Это исследование было поддержано грантами-в-помощь для научно-исследовательского общества Японии для содействия развитию науки (JSP), Грант-в-помощь от Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий в Японии, гранты-в- Помощи от птиц и CREST Японии науке и технологиям агентства, Грант-в-помощь от Нейроинформатика Японском Центре (NIJC), RIKEN, а также субсидия для научных исследований в приоритетных областях, интегративной Brain Research (Шиен) - от MEXT в Япония. Мы благодарим О&#39;Хара и Ко и Марико Хаяси за помощь в создании этого фильма.

Протокол <ol><li> Аппарат, используемый для приподнятого крестообразного лабиринта тест в конфигурации + и включает в себя два объятьями (25 х 5 х 0,5 см) друг напротив друга и перпендикулярно двух замкнутых оружия (25 х 5 х 16 см) с центром платформы (5 х 5 х 0,5 см). Объятиями имеют очень маленький (0,5 см) стены, чтобы уменьшить количество падений, в то время закрыто оружие высокой (16 см) стену приложить руку. Весь аппарат составляет 50 см от пола (Охара &amp; Ко, Токио) и помещается в пустой бак круговой (100 см в диаметре, 35 см высотой, обычно используется для лабиринте Морриса задачу воды), чтобы защитить мышей, которые осенью или Попытка побега во время эксперимента. Аппарат изготовлен из пластмассы. Платформа белые и прозрачные стены. Существует вариация в материалах и цветах аппарата приподнятого крестообразного лабиринта. </li><li> Мыши размещены с 12-ч свет / темно-цикл (свет в 7:00 утра), как описано ранее (Такао и Миякава, 2006a). Поведенческие тестирование проводится с 9:00 до 6:00. Все подопытные мыши передаются в комнату поведение тестирование за 30 мин до начала первого судебного процесса, чтобы приучить к состоянию комнату тестирования поведения. Порядок испытания уравновешивается через генотипов. Есть две цели тест исследование с использованием практики животного. Один из них, чтобы убедиться, что все в порядке с системой регистрации. Другой способ сохранить условия тестирования максимально однородные. То есть, самая первая мышь во всей сессии будет испытывать несколько иные условия с другими людьми (то есть, без предварительного шумы сделанные тестирование операций и не имеет запаха сигналы от предыдущих испытаний), не такая практика судебного разбирательства. Животные ведутся в соответствии с руководящими принципами Комитета животных исследований Киотского университета. </li><li> Комнаты поведение тестирования (170 х 210 х 200 см, Охара и Ко, Токио) является звукоизоляция и уровня освещенности поддерживается на уровне 100 люкс. Мышь находится в центре области лабиринт с его головы направлены на закрытой руке. Приподнятого крестообразного лабиринта теста записывается с использованием видеокамеры, подключенной к компьютеру, который находится под контролем удаленного устройства. Количество записей (запись определяется как центр масс мышь входит рука) в каждую руку и время, проведенное в объятиями записываются и эти измерения служить показателем тревоги-подобное поведение. </li><li> Мыши имеют право свободно перемещаться по лабиринту в течение 10 мин. Каждая мышь получает одно испытание в нашей тестовой батареи. Приложение, используемое для получения и анализа данных о поведении (Image EP) основана на общественное достояние изображения J программы (разработанной Уэйн Rasband из Национального института психического здоровья и доступны на <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ ц /</a> ), который был изменен Tsuyoshi Миякава (доступна за счет О&#39;Хара и Ко, Токио, Япония). </li><li> Пройденное расстояние, количество записей в каждой руке, время, проведенное в каждой руке, и процентов записей в объятиями рассчитываются по программе ЭП изображение. </li><li> После каждого испытания, все оружие и центральной части моются супер хлорноватистой воды, то есть эффективное средство удаления запаха и обладает относительно слабым запахом сама сравнению с другими решениями очистки, для предотвращения предвзятости, основывающейся на обонятельные сигналы. Таким образом, можно проводить испытания в контролируемых условиях в отношении обонятельные сигналы. </li></ol>

<ol>
	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong With My Mouse? Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 240 (2007).</li><li>Rodgers, R. J., Dalvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiety,+defense+and+the+elevated+plus-maze.">Anxiety, defense and the elevated plus-maze.</a> Neurosci Behav Rev. 21, 801-810 (1997).</li><li>Handley, S. L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+'fear'-motivated+behaviour.">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 324, 1-5 (1984).</li><li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+open:closed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat.">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Meth. 14, 149-167 (1985).</li><li>File, S. E., Pellow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+triazolobenzodiazepines+in+two+animal+tests+of+anxiety+and+in+the+holeboard.">The effects of triazolobenzodiazepines in two animal tests of anxiety and in the holeboard.</a> Br J Pharmac. 86, 729-7235 (1985).</li><li>Lister, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+plus-maze+to+measure+anxiety+in+the+mouse.">The use of a plus-maze to measure anxiety in the mouse.</a> Psychopharmacology. 92, 180-185 (1987).</li><li>Miyakawa, T., Yagi, T., Kagiyama, A., Niki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radial+maze+performance,+open-field+and+elevated+plus-maze+behaviors+in+Fyn-kinase+deficient+mice:+further+evidence+for+increased+fearfulness.">Radial maze performance, open-field and elevated plus-maze behaviors in Fyn-kinase deficient mice: further evidence for increased fearfulness.</a> Brain Res Mol Brain Res. 37, 145-150 (1996).</li><li>Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. M., De Boer, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+animal+model+of+state+anxiety:+fear-potentiated+behaviour+in+the+elevated+plus-maze.">A robust animal model of state anxiety: fear-potentiated behaviour in the elevated plus-maze.</a> Eur J Phamacol. 463, 163-175 (2003).</li><li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety.">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54, 21-30 (1996).</li><li>Holmes, A., Parmigiani, S., Ferrari, P. F., Palanza, P., Rodgers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+profile+of+wild+mice+in+the+elevated+plus-maze+test+for+anxiety.">Behavioral profile of wild mice in the elevated plus-maze test for anxiety.</a> Physiol Behav. 71, 509-516 (2000).</li><li>Tsujimura, A., Matsuki, M., Takao, K., Yamanishi, K., Miyakawa, T., Hashimoto-Gotoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+the+kf-1+gene+exhibit+increased+anxiety-+but+not+despair-like+behavior.">Mice lacking the kf-1 gene exhibit increased anxiety- but not despair-like behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 10, (2008).</li><li>Nakajima, R., Takao, K., SM, H. u. a. n. g., Takano, J., Iwata, N., Miyakawa, T., Saido, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Все процедуры были одобрены Использование животных и уход комитета университета Киото.

Хотя генома мыши была последовательной, функции большинства генов не известны. Методы генетической модификации, позволяющие исключить или других манипуляций определенный ген у мышей (Остин и др., 2004;.. Айба и др., 2007). Влияние данного гена на определенное поведение может быть определена путем проведения поведенческого анализа мутантных мышей (Такао и Миякава, 2006b;. Такао и др., 2007). Приподнятого крестообразного лабиринта тест является одним из самых популярных тестов всех имеющихся в настоящее время животных моделях тревоги (Роджерс и Dalvi, 1997; Кроули, 2007). Этот тест для беспокойства-подобное поведение был использован для скрининга и фенотипирование трансгенных и нокаутных мышей (Кроули, 1999) и для открытия новых лекарств (Хогг и др., 1996;. Кроули, 2007). Приподнятого крестообразного лабиринта тест имеет сильную прогностическая валидность для скрининга анксиолитического средства (Роджерс и Dalvi, 1997; Mechiel Корте и Де Бур, 2003; Кроули, 2007); анксиолитическое наркотики специально увеличиваться, и anxiogenic наркотики специально уменьшаться, количество записей в распростертыми объятиями и время, проведенное там. Общий балл записей и общее расстояние считаются полезными индекса общей активности. Общий счет записи также индекс тревожности, и проценты от записи и время, проведенное в каждой руке составляют индекс первичной тревоги (Роджерс и Dalvi, 1997, Mechiel Корте и Де Бур, 2003). Открытые и закрытые оружия считаются вызывают такое же поисковой диска, поэтому избежании объятиями, как полагают, в результате индукции более высокие уровни страха (Роджерс и Dalvi, 1997). Считается, что неприятие мышей для изучения объятиями лабиринта вызвано боязнь открытых пространств и повышенный. В 1984 году Хэндли и Mithani сообщил о предварительной работе с повышенной X (плюс) лабиринт испытанию, описанному выше. Оригинальные испытательной аппаратуры был поднят 70 см над полом, и состоял из двух закрытых и два открытых оружия, каждое из которых измеряется длиной 45 см на 10 см в ширину. В своих первоначальных исследований, они сообщили, число открытой / всего записей руки (Хэндли и Mithani, 1984). Впоследствии другие показатели были разработаны, которые включали количество записей в закрытые и открытые руки и время, проведенное в закрытых и открытых оружие для крыс (Пеллоу и др., 1985; Пеллоу и файлов, 1986) и мышей (Lister, 1987) . Изменения приподнятого крестообразного лабиринта тест включены удлинение и объятьями (50 х 10 см) и закрылся оружия (50 х 10 х 40 см), с высокими стенами и открытой крышей на закрытой руки и весь лабиринт был возведен на высоту до 50 см (Пеллоу и др., 1985; Пеллоу и файлов, 1986). В настоящее время в нашей лаборатории, приподнятого крестообразного лабиринта испытательной аппаратуры настраивается в форме + с двумя объятиями (25 х 5 см, с очень небольшим, 0,5-см, стенки) друг напротив друга и перпендикулярной к двум закрыты оружия (25 х 5 х 16 см), и поднял 50 см над уровнем пола (Миякава и др., 1996; Manabe и др., 2000; Миякава и др., 2001; Сигер и др., 2004; Моришима и др., 2005; Миямото и др., 2005; стрелки и др., 2006; Хаттори и др., 2007; Ниманн и др., 2007; Сано и др., 2008; Horii и др., 2008; Фукуда и др., 2008; Икеда и др.; 2008). Мышь находится в центре + (5 см х 5 см) и имеет право исследовать лабиринт свободно. Хотя 5 мин записи является обычным явлением, поведение фиксируется в течение 10 минут в нашем протоколе увеличить возможность обнаружить фенотипа. Открытые и закрытые повышенных оружия вызывают исследования конфликтов (Mechiel Корте и Де Бур, 2003; Кроули, 2007). Меры приподнятого крестообразного лабиринта теста фиксируются наблюдателем во время эксперимента. В нашей лаборатории тест, записанные с видеокамеры, подключенной к компьютеру и поведенческие данные (изображения EP) приобретаются и проанализированы с помощью программы изображения EP. Количество записей на объятиями против общее количество записей руку, и время, затраченное на объятиями по сравнению с закрытыми руками, обеспечить меры тревожно-подобное поведение. Мы оценили более 90 штаммов генно-инженерного мутантных мышей, используя протокол показано в фильме и имеют большой набор исходных данных для более чем 5000 мышей (в том числе дикого типа и мутантных мышей). В нашей тестовой батареи, дикого типа помета, как правило, используется в качестве контроля. Как фон напряжения, C57BL/6J мышей широко используются. Мы собрали данные мышей C57BL/6J в поведенческих тестах. Значений, полученных от мышей C57BL/6J в нашей приподнятого крестообразного лабиринта тест выглядит следующим образом (п = 914, средний SEM); общее расстояние, пройденное: 1547,55 14,27 см, длительность времени, потраченного: 56,49 +2,42 с (объятиями), 384,02 3,13 сек (закрытые оружия), 161,90 2,17 с (лабиринт в центре); соотношение времени, проведенного в объятиями: 9.19 0.36%, соотношение времени, проведенного в закрытом оружия: 63,82 +0,52%, количество записей: 7.64 0.21 (объятиями), 24,32 0,28 (закрытые оружия);% открытых записей руку: 21,9 0,05% закрытого оружия записи: 78,1 0.05. C57BL/6J мышей тратить меньше времени на объятия, чем в закрытых оружия (р &lt;0,0001, п = 914, парных т тEST). Это означает, что C57BL/6J мышей правило, чтобы избежать распростертыми объятиями, и что время, проведенное в объятиями является допустимым индексом тревожно-подобное поведение. Кроме того, порядок испытаний уравновешивается через генотипов, потому что судебный процесс влияет количество времени, проведенного в объятиями и центр платформы. То есть, все индексы роста в течение 3 и 4 мышей по сравнению с первым мышей (р = 0,0089, п = 476) (неопубликованные данные). С нашей протокол, анализа более чем 1661 мышах показали, что последовательный порядок мышах испытания в клетке не оказывает существенного влияния открытое время пребывания руки (неопубликованные данные). То есть, выступления первых мышей, взятых из клетки существенно не отличается от второго, третьего или последнего мышей. Хотя приподнятого крестообразного лабиринта и тест светлый / темный переход теста оба используются для оценки тревоги, как поведение, результаты не всегда согласуются между ними (Holmes и др., 2000; Tujimura и др., 2008; Накаджима и др., в печати ) Например, передний мозг конкретных кальциневрина-нокаутных мышей тратить уменьшилось количество времени в свет камеры в светлый / темный переход тест, но увеличилось количество времени в объятиями в приподнятого крестообразного лабиринта тест (Миякава и соавт. , 2003). Факторный анализ наши поведенческие батареи тест показывает, что повышенный плюс тест лабиринт и светлый / темный переход тест оценки различных аспектов тревоги, как поведение, например, ярко-пространство беспокойство в светлый / темный переход тестирования и открытого пространства, тревоги, как поведение в открытых полевых испытаний (Такао и Миякава, 2006b; Ямасаки и др., 2006). Таким образом, как светлый / темный тест перехода и приподнятого крестообразного лабиринта тест включены в наши поведенческие тест батареи. Крэбб и коллеги сообщили, что неконтролируемые переменные и экспериментов характеризующие мутанты могут дать результаты, которые являются специфическими для конкретной лаборатории (Крэбб и соавт., 1999). Процедурные различия, существующие между лабораториями сделать его трудно воспроизвести или сравнить результаты между ними. Создание визуальных документации протокол будет способствовать лучшему пониманию экспериментальные процедуры, позволяющие по стандартизации протоколов, используемых по всей лаборатории и для сравнения поведенческих фенотипов различных штаммов мутантных мышей оценивали с помощью этих тестов. Мы ранее опубликованных фильм протокол светлый / темный переход тест (Такао и Миякава, 2006a). Кроме того, фильмы других протоколов, например, для открытых полевых испытаний, porsolt вынуждены плавать тест, и страх кондиционирования тестов, которые мы используем в наших поведенческих тест батареи в настоящее время делается для публикации в качестве будущих журнальных статей видео.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Elevated plus maze</td>
<td>Tool</td>
<td>O&#x2019;hara & Co.</td>
<td>(none)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

elevated plus maze for mice

Хотя генома мыши в настоящее время полностью секвенированы, функции большинства генов, выраженных в мозг не известны. Влияние данного гена на определенное поведение может быть определено по особенностям их поведения мутантных мышей. Если целевой ген экспрессируется в головном мозге, поведенческий фенотип мыши-мутанты могут выяснить генетический механизм нормального поведения. Приподнятого крестообразного лабиринта тест является одним из наиболее широко используемых тестов для измерения тревоги подобного поведения. Тест основан на естественное отвращение мышей для открытых и возвышенных участках, а также на их естественной спонтанной исследовательское поведение в романе средах. Аппарат состоит из объятиями и закрылся руками, скрещенными в середине перпендикулярно друг к другу, и центр области. Мыши имеют доступ ко всем оружием, и им разрешается свободно перемещаться между ними. Количество записей в объятиями и время, проведенное в объятиями используются в качестве индексов открытого пространства-индуцированной тревоги у мышей. К сожалению, процедурные различия, существующие между лабораториями затрудняют двух экземплярах и сравнить результаты в разных лабораториях. Здесь мы представляем подробный фильм демонстрирует нашу протокол для приподнятого крестообразного лабиринта теста. В нашей лаборатории мы оценили более 90 штаммов мутантных мышей, используя протокол показано в фильме. Эти данные будут раскрыты как часть базы данных, которую мы сейчас строительство. Визуализация протокол будет способствовать лучшему пониманию деталей всей экспериментальной процедуры, позволяющие по стандартизации протоколов, используемых в разных лабораториях и сравнение поведенческих фенотипов различных штаммов мутантных мышей оценивали с помощью этого теста.

Watch this Scientific Journal Video about Elevated Plus Maze for Mice at JoVE.com

Elevated Plus Maze for Mice

Приподнятого крестообразного лабиринта тест является одним из наиболее широко используемых тестов для измерения тревоги-подобное поведение у мышей. Здесь мы представляем фильм, показывающий подробные процедуры для проведения испытаний.

Повышенные Плюс Лабиринт для мышей

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Research

JoVE Journal

Biology

89.3K Views.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. Приподнятого крестообразного лабиринта тест является одним из наиболее широко используемых тестов для измерения тревоги-подобное поведение у мышей. Здесь мы представляем фильм, показывающий подробные процедуры для проведения испытаний.

Video: Elevated Plus Maze for Mice

Light/dark Transition Test for Mice

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, however, can be used to delete or manipulate a specific gene in mice. The influence of a given gene on a specific behavior can then be determined by conducting behavioral analyses of the mutant mice. As a test for behavioral phenotyping of mutant mice, the light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. The test is based on the natural aversion of mice to brightly illuminated areas and on their spontaneous exploratory behavior in novel environments. The test is sensitive to anxiolytic drug treatment. The apparatus consists of a dark chamber and a brightly illuminated chamber. Mice are allowed to move freely between the two chambers. The number of entries into the bright chamber and the duration of time spent there are indices of bright-space anxiety in mice. To obtain phenotyping results of a strain of mutant mice that can be readily reproduced and compared with those of other mutants, the behavioral test methods should be as identical as possible between laboratories. The procedural differences that exist between laboratories, however, make it difficult to replicate or compare the results among laboratories. Here, we present our protocol for the light/dark transition test as a movie so that the details of the protocol can be demonstrated. In our laboratory, we have assessed more than 60 strains of mutant mice using the protocol shown in the movie. Those data will be disclosed as a part of a public database that we are now constructing.

Visualization of the protocol will facilitate understanding of the details of the entire experimental procedure, allowing for standardization of the protocols used across laboratories and comparisons of the behavioral phenotypes of various strains of mutant mice assessed using this test.

The light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. Here, we present a movie that shows detailed procedures on how we conduct the test.

Свет / темно Переход Тест для мышей

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Morris Water Maze Experiment

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered non-fat milk or non-toxic tempera paint, where they must swim to a hidden escape platform. Because they are in opaque water, the animals cannot see the platform, and cannot rely on scent to find the escape route. Instead, they must rely on external/extra-maze cues. As the animals become more familiar with the task, they are able to find the platform more quickly. Developed by Richard G. Morris in 1984, this paradigm has become one of the "gold standards" of behavioral neuroscience.

The Morris water maze is a well-accepted tool used to document the involvement of the hippocampus in a behavioral task.

Моррис воды Лабиринт Эксперимент

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of microbiology was transformed with the advent of Anton van Leeuwenhoek&#39;s microscope, which allowed scientists to visualize prokaryotes for the first time. The development of the polymerase chain reaction (PCR) is one of those innovations that changed the course of molecular science with its impact spanning countless subdisciplines in biology. The theoretical process was outlined by Keppe and coworkers in 1971; however, it was another 14 years until the complete PCR procedure was described and experimentally applied by Kary Mullis while at Cetus Corporation in 1985. Automation and refinement of this technique progressed with the introduction of a thermal stable DNA polymerase from the bacterium Thermus aquaticus, consequently the name Taq DNA polymerase.
PCR is a powerful amplification technique that can generate an ample supply of a specific segment of DNA (i.e., an amplicon) from only a small amount of starting material (i.e., DNA template or target sequence). While straightforward and generally trouble-free, there are pitfalls that complicate the reaction producing spurious results. When PCR fails it can lead to many non-specific DNA products of varying sizes that appear as a ladder or smear of bands on agarose gels. Sometimes no products form at all. Another potential problem occurs when mutations are unintentionally introduced in the amplicons, resulting in a heterogeneous population of PCR products. PCR failures can become frustrating unless patience and careful troubleshooting are employed to sort out and solve the problem(s). This protocol outlines the basic principles of PCR, provides a methodology that will result in amplification of most target sequences, and presents strategies for optimizing a reaction. By following this PCR guide, students should be able to: 
 
&#9679; Set up reactions and thermal cycling conditions for a conventional PCR experiment 
&#9679; Understand the function of various reaction components and their overall effect on a PCR experiment 
&#9679; Design and optimize a PCR experiment for any DNA template 
&#9679; Troubleshoot failed PCR experiments

PCR has emerged as a common technique in many molecular biology laboratories. Provided here is a quick guide to several conventional PCR protocols. Because each reaction is a unique experiment, optimal conditions required to generate a product vary. Understanding the variables in a reaction will greatly enhance troubleshooting efficiency, thereby increasing the chance to obtain the desired result.

Полимеразной цепной реакции: основные протокол Plus Устранение неполадок и оптимизация стратегии

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Методы сбора молока для мышей и Ривза олень мунжтак

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Intravenous Injections in Neonatal Mice

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are technically feasible and routine. However, some mouse models can have early onset of disease with a rapid progression that makes administration of potential therapies difficult. The temporal (or facial) vein is just anterior to the ear bud in mice and is clearly visible for the first two days after birth on either side of the head using a dissecting microscope. During this window, the temporal vein can be injected with volumes up to 50 &#956;l. The injection is safe and well tolerated by both the pups and the dams. A typical injection procedure is completed within 1-2 min, after which the pup is returned to the home cage. By the third postnatal day the vein is difficult to visualize and the injection procedure becomes technically unreliable. This technique has been used for delivery of adeno-associated virus (AAV) vectors, which in turn can provide almost body-wide, stable transgene expression for the life of the animal depending on the viral serotype chosen.

Animal models of pediatric disease can experience early onset and aggressive disease progression. Clinically relevant therapy delivery to young mouse models can be technically difficult. This protocol describes a non-invasive intravenous injection method for newborn mice within the first two postnatal days of life.

Внутривенных инъекций в новорожденных мышей

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

Субклонирование Плюс погружения (SPI) - Роман Recombineering способом быстрого строительства генного таргетинга векторы

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Strategy to Validate the Role of Callose-mediated Plasmodesmal Gating in the Tropic Response

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The establishment of an auxin gradient is a key event leading to phototropism and gravitropism. Previously, polar auxin transport (PAT) was shown to establish an auxin gradient in different cellular domains of plants. However, Han et al. recently demonstrated that for proper auxin gradient formation, plasmodesmal callose-mediated symplasmic connectivity between the adjacent cells is also a critical factor. In this manuscript, the strategy to elucidate the role of particular genes, which can affect phototropism and gravitropism by altering the symplasmic connectivity through modulating plasmodesmal callose synthesis, is discussed. The first step is to screen aberrant tropic responses from 3-day-old etiolated seedlings of mutants or over-expression lines of a gene along with the wild type. This preliminary screening can lead to the identification of a range of genes functioning in PAT or controlling symplasmic connectivity. The second screening involves the sorting of candidates that show altered tropic responses by affecting symplasmic connectivity. To address such candidates, the movement of a symplasmic tracer and the deposition of plasmodesmal callose were examined. This strategy would be useful to explore new candidate genes that can regulate symplasmic connectivity directly or indirectly during tropic responses and other developmental processes.

This article describes the methods for screening the genes controlling plasmodesmal permeability and hence auxin gradient during tropic response. This includes the measurement of the degree of tropic response in hypocotyl of Arabidopsis thaliana and checking plasmodesmal permeability by 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid (HPTS) loading and finally callose level assessment.

Стратегия для обоснования роли каллозы опосредованной Plasmodesmal воротного в Tropic Response

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The ...

Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful in cases of attenuated, oligo- or mono-symptomatic forms of CF usually diagnosed later in life, and of CF-related disorders such as congenital bilateral absence of vas deferens, idiopathic chronic pancreatitis, allergic bronchopulmonary aspergillosis, and bronchiectasis. In both clinical and preclinical settings, the test has been used as a biomarker to quantify responses to targeted therapeutic strategies for CF. Adapting the test to a mouse is challenging and can entail an associated mortality. This paper describes the adequate depth of anesthesia required to maintain a nasal catheter in situ for continuous perfusion. It lists measures to avoid broncho-aspiration of solutions perfused in the nose. It also describes the animal care at the end of the test, including administration of a combination of antidotes of the anesthetic drugs, leading to rapidly reversing the anesthesia with full recovery of the animals. Representative data obtained from a CF and a wild-type mouse show that the test discriminates between CF and non-CF. Altogether, the protocol described here allows reliable measurements of the functional status of trans-epithelial chloride and sodium transporters in spontaneously breathing mice, as well as multiple tests in the same animal while reducing test-related mortality.

Here, we present a protocol to measure nasal potential difference in mice. The test quantifies the function of transmembrane ion transporters such as the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and the epithelial sodium channel. It is valuable to evaluate the efficacy of novel therapies for cystic fibrosis.

Носовые разности потенциалов для количественного определения транс эпителиальных ионный транспорт в мышей

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Метод перфузии Antegrade для выделения кардиомиоцитов у мышей

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Terminal H-reflex Measurements in Mice

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits after injuries such as spinal cord damage or stroke. An increase of the H-reflex response, together with symptoms like non-voluntary muscle contractions, pathologically augmented stretch reflex, and hypertonia in the corresponding muscle, is an indicator of post-stroke spasticity (PSS).
In contrast to rather nerve-unspecific transcutaneous measurements, here, we present a protocol to quantify the H-reflex directly at the ulnar and median nerves of the forepaw, which is applicable, with minor modifications, to the tibial and sciatic nerve of the hindpaw. Based on the direct stimulation and the adaptation to different nerves, the method represents a reliable and versatile tool to validate electrophysiological changes in spasticity-related disease models.

The clinical evaluation of spasticity based on the Hoffmann reflex (H-reflex) and using electrical stimulation of peripheral nerves is an established method. Here, we provide a protocol for a terminal and direct nerve stimulation for H-reflex quantification in the mouse forepaw.

Терминальные измерения H-рефлекса у мышей

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits ...