed with the introduction of a thermal stable DNA polymerase from the bacterium Thermus aquaticus, consequently the name Taq DNA polymerase.
PCR is a powerful amplification technique that can generate an ample supply of a specific segment of DNA (i.e., an amplicon) from only a small amount of starting material (i.e., DNA template or target sequence). While straightforward and generally trouble-free, there are pitfalls that complicate the reaction producing spurious results. When PCR fails it can lead to many non-specific DNA products of varying sizes that appear as a ladder or smear of bands on agarose gels. Sometimes no products form at all. Another potential problem occurs when mutations are unintentionally introduced in the amplicons, resulting in a heterogeneous population of PCR products. PCR failures can become frustrating unless patience and careful troubleshooting are employed to sort out and solve the problem(s). This protocol outlines the basic principles of PCR, provides a methodology that will result in amplification of most target sequences, and presents strategies for optimizing a reaction. By following this PCR guide, students should be able to: 
 
&#9679; Set up reactions and thermal cycling conditions for a conventional PCR experiment 
&#9679; Understand the function of various reaction components and their overall effect on a PCR experiment 
&#9679; Design and optimize a PCR experiment for any DNA template 
&#9679; Troubleshoot failed PCR experiments

PCR has emerged as a common technique in many molecular biology laboratories. Provided here is a quick guide to several conventional PCR protocols. Because each reaction is a unique experiment, optimal conditions required to generate a product vary. Understanding the variables in a reaction will greatly enhance troubleshooting efficiency, thereby increasing the chance to obtain the desired result.

Polimeraz Zincir Reaksiyonu: Temel Protokol Plus, Sorun ve Optimizasyon Stratejileri

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Fareler ve Reeves &#39;munçağı Deer için Süt Toplama Yöntemleri

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Intravenous Injections in Neonatal Mice

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are technically feasible and routine. However, some mouse models can have early onset of disease with a rapid progression that makes administration of potential therapies difficult. The temporal (or facial) vein is just anterior to the ear bud in mice and is clearly visible for the first two days after birth on either side of the head using a dissecting microscope. During this window, the temporal vein can be injected with volumes up to 50 &#956;l. The injection is safe and well tolerated by both the pups and the dams. A typical injection procedure is completed within 1-2 min, after which the pup is returned to the home cage. By the third postnatal day the vein is difficult to visualize and the injection procedure becomes technically unreliable. This technique has been used for delivery of adeno-associated virus (AAV) vectors, which in turn can provide almost body-wide, stable transgene expression for the life of the animal depending on the viral serotype chosen.

Animal models of pediatric disease can experience early onset and aggressive disease progression. Clinically relevant therapy delivery to young mouse models can be technically difficult. This protocol describes a non-invasive intravenous injection method for newborn mice within the first two postnatal days of life.

Yenidoğan Farelerde intravenöz enjeksiyonlar

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

Alt klonlama Artı Ekleme (SPI) - Gen Hedefleme Vektörler Rapid İnşaat için Yeni Bir Yöntem Recombineering

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Strategy to Validate the Role of Callose-mediated Plasmodesmal Gating in the Tropic Response

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The establishment of an auxin gradient is a key event leading to phototropism and gravitropism. Previously, polar auxin transport (PAT) was shown to establish an auxin gradient in different cellular domains of plants. However, Han et al. recently demonstrated that for proper auxin gradient formation, plasmodesmal callose-mediated symplasmic connectivity between the adjacent cells is also a critical factor. In this manuscript, the strategy to elucidate the role of particular genes, which can affect phototropism and gravitropism by altering the symplasmic connectivity through modulating plasmodesmal callose synthesis, is discussed. The first step is to screen aberrant tropic responses from 3-day-old etiolated seedlings of mutants or over-expression lines of a gene along with the wild type. This preliminary screening can lead to the identification of a range of genes functioning in PAT or controlling symplasmic connectivity. The second screening involves the sorting of candidates that show altered tropic responses by affecting symplasmic connectivity. To address such candidates, the movement of a symplasmic tracer and the deposition of plasmodesmal callose were examined. This strategy would be useful to explore new candidate genes that can regulate symplasmic connectivity directly or indirectly during tropic responses and other developmental processes.

This article describes the methods for screening the genes controlling plasmodesmal permeability and hence auxin gradient during tropic response. This includes the measurement of the degree of tropic response in hypocotyl of Arabidopsis thaliana and checking plasmodesmal permeability by 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid (HPTS) loading and finally callose level assessment.

Bir Strateji Tropic Tepkisi kaloz aracılı Plasmodesmal Gating Rolü doğrulamak için

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Farelerden Kardiyomiyosit İzolasyonu için Antegrad Perfüzyon Yöntemi

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Terminal H-reflex Measurements in Mice

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits after injuries such as spinal cord damage or stroke. An increase of the H-reflex response, together with symptoms like non-voluntary muscle contractions, pathologically augmented stretch reflex, and hypertonia in the corresponding muscle, is an indicator of post-stroke spasticity (PSS).
In contrast to rather nerve-unspecific transcutaneous measurements, here, we present a protocol to quantify the H-reflex directly at the ulnar and median nerves of the forepaw, which is applicable, with minor modifications, to the tibial and sciatic nerve of the hindpaw. Based on the direct stimulation and the adaptation to different nerves, the method represents a reliable and versatile tool to validate electrophysiological changes in spasticity-related disease models.

The clinical evaluation of spasticity based on the Hoffmann reflex (H-reflex) and using electrical stimulation of peripheral nerves is an established method. Here, we provide a protocol for a terminal and direct nerve stimulation for H-reflex quantification in the mouse forepaw.

Farelerde Terminal H-refleks Ölçümleri

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits ...

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of pressure overload in mouse models. The main challenge of this procedure is to clearly visualize the transverse aortic arch and precisely band the target vessel. Classical approaches perform a partial thoracotomy to expose the transverse aortic arch. However, it is an open-chest model that causes a rather large surgical trauma and requires a ventilator during the surgery. To prevent unnecessary trauma and simplify the operating procedure, the aortic arch is approached via the proximal proportion of the sternum, reaching and binding the target vessel using a small self-made retractor that contains a snare. This procedure can be conducted without entering the pleura cavity and does not need a ventilator or microsurgical operation, which leaves the mice with physiological breathing patterns, simplifies the procedure, and significantly reduces operation time. Due to the less invasive approach and less operation time, mice can undergo fewer stress reactions and recover rapidly.

The present protocol describes a modified and simplified technique with a minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) procedure using a self-made retractor. This procedure can be conducted without a ventilator or microscope and introduces pressure overload, eventually leading to cardiac hypertrophy or heart failure.

Farelerde Transvers Aort Daralması için Modifiye Bir Teknik

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...