Cette recherche a été financée par des subventions en aide pour la recherche scientifique de la Société japonaise pour la promotion de la science (JSPS), Grant-in-Aid du ministère de l&#39;Education, Culture, Sports, Science et Technologie au Japon, les subventions en L&#39;aide de BIRD et CREST du Japon science et la technologie de l&#39;Agence, Grant-in-Aid de neuroinformatique Japan Center (NIJC), RIKEN et par Grant-in-Aid pour la recherche scientifique sur la recherche sur le cerveau domaines prioritaires-intégrative (Shien) - à partir de MEXT Japon. Nous remercions O&#39;hara &amp; Co. et Mariko Hayashi pour leur aide dans la création de ce film.

Protocole <ol><li> L&#39;appareil utilisé pour le test du labyrinthe, plus élevé est dans la configuration d&#39;un + et comprend deux bras ouverts (25 x 5 x 0,5 cm) à travers les uns des autres et perpendiculaires à deux bras fermés (25 x 5 x 16 cm) avec un centre plate-forme (5 x 5 x 0,5 cm). Les bras ouverts ont une très petite (0,5 cm) mur pour diminuer le nombre de chutes, alors que les bras fermés ont une haute (16 cm) mur pour enfermer le bras. L&#39;ensemble du dispositif est de 50 cm au-dessus du sol (Ohara &amp; Co., Tokyo) et est placé dans un réservoir vide circulaire (diamètre 100 cm, 35 cm de haut; normalement utilisé pour la tâche Morris labyrinthe d&#39;eau) afin de protéger les souris qui tombent ou tentative d&#39;évasion pendant l&#39;expérience. L&#39;appareil est constitué de matières plastiques. La plateforme est blanc et les murs sont transparents. Il ya une variation dans les matériaux et les couleurs de l&#39;appareil de labyrinthe en plus élevées. </li><li> Les souris sont logées avec une lumière de 12 h cycle jour / nuit (lumières à 07h00), comme décrit précédemment (Takao &amp; Miyakawa, 2006a). Tests comportementaux est réalisée 09h00-18h00. Toutes les souris expérimentales sont transférés à la salle de test de comportement 30 min avant le début du premier essai à s&#39;habituer à l&#39;état de la salle de test de comportement. L&#39;ordre des essais est contrebalancée dans les génotypes. Il ya deux fins de l&#39;essai de test en utilisant un animal pratique. La première est de s&#39;assurer que tout va bien avec le système d&#39;enregistrement. Une autre est de maintenir l&#39;état des tests aussi uniforme que possible. C&#39;est, la souris toute première fois dans toute la séance d&#39;expérience serait la condition quelque peu différent avec les autres (c&#39;est à dire, pas de bruits avant fait par les opérations de test et aucun indice odeur de précédents essais) sans un tel essai pratique. Les animaux sont entretenus selon les directives du Comité de recherche animale de l&#39;Université de Kyoto. </li><li> La salle d&#39;essai de comportement (170 x 210 x 200 cm, Ohara &amp; Co., Tokyo) est insonorisée et le niveau d&#39;éclairage est maintenu à 100 lux. Une souris est placée dans la zone centre du labyrinthe avec sa tête dirigé vers un bras fermés. Le test du labyrinthe surélevé est enregistrée à l&#39;aide d&#39;une caméra vidéo connectée à un ordinateur, qui est contrôlé par un périphérique distant. Le nombre d&#39;entrées (une entrée est défini comme étant le centre de masse de la souris entre dans le bras) dans chaque bras et le temps passé dans les bras ouverts sont enregistrés et ces mesures servent comme un indice de l&#39;anxiété comme le comportement. </li><li> Les souris sont autorisés à circuler librement sur le labyrinthe pour 10 min. Chaque souris reçoit un essai dans notre batterie de tests. L&#39;application utilisée pour l&#39;acquisition et l&#39;analyse des données comportementales (Image EP) est basé sur le programme J domaine de l&#39;image publique (développé par Wayne Rasband à l&#39;Institut national de santé mentale et disponible à <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ ij /</a> ), qui a été modifié par Tsuyoshi Miyakawa (disponible par O&#39;Hara &amp; Co., Tokyo, Japon). </li><li> La distance parcourue, le nombre d&#39;entrées dans chaque bras, le temps passé dans chaque bras, et le pour cent d&#39;entrées dans les bras ouverts sont calculées par le programme PE image. </li><li> Après chaque essai, toutes les armes et la zone du centre sont nettoyés avec de l&#39;eau hypochloreux super, qui est un agent efficace de l&#39;odeur de déménagement et a une odeur relativement faible de lui-même par rapport à d&#39;autres solutions de nettoyage, pour éviter un biais basée sur les signaux olfactifs. Ainsi nous pouvons effectuer les tests en condition contrôlée sur les signaux olfactifs. </li></ol>

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	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. 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href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+profile+of+wild+mice+in+the+elevated+plus-maze+test+for+anxiety.">Behavioral profile of wild mice in the elevated plus-maze test for anxiety.</a> Physiol Behav. 71, 509-516 (2000).</li><li>Tsujimura, A., Matsuki, M., Takao, K., Yamanishi, K., Miyakawa, T., Hashimoto-Gotoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+the+kf-1+gene+exhibit+increased+anxiety-+but+not+despair-like+behavior.">Mice lacking the kf-1 gene exhibit increased anxiety- but not despair-like behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 10, (2008).</li><li>Nakajima, R., Takao, K., SM, H. u. a. n. g., Takano, J., Iwata, N., Miyakawa, T., Saido, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Toutes les procédures ont été approuvées par l&#39;utilisation des animaux et du Comité des soins Université de Kyoto.

Bien que le génome de la souris a été séquencé, les fonctions de la plupart des gènes ne sont pas connus. Techniques de modification génétique permettent d&#39;effacement ou de toute autre manipulation d&#39;un gène spécifique chez la souris (Austin et al, 2004;.. Aiba et al, 2007). L&#39;influence d&#39;un gène donné sur un comportement spécifique peut alors être déterminée par des analyses comportementales des souris mutantes (Takao et Miyakawa, 2006b;. Takao et al, 2007). Le test du labyrinthe surélevé est l&#39;un des tests les plus populaires de tous les modèles animaux actuellement disponibles de l&#39;anxiété (Rodgers et Dalvi, 1997; Crawley, 2007). Ce test d&#39;anxiété comme le comportement a été utilisé pour le dépistage et le phénotypage des souris transgéniques et knock-out (Crawley, 1999) et pour la découverte de médicaments (Hogg et al 1996;. Crawley, 2007). Le test du labyrinthe surélevé a une validité prédictive forte pour le dépistage des drogues anxiolytiques (Rodgers et Dalvi, 1997; Mechiel Korte et De Boer, 2003; Crawley, 2007); anxiolytiques augmenter spécifiquement, et de médicaments anxiogènes spécifiquement baisse, le nombre d&#39;entrées en les bras ouverts et le temps passé là-bas. Le score total des entrées et la distance totale est considérée comme un indice utile de l&#39;activité générale. Score total des entrées est également un indice d&#39;anxiété, et les pourcentages des entrées et le temps passé dans chaque bras constituent l&#39;indice d&#39;anxiété primaire (Rodgers et Dalvi 1997, Mechiel Korte et De Boer, 2003). Les bras ouverts et fermés sont considérés pour évoquer le même lecteur exploratoires, par conséquent d&#39;éviter les bras ouverts est considéré comme un résultat de l&#39;induction de niveaux plus élevés de la peur (Rodgers et Dalvi, 1997). On pense que l&#39;aversion de la souris pour explorer les bras ouverts du labyrinthe est causée par la peur des espaces ouverts et surélevée. En 1984, Handley et Mithani rapport sur les travaux préliminaires avec le test de X élevées labyrinthe (plus) décrit ci-dessus. L&#39;appareil d&#39;essai d&#39;origine a été soulevée de 70 cm au-dessus du sol, et comprenait deux fermés et les deux bras ouverts, dont chacun mesure 45 cm de long par 10 cm de large. Dans leurs études initiales, ils ont signalé le rapport entre les entrées bras ouvert / total (Handley et Mithani, 1984). Par la suite, d&#39;autres indices ont été développés qui comprenait le nombre d&#39;entrées dans les bras fermés et ouverts et le temps passé dans les bras ouverts et fermés pour les rats (Pellow et al, 1985; Pellow et File, 1986) et la souris (Lister, 1987) . Les modifications apportées au test du labyrinthe en plus élevés notamment l&#39;allongement des deux les bras ouverts (50 x 10 cm) et les bras fermés (50 x 10 x 40 cm) avec de grands murs d&#39;enceinte et un toit ouvert sur les bras fermés, et le labyrinthe a été élevé à une hauteur de 50 cm (Pellow et al, 1985; Pellow et File, 1986). Actuellement, dans notre laboratoire, les appareils de plus de élevés test du labyrinthe est configuré sous la forme d&#39;un +, avec deux bras ouverts (25 x 5 cm, avec une très légère, de 0,5 cm, le mur) à travers les uns des autres et perpendiculaires à deux bras fermés (25 x 5 x 16 cm), et est soulevée de 50 cm au-dessus du sol (Miyakawa et al, 1996; Manabe et al, 2000; Miyakawa et al, 2001; Seeger et al, 2004; Morishima et al, 2005; Miyamoto et al, 2005; Arrow et al, 2006; Hattori et al, 2007; Niemann et al, 2007; Sano et al, 2008; Horii et al, 2008; Fukuda et al, 2008; Ikeda et al, 2008). La souris est placée dans le centre de l&#39;+ (5 cm x 5 cm) et est autorisé à explorer le labyrinthe librement. Bien que 5 minutes d&#39;enregistrement est commun, le comportement est enregistrée pendant 10 min dans notre protocole pour augmenter la possibilité de détecter le phénotype. Les bras ouverts et fermés élevées induisent un conflit d&#39;exploration (Mechiel Korte et De Boer, 2003; Crawley, 2007). Les mesures du test du labyrinthe, plus élevés sont enregistrés par un observateur lors de l&#39;expérience. Dans notre laboratoire, le test est enregistrée avec une caméra vidéo reliée à un ordinateur et les données comportementales (Image EP) sont acquises et analysées en utilisant le programme PE image. Nombre d&#39;entrées sur les bras ouverts par rapport au nombre d&#39;entrées au total le bras, et le temps passé sur les bras ouverts par rapport aux bras fermés, fournissent les mesures de l&#39;anxiété-comme le comportement. Nous avons évalué plus de 90 souches de souris mutantes transgéniques en utilisant le protocole indiqué dans le film et ont un grand ensemble de données brutes de plus de 5000 souris (y compris de type sauvage et des souris mutantes). Dans notre batterie de tests, sœurs de type sauvage sont généralement utilisées comme contrôle. Comme une souche de fond, des souris C57BL/6J sont largement utilisés. Nous avons recueilli les données de la souris C57BL/6J dans les tests comportementaux. Les valeurs obtenues à partir des souris C57BL/6J dans notre test du labyrinthe surélevé sont les suivants (n = 914, moyenne SEM), la distance totale parcourue: 1547,55 14,27 cm; durée du temps passé: 56,49 2,42 s (bras ouverts), 384,02 3,13 s (bras fermés), 161,90 2,17 s (centre labyrinthe), ratio du temps passé dans les bras ouverts: 9,19 0,36%, le ratio du temps passé dans les bras fermés: 63.82 0.52%, le nombre d&#39;entrées: 7,64 0,21 (bras ouverts), 24.32 0.28 (bras fermés); entrées% bras ouvert: 21,9 0,05% Fermé les entrées d&#39;armes: 78.1 0.05. Souris C57BL/6J passer moins de temps dans les bras ouverts que dans les bras fermés (p &lt;0,0001, n = 914, jumelé-t tHNE). Cela indique que des souris C57BL/6J ont tendance à éviter les bras ouverts, et que le temps passé dans les bras ouverts est un indice valable de l&#39;anxiété comme le comportement. De plus, l&#39;ordre des essais est contrebalancée travers génotypes, car le numéro d&#39;essai influe sur le temps passé dans les bras ouverts et la plate-forme centrale. Autrement dit, les indices de toutes les augmenter au cours des 3ème et 4ème souris par rapport à la 1ère souris (p = 0,0089, n = 476) (données non publiées). Avec notre protocole, l&#39;analyse de plus de 1661 souris ont montré que l&#39;ordre séquentiel de la souris testées dans une cage n&#39;affecte pas significativement le temps de séjour bras ouvert (données non publiées). Autrement dit, les performances de la souris premières mesures prises à partir de la cage ne diffèrent pas significativement de ceux de la seconde, la troisième ou la souris dernière. Bien que le test du labyrinthe surélevé et le test de la transition jour / nuit sont tous deux utilisés pour évaluer l&#39;anxiété comme le comportement, les résultats ne sont pas toujours compatibles entre eux (Holmes et al, 2000; Tujimura et al, 2008; Nakajima et al, sous presse ) Par exemple, prosencéphale spécifiques calcineurine-souris knockout passer une diminution de la quantité de temps dans la chambre de la lumière dans le test de la transition jour / nuit, mais une quantité accrue de temps dans les bras ouverts dans le test du labyrinthe en plus élevées (Miyakawa et al. , 2003). L&#39;analyse factorielle de notre batterie de tests comportementaux indique que le test du labyrinthe surélevé et le test de la transition jour / nuit d&#39;évaluer les différents aspects de l&#39;anxiété comme le comportement, tels que l&#39;anxiété de l&#39;espace lumineux dans le test de transition jour / nuit et les open-space, comme l&#39;anxiété comportement dans le test en plein champ (Takao et Miyakawa, 2006b; Yamasaki et al, 2006). En conséquence, à la fois le test de transition jour / nuit et le test du labyrinthe surélevé sont inclus dans notre batterie de tests comportementaux. Crabbe et ses collègues ont rapporté que des variables non contrôlées et des expériences qui caractérisent les mutants peuvent donner des résultats qui sont spécifiques à un laboratoire particulier (Crabbe et coll., 1999). Les différences de procédure qui existent entre les laboratoires, il est difficile de reproduire ou de comparer les résultats entre eux. Etablir la documentation visuelle du protocole favorisera une meilleure compréhension des procédures expérimentales, permettant la normalisation des protocoles utilisés dans les laboratoires et pour la comparaison des phénotypes comportementaux des différentes souches de souris mutantes évaluée à l&#39;aide de ces tests. Nous avions déjà publié un protocole de cinéma de l&#39;épreuve de transition jour / nuit (Takao et Miyakawa, 2006a). De même, les films d&#39;autres protocoles, tels que pour l&#39;essai en plein champ, le test de natation forcée Porsolt, et des tests de conditionnement de la peur que nous utilisons dans notre batterie de tests comportementaux sont actuellement en cours pour la publication en tant que futurs articles de revue vidéo.

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<td>Elevated plus maze</td>
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<td>O&#x2019;hara & Co.</td>
<td>(none)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
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elevated plus maze for mice

Bien que le génome de la souris est maintenant complètement séquencés, les fonctions de la plupart des gènes exprimés dans le cerveau ne sont pas connus. L&#39;influence d&#39;un gène donné sur un comportement spécifique peut être déterminée par analyse comportementale des souris mutantes. Si un gène cible est exprimé dans le cerveau, phénotype comportemental des souris mutantes pourraient élucider le mécanisme génétique des comportements normaux. Le test du labyrinthe surélevé est l&#39;un des tests les plus largement utilisés pour mesurer l&#39;anxiété comme le comportement. Le test est basé sur l&#39;aversion naturelle des souris pour les zones ouvertes et élevées, ainsi que sur leur comportement naturel exploratoires spontanées dans de nouveaux environnements. L&#39;appareil se compose de bras à bras ouverts et fermés, traversé au milieu perpendiculairement à l&#39;autre, et une zone centrale. Les souris sont donné accès à toutes les armes et sont autorisés à circuler librement entre eux. Le nombre d&#39;entrées dans les bras ouverts et le temps passé dans les bras ouverts sont utilisés comme des indices d&#39;espace ouvert anxiété induite chez la souris. Malheureusement, les différences de procédure qui existent entre les laboratoires, il est difficile de reproduire et de comparer les résultats entre les laboratoires. Ici, nous présentons un film détaillé démontrant notre protocole pour le test du labyrinthe en plus élevées. Dans notre laboratoire, nous avons évalué plus de 90 souches de souris mutantes en utilisant le protocole indiqué dans le film. Ces données seront communiquées dans le cadre d&#39;une base de données publique que nous sommes en train de construire. Visualisation du protocole favorisera une meilleure compréhension des détails de toute la procédure expérimentale, permettant de standardisation des protocoles utilisés dans les différents laboratoires et la comparaison des phénotypes comportementaux des différentes souches de souris mutantes évaluée à l&#39;aide de ce test.

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Elevated Plus Maze for Mice

Le test du labyrinthe surélevé est l&#39;un des tests les plus largement utilisés pour mesurer l&#39;anxiété comme le comportement des souris. Ici, nous présentons un film montrant les procédures détaillées pour la réalisation du test.

Elevated Maze Plus pour Souris

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Research

JoVE Journal

Biology

89.7K vues.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. Le test du labyrinthe surélevé est l'un des tests les plus largement utilisés pour mesurer l'anxiété comme le comportement des souris. Ici, nous présentons un film montrant les procédures détaillées pour la réalisation du test.

Vidéo: Elevated Plus Maze for Mice

Light/dark Transition Test for Mice

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, however, can be used to delete or manipulate a specific gene in mice. The influence of a given gene on a specific behavior can then be determined by conducting behavioral analyses of the mutant mice. As a test for behavioral phenotyping of mutant mice, the light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. The test is based on the natural aversion of mice to brightly illuminated areas and on their spontaneous exploratory behavior in novel environments. The test is sensitive to anxiolytic drug treatment. The apparatus consists of a dark chamber and a brightly illuminated chamber. Mice are allowed to move freely between the two chambers. The number of entries into the bright chamber and the duration of time spent there are indices of bright-space anxiety in mice. To obtain phenotyping results of a strain of mutant mice that can be readily reproduced and compared with those of other mutants, the behavioral test methods should be as identical as possible between laboratories. The procedural differences that exist between laboratories, however, make it difficult to replicate or compare the results among laboratories. Here, we present our protocol for the light/dark transition test as a movie so that the details of the protocol can be demonstrated. In our laboratory, we have assessed more than 60 strains of mutant mice using the protocol shown in the movie. Those data will be disclosed as a part of a public database that we are now constructing.

Visualization of the protocol will facilitate understanding of the details of the entire experimental procedure, allowing for standardization of the protocols used across laboratories and comparisons of the behavioral phenotypes of various strains of mutant mice assessed using this test.

The light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. Here, we present a movie that shows detailed procedures on how we conduct the test.

Test de transition clair / foncé pour souris

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Recherche

Biologie

Morris Water Maze Experiment

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered non-fat milk or non-toxic tempera paint, where they must swim to a hidden escape platform. Because they are in opaque water, the animals cannot see the platform, and cannot rely on scent to find the escape route. Instead, they must rely on external/extra-maze cues. As the animals become more familiar with the task, they are able to find the platform more quickly. Developed by Richard G. Morris in 1984, this paradigm has become one of the "gold standards" of behavioral neuroscience.

The Morris water maze is a well-accepted tool used to document the involvement of the hippocampus in a behavioral task.

Expérience Morris Water Maze

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of microbiology was transformed with the advent of Anton van Leeuwenhoek&#39;s microscope, which allowed scientists to visualize prokaryotes for the first time. The development of the polymerase chain reaction (PCR) is one of those innovations that changed the course of molecular science with its impact spanning countless subdisciplines in biology. The theoretical process was outlined by Keppe and coworkers in 1971; however, it was another 14 years until the complete PCR procedure was described and experimentally applied by Kary Mullis while at Cetus Corporation in 1985. Automation and refinement of this technique progressed with the introduction of a thermal stable DNA polymerase from the bacterium Thermus aquaticus, consequently the name Taq DNA polymerase.
PCR is a powerful amplification technique that can generate an ample supply of a specific segment of DNA (i.e., an amplicon) from only a small amount of starting material (i.e., DNA template or target sequence). While straightforward and generally trouble-free, there are pitfalls that complicate the reaction producing spurious results. When PCR fails it can lead to many non-specific DNA products of varying sizes that appear as a ladder or smear of bands on agarose gels. Sometimes no products form at all. Another potential problem occurs when mutations are unintentionally introduced in the amplicons, resulting in a heterogeneous population of PCR products. PCR failures can become frustrating unless patience and careful troubleshooting are employed to sort out and solve the problem(s). This protocol outlines the basic principles of PCR, provides a methodology that will result in amplification of most target sequences, and presents strategies for optimizing a reaction. By following this PCR guide, students should be able to: 
 
&#9679; Set up reactions and thermal cycling conditions for a conventional PCR experiment 
&#9679; Understand the function of various reaction components and their overall effect on a PCR experiment 
&#9679; Design and optimize a PCR experiment for any DNA template 
&#9679; Troubleshoot failed PCR experiments

PCR has emerged as a common technique in many molecular biology laboratories. Provided here is a quick guide to several conventional PCR protocols. Because each reaction is a unique experiment, optimal conditions required to generate a product vary. Understanding the variables in a reaction will greatly enhance troubleshooting efficiency, thereby increasing the chance to obtain the desired result.

Polymerase Chain Reaction: Protocole Basic Plus Stratégies de dépannage et d&#39;optimisation

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Méthodes de collecte de lait pour souris et Muntjac cerfs de Reeves

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Intravenous Injections in Neonatal Mice

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are technically feasible and routine. However, some mouse models can have early onset of disease with a rapid progression that makes administration of potential therapies difficult. The temporal (or facial) vein is just anterior to the ear bud in mice and is clearly visible for the first two days after birth on either side of the head using a dissecting microscope. During this window, the temporal vein can be injected with volumes up to 50 &#956;l. The injection is safe and well tolerated by both the pups and the dams. A typical injection procedure is completed within 1-2 min, after which the pup is returned to the home cage. By the third postnatal day the vein is difficult to visualize and the injection procedure becomes technically unreliable. This technique has been used for delivery of adeno-associated virus (AAV) vectors, which in turn can provide almost body-wide, stable transgene expression for the life of the animal depending on the viral serotype chosen.

Animal models of pediatric disease can experience early onset and aggressive disease progression. Clinically relevant therapy delivery to young mouse models can be technically difficult. This protocol describes a non-invasive intravenous injection method for newborn mice within the first two postnatal days of life.

Les injections intraveineuses de souriceaux nouveau-nés

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

Sous-clonage plus insertion (SPI) - Un Recombineering nouveau procédé pour la construction rapide de ciblage de gène Vecteurs

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Strategy to Validate the Role of Callose-mediated Plasmodesmal Gating in the Tropic Response

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The establishment of an auxin gradient is a key event leading to phototropism and gravitropism. Previously, polar auxin transport (PAT) was shown to establish an auxin gradient in different cellular domains of plants. However, Han et al. recently demonstrated that for proper auxin gradient formation, plasmodesmal callose-mediated symplasmic connectivity between the adjacent cells is also a critical factor. In this manuscript, the strategy to elucidate the role of particular genes, which can affect phototropism and gravitropism by altering the symplasmic connectivity through modulating plasmodesmal callose synthesis, is discussed. The first step is to screen aberrant tropic responses from 3-day-old etiolated seedlings of mutants or over-expression lines of a gene along with the wild type. This preliminary screening can lead to the identification of a range of genes functioning in PAT or controlling symplasmic connectivity. The second screening involves the sorting of candidates that show altered tropic responses by affecting symplasmic connectivity. To address such candidates, the movement of a symplasmic tracer and the deposition of plasmodesmal callose were examined. This strategy would be useful to explore new candidate genes that can regulate symplasmic connectivity directly or indirectly during tropic responses and other developmental processes.

This article describes the methods for screening the genes controlling plasmodesmal permeability and hence auxin gradient during tropic response. This includes the measurement of the degree of tropic response in hypocotyl of Arabidopsis thaliana and checking plasmodesmal permeability by 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid (HPTS) loading and finally callose level assessment.

Une stratégie pour valider le rôle des Callose médiée Plasmodesmal Gating dans la réponse Tropic

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Procédé de perfusion antegrade pour l’isolement de cardiomyocytes de souris

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Terminal H-reflex Measurements in Mice

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits after injuries such as spinal cord damage or stroke. An increase of the H-reflex response, together with symptoms like non-voluntary muscle contractions, pathologically augmented stretch reflex, and hypertonia in the corresponding muscle, is an indicator of post-stroke spasticity (PSS).
In contrast to rather nerve-unspecific transcutaneous measurements, here, we present a protocol to quantify the H-reflex directly at the ulnar and median nerves of the forepaw, which is applicable, with minor modifications, to the tibial and sciatic nerve of the hindpaw. Based on the direct stimulation and the adaptation to different nerves, the method represents a reliable and versatile tool to validate electrophysiological changes in spasticity-related disease models.

The clinical evaluation of spasticity based on the Hoffmann reflex (H-reflex) and using electrical stimulation of peripheral nerves is an established method. Here, we provide a protocol for a terminal and direct nerve stimulation for H-reflex quantification in the mouse forepaw.

Mesures terminales du réflexe H chez la souris

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits ...

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of pressure overload in mouse models. The main challenge of this procedure is to clearly visualize the transverse aortic arch and precisely band the target vessel. Classical approaches perform a partial thoracotomy to expose the transverse aortic arch. However, it is an open-chest model that causes a rather large surgical trauma and requires a ventilator during the surgery. To prevent unnecessary trauma and simplify the operating procedure, the aortic arch is approached via the proximal proportion of the sternum, reaching and binding the target vessel using a small self-made retractor that contains a snare. This procedure can be conducted without entering the pleura cavity and does not need a ventilator or microsurgical operation, which leaves the mice with physiological breathing patterns, simplifies the procedure, and significantly reduces operation time. Due to the less invasive approach and less operation time, mice can undergo fewer stress reactions and recover rapidly.

The present protocol describes a modified and simplified technique with a minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) procedure using a self-made retractor. This procedure can be conducted without a ventilator or microscope and introduces pressure overload, eventually leading to cardiac hypertrophy or heart failure.

Une technique modifiée pour la constriction aortique transversale chez la souris

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...